miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨miR21-5p调控转录激活蛋白STAT3在高氧性急性肺损伤(HALI)中的作用及机制。方法选择40只C57BL/6J小鼠随机分为常氧组、高氧组、高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组,吸入90%以上浓度氧气建立HALI小鼠模型。常氧组饲养于正常空气中;高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组分别经气管导管滴入miR21-5p AAV6或空载体,饲养3周后建立HALI小鼠模型。高氧暴露48 h后,取肺组织采用ELISA试剂盒检测炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)和氧化应激标志物(SOD、MDA、ROS)水平;计算肺水含量;行HE染色观察形态学变化并行病理学评分;Tunel法检测肺组织细胞凋亡率;RT-PCR检测miR21-5p表达水平;Western blot检测STAT3、p-STAT3、Bax及Bcl-2蛋白相对表达水平。结果与常氧组比较,高氧组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率升高(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平升高(P<0.05),MDA和ROS水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与高氧组比较,高氧+miR21-5p组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率降低(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平降低(P<0.05),MDA和ROS水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达降低(P<0.05),高Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。高氧组HE染色可见肺泡结构紊乱、间隔增厚,大量炎症细胞浸润,透明膜形成及肺泡萎陷,高氧+miR21-5p组HE染色结果显示肺损伤程度明显减轻。结论miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3活性抑制炎症反应及凋亡并维持氧化还原平衡减轻HALI。

高氧肺损伤形成过程中小窝蛋白-1、TGF-β1表达关系的体内外研究

目的通过建立高氧肺损伤动物模型和体外细胞培养的方法,从体内和体外两方面来研究小窝蛋白-1(caveolin-1)和TGF-β1的表达关系,以探讨其发病机制。方法 (1)体内实验:建立早产鼠高氧肺损伤模型。于给氧后1、3、7d留取肺组织标本,在光学显微镜下观察肺组织形态学变化,免疫组织化学法检测相应时间点小窝蛋白-1、TGF-β1的表达水平。(2)体外实验:建立高氧A549细胞损伤模型。于给氧后12、24、48h收集细胞,免疫荧光双染检测相应时间点小窝蛋白-1、TGF-β1表达水平的相关性。结果 (1)体内结果:小窝蛋白-1在对照组肺组织中均有较高水平表达。与对照组比较,高氧组肺组织caveolin-1的表达水平出现降低,在3、7d明显降低(P<0.05);TGF-β1在对照组肺组织中均有较低水平表达。与对照组比较,高氧组肺组织TGF-β1的表达水平升高,在3、7d明显升高(P<0.05)。(2)体外结果:对照组,小窝蛋白-1的高表达伴随着TGF-β1的低表达;高氧组,随着通氧时间的延长,小窝蛋白-1表达逐渐减弱,TGF-β1表达逐渐增强。结论在高氧肺损伤的发生、发展过程中,Caveolin-1表达显著性减少,TGF-β1表达持续性增多,二者呈拮抗关系,提示Caveolin-1可能通过下调TGF-β1的产生而具有抗纤维化能力。

rh-CCSP对高氧暴露下新生大鼠肺损伤的影响

目的研究rh-CCSP对高氧暴露下新生大鼠肺损伤的影响,探讨高氧肺损伤的可能机制。方法将生后1 d的Wistar大鼠80只,随机分为4组。Ⅰ组:空气组;Ⅱ组:高氧组;Ⅲ组:空气+rh-CCSP组;Ⅳ组:高氧+rh-CCSP组。Ⅱ组和Ⅳ组大鼠持续暴露于85%O2中,Ⅰ组和Ⅲ组大鼠呼吸空气。Ⅲ组和Ⅳ组大鼠从出生第2天始每天雾化吸入rh-CCSP,rh-CCSP用双蒸水稀释,其浓度为1 mg/ml,每次雾化吸入10 min。于高氧暴露后7 d、14 d取肺组织,HE染色后测定肺泡辐射状计数(RAC值)和形态定量分析,用免疫组化方法检测肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)表达,用TUNEL方法检测肺细胞凋亡。结果Ⅱ组RAC值较I组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅳ组的RAC值与Ⅱ组相比,明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅱ组肺泡面积比较Ⅰ组明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅳ组的肺泡面积较Ⅱ组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。高氧暴露7 d时Ⅱ组肺组织细胞凋亡指数51.22±2.17明显高于Ⅰ组的21.39±3.18,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅳ组的细胞凋亡指数28.98±3.86明显低于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.01)。高氧暴露14 d时空气组和高氧组比较SP-A表达减弱(U=2.191,P<0.05);高氧+rh-CCSP组和高氧组比较,SP-A表达增强(U=2.048,P<0.05)。结论高氧暴露后肺内CCSP表达下降,阻碍肺泡发育,补充rh-CCSP可有效抑制肺细胞凋亡,还能增加肺内SP-A分泌,减轻肺损伤,可预防和治疗BPD的发生。

