中药及保健食品中PDE_5抑制剂检测的再研究

目的：尝试优化和建立可同时快速检测多种PDE5抑制剂类非法添加化学成分的方法。方法：分别采用TLC法、HPLC-PDA-MS联用及UPLC技术。TLC法：使用硅胶GF254薄层板，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（40：40：15：12）下层溶液为展开剂，254 nm和366 nm下观察。HPLC-PDA-MS法：采用Inertsil ODS-3（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以0.01 mol·L^-1乙酸铵（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0～17 min，36%B；17～18 min，36%B→42%B；18～27 min，42%B；27～28 min，42%B→52%B；28～43 min，52%B；43～44 min，52%B→80%B），流速1 mL·min^-1，检测波长229 nm，UV光谱扫描（200～400 nm）;正离子模式，氮气为雾化和干燥气体，毛细管电压3 kV，锥孔电压60 V，气体流量80 L·h-1，离子源温度120℃，去溶剂温度200℃，去溶剂气体流量350 L·h-1。UPLC法：采用Waters BEH柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色谱柱，以甲醇（A）-水（B）为流动相，梯度洗脱（0～3 min，90%B→65%B；3～10 min，65%B→50%B；10～13 min，50%B→25%B；13～16 min，25%B；16～20 min，25%B→90%B），流速0.4 mL·min^-1，检测波长229 nm，UV光谱扫描（200～400 nm）。结果：在TLC检测中添加了366 nm作为检测波长，提高了检测的灵敏度与准确度;优化HPLC-PDA-MS法，获得了更好的8个PDE5抑制剂色谱峰的分离度;建立了快速准确的UPLC法，可在13 min内实现6个PDE5抑制剂的快速分离与检测。结论：该法可用于中药及保健食品中非法添加PDE5抑制剂类化合物的检测，具有高效、简便、专属性强等特点。

HPLC和LC-MS/MS鉴定锁阳固精丸中非法添加的西地那非衍生物

目的鉴定中成药中非法掺入的西地那非衍生物。方法采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD)和液相色谱-电喷雾电离-质谱联用法(LC-ESI-MS/MS),定性分析锁阳固精丸中非法掺入的西地那非衍生物。结果通过比较被测样品成分和西地那非对照品的紫外吸收光谱图,并对两者的质谱碎片数据进行解析和研究,确认西地那非的一种衍生物羟甲基西地那非(hydroxyhomosildenafil)。结论利用液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS),结合质谱分子结构解析技术,具有专属性强的特点,可以准确分析中成药中非法添加的西地那非衍生物。

实心核颗粒色谱分离-HPLC-MS/MS法同时测定性保健品中非法添加15种壮阳类化学成分

目的建立了性保健品中非法添加15种壮阳类化学成分的实心核颗粒色谱分离-HPLC-MS/MS检测方法。方法以高色谱性能的实心核颗粒色谱柱CORTECS-C18(150 mm×4.6 mm,2.7μm)分离,串联四级杆质谱仪检测,MRM模式进行定性定量分析,样品以甲醇为溶剂超声提取,检测添加在性保健品中的甲磺酸酚妥拉明、那红地那非、红地那非、伐地那非、西地那非、羟基豪莫西地那非、豪莫西地那非、氨基他达拉非、他达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、甲睾酮、司坦唑醇和达那唑共15种化学成分。结果 15种壮阳类化学成分质谱检测的分离度较好,线性范围宽,相关性好,r2≥0.995 4;方法精密度以6次测定值的RSD表示,为0.9%~3.3%;方法回收率用3个质量浓度进行添加实验,回收率为88.3%~109.5%,RSD为0.9~5.2%;定量限范围为0.015~0.30μg/m L;日内精密度和日间精密度的RSD分别为0.9%~4.2%和1.0%~4.5%;25批次性保健品中检出阳性样品20批次,检出成分均为西地那非,不合格率达80%。结论本方法通用性强,操作简单,可作为性保健品中非法添加15种壮阳类化学成分的有效检测方法。

