Effects of Zaizhang－Ⅰ，a Traditional Chinese Medicine，on Immunologically Mediated Aplastic Anemia in Mice

Immunologically mediated aplastic anemia in mice were used as animal models to study the the curative effect of Zaizhang-Ⅰin term of the changes of two pathogenetic aspects in aplastic mice,namely the defciency of hematopoietic stem cells and the disturbance of immunology. Our results demonstrated that in aplastic mice, after treatment by Zaizhang-Ⅰ,the loss of mature hematopoietice cells (WBC, RBC, Plt) were reduced, and marrow cellular cytosis,and their clinical findings were improved, indicating a partial remission. The present data show that its curative mechanism lies in the action of promoting the recovery of colony forming unit-spleen (CFU-S) and reversing immunologically-induced plasma colony forming unit granulocyte/macrophage (CFU-GM ) inhibitory activity. Natural killer cells activity (Nka) and interleukin-2 tumor necrosis factors (TNF) were also examined to further understand the mechanism by which Zaizhang-Ⅰreverse plasma hematopoietic activity.

益肾生血片对再生障碍性贫血模型小鼠造血细胞作用的研究

目的 探讨益肾生血片(YSSXT)治疗再生障碍性贫血(AA)的作用机理。方法 用马利兰造成小鼠AA模型,观察该药对AA模型小鼠造血细胞的作用。结果 显示益肾生血片对马利兰引起的造血损伤小鼠骨髓造血干细胞(CFUmix)、粒系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)、有核细胞(MNC)计数、巨核细胞计数和外周血白细胞、血色素和血小板数量的恢复有明显促进作用。结论 保进骨髓造血干细胞增殖是益肾生血片治疗AA的机制之一。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型制备条件的实验比较研究

目的对比研究影响小鼠再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)模型造模过程的主要因素,优化模型条件。方法采用钴-60γ射线照射联合免疫细胞静脉注射,建立免疫介导的小鼠AA模型,以外周血全血细胞分类计数和网织红细胞比例为检测指标,对造模影响因素进行考察;并以AA临床治疗药物环孢素验证模型可靠性。结果射线照射剂量、动物性别、注射免疫细胞类别、指标检测时间点均是影响造模程度与数据质量的重要因素,根据本研究,最优模型条件为♂小鼠5.80 Gy钴-60γ射线照射联合胸腺-脾细胞2∶1静脉注射,造模后第二周进行指标检测。结论本研究有利于实验人员在AA药理学研究中对实验过程进行更为有效的控制、保证数据质量,为AA治疗药物筛选评价与机制研究的高效进行提供保障。

骨髓抑制性贫血小鼠模型的研究

目的建立适用疗效观察的骨髓抑制性贫血小鼠模型。方法本实验采用BALB小鼠80只,分10组,每组8只,通过正常组、单纯照射组、单纯环磷酰胺注射组、照射加环磷酰胺注射组和照射加环磷酰胺加氯霉素注射组等复合造模比较骨髓造血情况。结果与正常组相比,所有造模组的血像和有核细胞数都显著性降低。根据死亡率和全血细胞数分析,复合造模照射加环磷酰胺组的效果最为突出。结论复合造模照射加环磷酰胺注射组是一种小鼠全血细胞下降骨髓抑制性贫血的理想模型。

四物汤对环磷酰胺所致贫血小鼠肝细胞凋亡及Caspase3表达的影响

【目的】观察四物汤对环磷酰胺所致贫血小鼠肝细胞凋亡及凋亡执行分子Caspase3表达的影响。【方法】选用48只C57BL/6J小鼠随机分为空白组,模型组,四物汤低、中、高剂量组(剂量分别为5、10、20 g·kg-1·d-1),肌苷(阳性对照,剂量为0.06 g·kg-1·d-1)组。以腹腔注射环磷酰胺(剂量为0.1 g/kg)复制贫血模型,采用TUNEL法检测肝细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3表达。【结果】四物汤可显著升高贫血模型小鼠外周血红细胞计数、白细胞计数以及血红蛋白含量,显著降低肝细胞凋亡百分率,下调Caspase3蛋白表达(均P﹤0.05)。【结论】四物汤补益肝血的作用机理可能与其减少肝细胞凋亡有关。