新生大鼠高氧性肺损伤肺组织中AQP1、α-ENaC蛋白和mRNA表达及呋塞米雾化的干预作用

目的 探讨呋塞米雾化对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用.方法 将新生SD大鼠随机分为空气组、高氧组和干预组,比较肺组织病理改变、肺组织AQP1,α-ENaC蛋白及mRNA表达情况.结果 空气组中的实验动物反应好,高氧组实验动物表现脱氧后烦躁不安,呼吸困难明显,其中1 只实验动物死亡.而干预组中的实验动物一般活动情况较高氧组明显改善.三组中高氧组肺组织形态与结构改变最为严重.在实验3、7、14 d时,高氧组肺组织AQP1蛋白及mRNA表达水平低于空气组(P<0.05),干预组肺组织AQP1蛋白及mRNA表达水平在实验3、7、14 d时均与空气组接近,明显高于高氧组,差异有统计学意义(P<0.05).在实验3、7、14 d时,高氧组肺组织α-ENaC的蛋白及mRNA表达水平较空气组明显下降(P<0.05),而干预组肺组织α-ENaC蛋白及mRNA表达水平较高氧组明显升高,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论 雾化吸入呋塞米可能通过上调AQP1、α-ENaC的蛋白表达水平及mRNA表达水平,改善肺功能,从而对高氧性肺损伤起到一定保护作用.

rhEPO对高氧肺损伤Akt、GSK-3β表达的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对新生大鼠高氧肺损伤蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶(GSK-3β)表达的影响。方法:实验采用Wistar新生大鼠120只,随机分为三组:空气对照组、高氧模型组和高氧+rhEPO治疗组,每组各40只。建立高氧模型后,空气组新生大鼠暴露于室内正常的空气中,高氧组及治疗组新生大鼠暴露于氧气浓度≥85%的高氧模型玻璃箱中。于高氧暴露实验的第1天开始,治疗组每天接受rhEPO(800IU/kg)腹腔注射治疗,取肺组织进行W/D测定,运用Western blotting测定肺组织中Akt和GSK-3β蛋白及它们的磷酸化表达水平。结果:①肺组织W/D比值结果:高氧暴露第1天,各组W/D比值无明显变化;高氧第3天、第7天、第14天时,高氧组与空气组比较,W/D比值增加,且随着高氧时间延长W/D比值增加,治疗组与高氧组比较,W/D比值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。②Western Blotting结果:与空气对照组比较,高氧组p-Akt/Akt、GSK-3β、Bcl-2/Bax表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与高氧组比较,治疗组中p-Akt/Akt、p-GSK-3β/p-GSK-3β/GSK-3β、Bcl-2/Bax蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO通过增强Akt、GSK-3β蛋白的表达,抑制肺细胞凋亡,对高氧肺损伤起保护作用。