UPLC-Q-TOF-MS法快速检测补肾壮阳类中成药中11个PDE5型抑制剂类药物

目的：建立补肾壮阳类中药中11个磷酸二酯酶5型（PDE5型）抑制剂类药物的超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）快速检测方法。方法：样品经乙腈超声提取后,应用Agilent Extend-C18（1.8μm,2.1 mm×50 mm）色谱柱,以乙腈（A）-含0.1%醋酸的5 mmol·L-1醋酸铵水溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0～3.5 min,27%A;3.5～12 min,27%A→69%A;12～14 min,69%A;14～20 min,27%A）,流速0.20 mL·min-1,采用四极杆飞行时间质谱（Q-TOF-MS）检测器,电喷雾离子源（ESI）,毛细管电压（capillary voltage）为4.0 kV,碎裂电压（Fragmentor）为180 V,正离子全扫描检测,扫描范围为m/z 100～1500。结果：那红地那非、红地那非、伐地那非、羟基豪莫西地那非、西地那非、豪莫西地那非、氨基他达拉非、他达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非、那莫西地那非11个化合物14 min内即可完成检测,在50～10000μg·L-1范围内线性相关系数均大于0.999;10倍定量限（LOQ）添加水平的加样回收率在93.8%～102.1%之间,RSD在2.6%～4.8%之间。结论：该方法操作简便、快速,经方法学验证可用于中成药中非法添加PDE5型抑制剂的快速检测。

保健酒及酒类制品中非法添加PDE-5抑制剂及其衍生物的监测及结果分析

目的:对保健酒及酒类制品中非法添加磷酸二酯酶(PDE-5)抑制剂及其衍生物进行监测,并对监测结果进行分析讨论。方法:参照"国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件(编号2009030)方法。LC-MS/MS法条件:采用Shim-pack XR-ODS(100 mm×2.0 mm,2.2μm)色谱柱,以0.1%乙酸的10 mmol·L^(-1)乙酸铵溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~8 min,27%B;8~18 min,27%B→80%B,18~20 min,80%B),流速0.3 m L·min^(-1);采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描模式,一级质谱全扫描范围为m/z 100~1 000,二级质谱全扫描范围为m/z 40~1 000。HPLC法条件:采用Inertsil ODS-SP C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以10 mmol·L^(-1)乙酸铵溶液(A)-甲醇(B)-乙腈(C)为流动相,梯度洗脱(0~15 min,10%B→25%B;15~25 min,25%B→55%B;25~35 min,55%B,保持15%C),流速1.0 m L·min^(-1),柱温为室温,二极管阵列检测器,扫描范围为200~400 nm。结果:64批次样品中12批次检测到PDE-5抑制剂及其衍生物,其中检出批件中涉及的西地那非、伐地那非、氨基他达拉非和羟基豪莫西地那非4种非法添加成分。另外检出5种批件中未涉及的PDE-5抑制剂衍生物,为丙氧基苯基艾地那非、丙氧基苯基硫代艾地那非、艾地那非和羟基硫代豪莫西地那非,且有一种未见报道的新型PDE-5抑制剂衍生物(暂无命名)。结论:保健酒及酒类制品中检出非法添加PDE-5抑制剂及其衍生物,需建立快速有效的针对新型PDE-5衍生物的监测方法,并加强对相关销售渠道的监管,保障人民生命健康。

基于诊断离子策略的中药及保健食品中添加PDE5型抑制剂的快速筛查方法

目的:利用诊断离子建立了一个磷酸二酯酶-5(PDE5)型抑制剂的非目标扫描策略,通过高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-QTOF/MS)1次扫描即能完成中药及保健食品中添加的PDE5型抑制剂的筛查。方法:采用Poroshell EC-C_(18)色谱柱,以0.1%乙酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 m L·min-1;采用电喷雾离子源(ESI),毛细管电压3.5 k V,碎裂电压180 V,在自动扫描模式下,对不同类型PDE5型抑制剂的裂解规律进行分析,从中寻找诊断离子建立非目标扫描策略。对MS条件进行优化,讨论了筛查策略参数对结果的影响。结果:11种典型PDE5抑制剂质量浓度在50~1 000 ng·m L-1范围内线性关系良好;平均回收率为83.7%~110.0%,RSD为1.5%~10.2%。对25批样品进行筛查,结果与目标扫描策略一致,但是诊断离子策略能够更有效地发现未知衍生物。结论:该方法简可用于已知及未知的非法添加PDE5型抑制剂的快速筛查。