氨磷汀对苯诱发小鼠再生障碍性贫血的保护作用

目的探讨建立苯诱发小鼠再生障碍性贫血(再障)模型的方法,观察苯诱发再障的病理改变。方法建立苯诱发小鼠再障模型。(1)于雄性CD1小鼠每周三次注射苯+玉米油混合液,按给苯剂量不同分为四组:B1组(0.5ml/kg)、B2组(1.0ml/kg)、B3组(1.5ml/kg)、B4组(2.0ml/kg),以单纯注射玉米油组(A组)为对照组;氨磷汀干预组(C组),每次给苯半小时前,腹腔注射氨磷汀(200mg/kg);各组均以玉米油补足4ml/kg;各实验组分别于给苯前及给苯10、15、20、25次两天后,称重动物,观察小鼠一般情况,外周血细胞计数和白细胞分类计数,尸检后取一根胫骨、肝和脾(并称重),进行组织病理学观察以及PCNA、TUNEL检测。结果(1)与对照组相比,各造模组小鼠均有部分指标改变,但仅有B4组在给苯25次后全部指标与对照组相比有显著性差异。各造模组小鼠外周血细胞计数随给苯剂量及次数增加表现出不同程度的下降趋势;B4组体重和脾体比值分别比对照组A下降18.51%、63.86%(P<0.01),白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板和网织红细胞绝对值分别下降74.97%(P<0.01)、41.66%(P<0.01)、30.96%(P<0.01)、24.77%(P<0.05)和41.47%(P<0.05)(P<0.01);部分骨髓涂片出现油滴,骨髓细胞形态学和组织病理学观察均显示造血细胞减少,非造血细胞增加,肝、脾出现再障的病理改变;(2)氨磷汀干预组与再障组相比,小鼠一般情况、肝脾和骨髓的病理变化等各项指标均有明显改善,PC-NA、TUNEL检测在对照组、再障组和干预组之间结果有显著性差异。结论于CD1小鼠每周3次皮下注射2ml/kg体重的苯,共25次,建立了苯诱发小鼠再生障碍性贫血模型的实验方案;氨磷汀在体内对苯引起的再障具有一定的保护作用。

鹿龙再生汤对再障小鼠外周血单个核细胞及脾teff细胞T-bet和GATA-3基因表达的影响

目的探讨鹿龙再生汤对再生障碍性贫血(简称再障)模型小鼠外周血单个核细胞以及脾CD4+CD25-细胞(teff细胞)中T-bet、GATA-3基因表达的影响。方法通过IFN-γ腹腔注射加白消安灌胃的方法建造40只再障小鼠模型,分别予同体积的生理盐水、一般浓度、5倍浓度和10倍浓度的鹿龙再生汤进行灌胃治疗,分别归为再障组、再障小剂量组、再障中剂量组和再障大剂量组(n=10);另取40只正常小鼠按上述方法进行分组处理,分别归为正常组、正常小剂量组、正常中剂量组和正常大剂量组(n=10)。通过骨髓活检病理学检查观察用药后各组小鼠的骨髓造血变化,免疫磁珠分选各组小鼠脾teff细胞,利用RT-PCR技术检测各组小鼠外周血单个核细胞以及脾teff细胞T-bet、GATA-3基因mRNA的表达情况。结果 (1)与再障组相比,再障中剂量组和再障大剂量组小鼠的骨髓造血有所恢复,尤其是再障大剂量组。(2)再障大剂量组小鼠的外周血单个核细胞以及脾teff细胞T-bet基因mRNA的表达、T-bet/GATA-3的比值较再障组均明显下降(P<0.05),而GATA-3基因mRNA的表达明显上调(P<0.05)。结论大剂量鹿龙再生汤可改善再障小鼠骨髓造血功能,可能是通过调节再障小鼠外周血单个核细胞及脾teff细胞的T-bet、GATA-3基因的表达来实现。