miR-21-5p过表达对大鼠高氧性急性肺损伤形态学的影响

目的探讨微小RNA-21-5p (miR-21-5p)过表达对大鼠高氧性急性肺损伤(HALI)形态学的影响,为HALI的基因治疗寻找理论依据。方法按随机数字表法将96只SD大鼠分为正常组(于空气中饲养)、HALI组(置于高氧箱中,氧浓度90%以上,温度保持在25~27℃,湿度保持在50%~70%,CO 2浓度<0.5%)、miR-21-5p组(经鼻滴入含miR-21-5p的慢病毒液200 μL,滴度6×10^6 TU/mL)3组,每组32只。各组分别于实验开始后的0、24、48、72 h随机抽取8只大鼠,取动脉血行血气分析,计算氧合指数(OI)和呼吸指数(RI);取右肺组织行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肺组织病理学改变并进行病理评分;取左肺,测量肺湿/干重(W/D)比值。结果实验开始时,各组大鼠呼吸参数、肺组织病理学改变和病理评分、肺W/D比值比较差异均无统计学意义。随时间延长,正常组各指标均无明显改变。HALI组OI逐渐下降,RI、肺病理评分及W/D比值均逐渐升高;24 h起各指标与正常组比较差异均有统计学意义[OI(mmHg,1 mmHg= 0.133 kPa):304.19±36.23比438.42±28.58,RI:0.32±0.04比0.22±0.05,肺组织病理评分(分):0.92±0.72 比0.00±0.36,肺W/D比值:4.16±0.42比3.65±0.43, P 均<0.05]。miR-21-5p组24 h起各指标均较HALI模型组明显改善[OI(mmHg):354.10±30.24比304.19±36.23,RI:0.31±0.04比0.32±0.04,肺组织病理评分(分):0.80±0.52比0.92±0.72,肺W/D比值:3.78±0.36比4.16±0.42, P 均<0.05]。随时间延长,正常组大鼠肺组织结构无明显改变;HALI模型组大鼠肺泡结构逐渐紊乱,肺泡壁断裂破坏,肺泡间隔逐渐增宽、水肿、炎性细胞浸润,部分大鼠可见少量红细胞渗出;miR-21-5p组大鼠肺组织病理损伤程度较HALI模型组明显减轻。结论 miRNA-21-5p可明显减轻大鼠HALI,对大鼠HALI肺病理学改变影响显著。

lncRNA-GAS5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤发病过程中的作用研究

目的:探究lncRNA-GAS5/miRNA21 ceRNA调控网络在高氧性急性肺损伤(HALI)发病过程中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、lncRNA组和lncRNA联合miRNA组,空白组不做任何处理,lncRNA组静脉注射lncRNAGAS5过表达慢病毒载体,lncRNA联合miRNA组静脉注射lncRNA-GAS5和miR-21过表达慢病毒载体,模型组静脉注射等体积慢病毒空载体;模型组和各干预组大鼠均吸入高浓度氧气建立大鼠HALI模型。高氧处理48 h后检测大鼠动脉血氧合指数(OI)、呼吸指数(RI),ELISA检测血浆细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,观测肺组织病理损伤,计算左肺上叶湿/干重比(W/D),AnnexinⅤ-PI凋亡染色试剂盒检测肺泡上皮细胞凋亡,RT-PCR、Western blot检测肺组织lncRNA-GAS5、miR-21、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB激活情况。结果:模型组大鼠肺组织lncRNA-GAS5水平显著高于空白组,而miR-21水平显著低于空白组(P<0.01);与模型组相比,lncRNA组大鼠OI显著降低,RI、肺W/D、病理评分、肺组织凋亡细胞数、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、IκBα磷酸化水平及细胞核内NF-κB p65水平显著升高(P<0.01);与lncRNA组相比,lncRNA联合miRNA组大鼠OI显著升高,RI、肺W/D、病理评分、肺泡上皮凋亡细胞数、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达、IκBα磷酸化及细胞核内NF-κB p65水平显著降低(P<0.01)。结论:lncRNA-GAS5/miRNA21轴参与HALI发病过程,lncRNA-GAS5通过负调节miR-21表达间接激活NF-κB通路,促发HALI。

高氧对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化的影响

目的:探讨高氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeIIalveolarepithelialcells,AECⅡ)转分化的影响。方法:原代培养早产大鼠的AECⅡ,建立高氧细胞损伤模型。利用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞的形态变化。用免疫细胞化学染色法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C(surfactantproteinC,SP-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(typeⅠalveolarepitheli-alcells,AECⅠ)特异性水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)的表达。用RT-PCR和流式细胞术分别检测SP-C、AQP5mRNA及蛋白的表达。结果:随着给氧时间的延长,原代培养的AECⅡ伸展变平,失去其板层体及微绒毛,丧失AECⅡ的特性,获得AECⅠ样外观。伴随其形态学改变,AECⅡ逐渐停止表达其特异性蛋白SP-C,开始表达AECⅠ特异性蛋白AQP5。高氧组给O2后24、48及72h,SP-CmRNA、SP-C+细胞的表达率及荧光指数(fluorescenceindex,FI)较同时间点的空气组明显降低,AQP5的上述指标在24h和48h则较空气组明显增加。高氧组给O2后72h,AQP5的表达开始减弱,与同时间点的空气组相比较无明显差异。结论:高氧诱导的早产大鼠AECⅡ转分化在肺泡上皮细胞损伤的修复中起重要作用。

基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9在新生兔高氧机械通气肺损伤中的表达

目的观察基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在新生兔机械通气肺损伤中的表达和变化规律,研究肺损伤的分子机制。方法将60只日龄1～5d的新生兔随机分为高吸气峰压组(高压组)、中吸气峰压组(中压组)、低吸气峰压组(低压组)进行高氧机械通气并与未通气组对照,分别于通气后1h、3h、6h3个时间点活杀取肺,病理切片MMP-2、MMP-9免疫组织化学染色,ELISA法检测肺组织匀浆中MMP-2、MMP-9的水平,RT-PCR检测肺组织MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。结果3种方法均发现:(1)高压、中压、低压通气均能使MMP-2的含量增加,mRNA表达增强。(2)高氧机械通气MMP-9的表达先下调,含量降低,随着通气的继续,渐上调到正常水平,不同的吸气峰压对MMP-9的影响变化不大(F=0.083,P>0.05)。(3)MMP-2水平:高压组通气后3h与低压组通气后1h、低压组通气后3h、正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05),中压组通气后6h与低压组通气后1h、正常组比较差异亦均有统计学意义(P<0.05)。MMP-9水平:高压组通气后3h与高压组通气后1h、中压组通气后1h、低压组通气后1h比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)MMP-2与MMP-9之间呈正相关,与肺组织湿干比、灌洗液细胞总数呈正相关。结论新生兔机械通气6h内,高水平的氧通气能使MMP-2上调,使MMP-9下调,通气时机械拉伸上调MMP-2。机械通气影响MMPs的合成,MMPs在新生兔机械通气肺损伤中发挥重要作用。

痰热清对新生大鼠高氧肺损伤的影响

目的:探讨痰热清注射液对新生大鼠高氧肺损伤的影响。方法:选用生后2天的Wistar大鼠乳鼠90只随机分为高氧组、治疗组、正常组,高氧组与治疗组制备成高氧肺损伤模型,治疗组制备模型后腹腔注射痰热清注射液。各组模型制备后的第3、7、14天时随机分批处死大鼠,取肺组织,行HE染色观察肺的发育程度,并行免疫组织化学染色,对肺组织中转化生长因子β1、转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体行定位、半定量评分,对肺巨核细胞行细胞计数,将各组的测定值进行比较分析。结果:高氧组肺组织中转化生长因子β1、转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体的表达明显强于正常组、痰热清组,有显著性差异(P<0.01)。高氧组的肺巨核细胞计数少于正常组、痰热清组,有显著性差异(P<0.01)。结论:痰热清注射液在新生大鼠高氧肺损伤时对肺组织有保护作用,对支气管—肺发育不良有一定的预防作用。

谷氨酰胺对高氧肺损伤的干预效果观察

目的观察谷氨酰胺对高氧肺损伤的干预效果,探讨防治高氧肺损伤的有效措施。方法建立大鼠肺损伤模型,比较高氧组与空气组及不同剂量谷氨酰胺组大鼠肺组织病理形态学的变化以及血浆8-异前列腺素F2 a水平。结果高氧组肺泡细胞形态破坏明显,细胞内结构肿胀,大剂量谷氨酰胺组细胞形态破坏程度较高氧组明显减轻。高氧组各时间点血浆8-异前列腺素F2 a水平均显著高于空气组(P均<0.05);高氧组血浆8-异前列腺素F2 a水平在3、7、14 d均高于大剂量谷氨酰胺组(P均<0.05),与小剂量谷氨酰胺组相近(P>0.05)。结论氧化应激与高氧肺损伤密切相关,大剂量谷氨酰胺对高氧肺损伤的氧化应激作用具有明显的干预作用。