四物汤补血有效部位及对红系特异性转录因子GATA-1 mRNA表达的影响

目的探讨四物汤补血有效部位及对红系特异性转录因子GATA-1mRNA表达的影响。方法采用极性由小到大的三种溶剂石油醚、醋酸乙酯及水分别提取四物汤组分,用半定量RT-PCR分析红系转录因子GATA-1mRNA表达水平。结果与血虚小鼠模型组及石油醚提取物给药组比较,"四物汤"水提物能明显增强血虚小鼠模型红系造血,亦能显著上调红系转录因子GATA-1mRNA的表达(P<0.01)。结论“四物汤”水提物系补血有效部位,GATA-1mRNA过表达可能在介导"四物汤"促红系造血中起重要作用。

免疫介导的再生障碍性贫血小鼠模型脾脏T-bet的表达水平及其意义

目的探讨在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)小鼠模型中,T-bet蛋白在脾脏的表达水平及意义。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组和AA模型组,每组20只,用免疫组织化学方法检测AA模型组脾脏组织石蜡切片中T-bet蛋白表达水平,并对T-bet蛋白与骨髓造血功能进行相关性分析。结果AA模型组小鼠脾脏组织石蜡切片中T-bet蛋白表达水平[(4.25±0.50)%]明显高于正常对照组[(0.78±0.15)%,P<0.01]。②AA模型组小鼠脾脏T-bet蛋白表达与中性粒细胞绝对值(ANC)及网织红细胞相对值呈负相关(r分别为-0.510和-0.648,均P<0.05),而与血小板数无明显的线性相关关系。结论在AA发病机制中T-bet可能起一定作用。

再生障碍性贫血小鼠骨髓基质细胞分泌RCAS1水平及其意义

目的研究免疫介导再生障碍性贫血(AA)小鼠骨髓基质细胞RCAS1表达及其意义。方法建立免疫介导小鼠再障模型。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测再障小鼠骨髓基质细胞RCAS1基因表达,流式细胞术检测再障小鼠骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)的凋亡。结果①AA小鼠骨髓基质细胞均有RCAS1的表达,表达强度为2.17±0.87,明显高于对照组0.96±0.22(P<0.01)。②AA骨髓基质细胞培养上清作用后正常小鼠BMMNC凋亡率为(8.85±1.05)%,明显高于对照组的(2.10±0.25)%(P<0.01)。结论AA骨髓基质细胞RCAS1高表达,其培养上清作用后正常小鼠BMMNC凋亡增加,提示RCAS1可能参与了再障造血功能衰竭。

贫血冲剂对脾虚模型小鼠全血微量元素变化探讨

对常用６１种中药作微量元素检测．发现补血滋肾类药铁含量丰富，而健脾益气类药铁和锌含量均高．制备脾虚模型小鼠以贫血冲剂喂养一周及二周，分别检测其全血中铁、锌、钙含量．发现喂养一周．脾虚组与对照组全血铁，锌．钙含员变化不大（Ｐ＞０．０５），而喂养二周，脾成组全血铁、锌、钙含量明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。

骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)治疗再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)模型鼠的可行性。方法建立免疫介导AA小鼠模型。输入体外增殖培养的BALB/c小鼠骨髓MSC,作为MSC组,15只;用未治疗的AA模型小鼠作为第一对照组(模型组),15只;正常BALB/c小鼠作为第二对照组(正常组),10只。把MSC输注到实验组小鼠体内,分别于第1周、第2周、第3周、第4周观察各组小鼠的存活率、血常规、骨髓形态学变化等各项指标。结果模型组小鼠,3只于第2周内死亡,7只于第3周内死亡,2只于第4周内死亡,28d存活率20.0%;MSC组,4只于第3周内死亡,28d存活率73.3%,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AA小鼠模型组与MSC组在8d时外周血象明显下降,14d时模型组外周血象仍明显降低,而MSC组开始回升,至28d血象基本恢复正常。骨髓行形态学检查显示模型组骨髓增生明显减低,有核细胞数明显减少,由大量脂肪细胞填充骨髓,而MSC组骨髓增生活跃,脂肪细胞较少。结论骨髓间充质干细胞可以提高再生障碍性贫血小鼠存活率,改善骨髓造血功能,对再生障碍性贫血模型鼠有治疗作用。