CXCL12/CXCR4在高氧致新生大鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的检测趋化因子12(CXCL12)[又名基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)]及其受体(Cys-X-Cys receptor 4,CXCR4)在高氧致新生大鼠肺损伤中的变化,初步探讨其在新生大鼠高氧肺损伤中的作用及可能机制。方法 SD新生大鼠64只,按随机数字表达法分为空气对照组和高氧组,高氧组吸入氧体积分数≥0.95(95%O2)的高氧建立高氧肺损伤动物模型。高氧刺激3、7、14、21 d后分别取2组新生大鼠行肺组织病理学检查;水解法测肺组织羟脯氨酸含量;实时荧光定量PCR检测肺组织CXCL12和CXCR4 mRNA;Western blot检测肺组织CXCR4蛋白。结果病理学检查显示,高氧组肺组织炎症明显,结构紊乱,高氧暴露时间越长,损伤越明显。肺组织羟脯氨酸的含量在高氧刺激14 d和21 d后[(493.69±127.50)、(582.55±174.78)μg/g]明显高于空气对照组[14 d(327.52±46.97)μg/g(P<0.05),21 d(321.27±60.63)μg/g(P<0.01)]。高氧组CXCL12 mRNA表达在高氧刺激14 d及21 d后[(2.12±1.08)、(2.68±0.87)]均高于相应对照组[0.68±0.22(P<0.05),0.51±0.18(P<0.01)],CXCR4 mRNA表达在高氧刺激7、14、21 d后(0.53±0.23、0.36±1.15、0.31±0.19)均低于相应对照组[(2.80±1.14、2.71±1.26,P<0.05),(2.93±0.14,P<0.01)]。肺组织CXCR4蛋白的表达高氧刺激7、14、21 d后(2.06±0.64、2.84±0.83、1.38±0.34)均高于相应对照组[1.37±0.41(P<0.05),0.81±0.27(P<0.01),0.85±0.23(P<0.05)]。结论 CXCL12/CXCR4可能在高氧肺损伤的炎症反应和纤维化过程中发挥了重要作用。

谷酰胺对新生大鼠急性高氧肺损伤的保护机制

目的探讨谷酰胺对新生大鼠急性高氧肺损伤的保护机制。方法将新生SD大鼠随机分成对照组、谷酰胺组和高氧组,比较三组大鼠存活率和体质量、肺湿质量/干质量、病理改变、热休克蛋白-70(HSP-70)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况。结果高氧暴露6 d后:①高氧组体质量明显低于对照组(P<0.05),谷酰胺组与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。②高氧组肺湿质量/干质量明显低于对照组(P<0.05),谷酰胺组与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。③三组中高氧组肺泡炎性病理改变最为严重。④高氧组肺组织HSP-70表达量较对照组明显增加(P<0.05),谷酰胺组较对照组、高氧组均显著增加(P均<0.01);高氧组肺组织TNF-α表达量较对照组与谷酰胺组均明显增加(P均<0.01),谷酰胺组较高氧组明显减少(P<0.05)。结论谷酰胺可能通过调节炎症反应与抗炎反应之间的平衡对高氧肺损伤起到保护作用。

早产大鼠高氧肺损伤组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶的动态表达及其意义

目的探讨还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1、2、5在早产大鼠高氧肺损伤组织中的动态表达及其意义。方法早产新生大鼠生后1d随机分为高氧和空气组,高氧组持续暴露于850mL/L氧气中,空气组置同一室内常压空气中。分别取二组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d肺组织标本,采用HE染色观察肺组织形态学改变,采用RT-PCR法在mRNA水平检测NADH脱氢酶亚单位1、2、5的表达。结果1.高氧暴露1、4d,早产大鼠肺组织形态较空气组无明显改变;高氧暴露7、10d,肺组织渐出现小血管充血扩张,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡数目减少、结构简单化和囊泡化等改变。2.空气组NADH脱氢酶亚单位1(ND1)和亚单位2(ND2)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至7d时最低,随后其表达逐渐增高;空气组NADH脱氢酶亚单位5(ND5)mRNA的表达随日龄增长渐降低,至4d时最低,随后其表达逐渐增高。3.与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7dND1和ND5mRNA表达显著增强(Pa<0.05),随后其表达渐下降,10、14d时低于空气组,但二者相比差异无显著性意义(Pa>0.05);与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4d ND2 mRNA表达二组间差异无显著性意义(Pa>0.05),7d时较空气组极显著增强(P<0.01),10、14d时较空气组显著降低(Pa<0.05)。结论高氧可导致早产大鼠肺组织NADH脱氢酶表达改变,提示其可能参与高氧肺损伤的病理生理过程。

新生儿高氧肺损伤机制研究进展

新生儿高氧肺损伤是一个极其复杂的病理生理过程,其损伤机制涉及炎性水肿、血管生成、细胞外基质重建、组织异常修复和细胞凋亡等多种因素,且这些因素交织成网,相互影响,共同形成了高氧肺损伤的病理特征。文章综述了近年研究较多且在高氧肺损伤病理过程中发挥重要作用的分子系统,包括水通道蛋白、基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子、单核细胞趋化因子和细胞凋亡相关因子。

降钙素基因相关肽在高氧致幼年鼠肺损伤中的动态变化及意义

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)在高氧肺损伤形成过程中的作用.方法:SD大鼠64只按随机数字表法分为8组,每组8只,分别为空气对照组和高氧暴露1 d组、3 d组、7 d组、14 d组.通过肺组织形态学及肺组织湿/干质量,了解高氧肺损伤炎症水肿的病理改变、放射免疫法检测肺组织匀浆中CGRP含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织内CGRP的两个亚型(α-CGRP,β-CGRP)的mRNA表达.结果:高氧暴露组3～7 d肺组织充血水肿,大量炎性细胞侵润;14 d肺泡腔扩大,肺纤维细胞增生;高氧暴露7～14 d组肺湿/干质量明显高于空气对照组;随高氧暴露时间延长,肺组织匀浆中CGRP浓度逐渐增高,于第3日达峰值,之后逐渐下降,第14日降至正常水平;肺组织中CGRP两个亚型mRNA表达不同,α-CGRP mRNA在高氧刺激24 h内表达开始增高,高表达持续至高氧暴露7 d,7 d后表达明显降低;β-CGRP mRNA表达晚于α-CGRP mRNA,在高氧刺激3 d时表达开始增高,高氧暴露14 d仍处于高表达状态.结论:CGRP参与高氧肺损伤的形成过程,并在减轻高氧致肺损伤方面可能起着重要的作用.

激素对新生鼠高氧肺损伤及血清前列腺素E2、白三烯B4的影响

目的研究产前与产后激素应用对新生鼠高氧肺损伤及血清前列腺素E2、白三烯B4的影响。方法将新生鼠分为产前激素+高氧组、生后激素+高氧组、高氧对照组与空气对照组,每组14只,分别置高氧或空气中14 d。观察指标包括新生鼠病死率、体质量、肺系数、辐射状肺泡计数(RAC)、组织病理变化。原位末端标记法(TUNEL)检测肺泡细胞凋亡指数(AI),酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中PGE2、LTB4值。结果三组置高氧中新生鼠存活率与体质量均明显低于空气对照组(P均<0.05),肺系数则明显高于空气对照组(P<0.05),但三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。置高氧中三组新生鼠肺组织病理变化明显。空气对照组的RAC最高,两组激素组RAC高于高氧对照组(P<0.05),而使用激素的两组间差异无统计学意义(P>0.05)。空气对照组肺组织中可见少数凋亡细胞,AI低于其余各组(P<0.05)。高氧对照组AI高于激素组(P<0.05),激素组间两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。四组中空气对照组的PGE2最低(P<0.05),高氧三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。空气对照组LTB4也最低(P<0.05),与高氧对照组相比,使用激素的两组LTB4明显降低(P<0.05),但此两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论产前与产后激素应用均可减轻新生鼠高氧肺损伤程度,增加辐射状肺泡计数,减少细胞凋亡,并可能与LTB4、PGE2等炎性因子有关。而产前与产后激素应用对比无差异。

内质网应激与高氧诱导早产大鼠肺损伤的作用

目的探讨内质网应激在早产鼠高氧肺损伤中的作用。方法 48只新生早产Wistar大鼠在生后12 h随机分为对照组和高氧组,高氧组吸入95%的高浓度氧建立高氧肺损伤模型,对照组置于同一条件常压空气中。在处理后1、3、7 d分批断颈放血处死大鼠后取肺组织。每个时间点取动物8只,左肺制作石蜡切片,采用HE染色观察肺组织病理变化;免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法检测内质网应激相关指标,内质网蛋白57(ERp57)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在肺组织中的表达;采用原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况。结果高氧组肺组织呈典型的急性肺损伤改变。除了暴露3 d,其余时间点,高氧组ERp57和CHOP表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。随高氧暴露时间延长,高氧组ERp57表达呈增高趋势,差异有统计学意义(P<0.05);但CHOP表达在各时间点差异无统计学意义(P>0.05)。肺组织细胞凋亡指数随时间延长呈渐升趋势,在暴露1 d、3 d、7 d之间的差异有统计学意义(P<0.01);在各时间点,高氧组凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.01)。ERp57、CHOP表达与高氧组肺组织细胞凋亡指数呈显著正相关(P均<0.01)。结论内质网应激启动的凋亡途径参与高氧肺损伤,并发挥重要作用。

SOX9及WNT信号通路分子在高氧暴露致早产大鼠肺损伤中的表达及意义

目的观察SOX9及WNT信号通路分子在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达,探讨高氧暴露早产大鼠肺组织损伤的发病机制。方法将72只1日龄早产SD大鼠随机均分为高氧组和空气组,每组36只,各组再随机均分为生后3 d组、5 d组、9 d组,每组12只。高氧组早产鼠置于氧体积分数为95%的氧箱中。各组分别在相应的时间处死动物后收集肺组织标本。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察肺组织的病理改变,采用RT-PCR及Western blot法检测SOX 9及WNT信号通路中关键因子β-连环蛋白(β-catenin)及下游因子淋巴增强因子(LEF-1)、肺泡表面活性蛋白C(SPC)、α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)在早产大鼠肺组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果空气各组肺组织结构基本正常,高氧3d组肺组织见明显渗出、大量炎症细胞浸润、出血性改变及肺泡压缩,高氧5 d组和9 d组可见肺间隔增宽及肺泡结构紊乱。与空气组比,高氧组β-catenin、LEF-1、SPC及α-SMA mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05),且随着高氧暴露天数的增加而增加;SOX9因子在高氧暴露3 d和5 d时mRNA和蛋白表达均高于空气组(P<0.01),且高氧暴露3 d组核酸2017-12-14接收及蛋白表达量高于高氧暴露5 d组,高氧暴露9 d时与空气组无明显变化(P>0.05),且表达量低于高氧5 d组。结论高氧暴露通过激活WNT信号通路致早产大鼠肺组织损伤;SOX 9基因在高氧暴露早产大鼠肺组织中可能通过抑制WNT信号通路来参与高氧肺损伤。

高氧液对油酸性急性肺损伤家兔肺组织改变和肺表面活性物质的影响

目的：观察高氧液对急性油酸性肺损伤家兔肺组织形态改变及肺表面活性物质的影响。方法健康家兔30只,雌雄不拘,体质量2.0~2.5 kg,随机分为3组：空白对照组（n=10）；高氧液治疗组（n=10）；盐水对照组（n=10）。3组动物给予相应处理后分别在 ALI 模型制备前（基础值）、静脉输液前（损伤后）、输液后30 min、1 h、2 h 时观察动脉血气变化,2 h 后处死动物取肺组织做病理切片观察肺组织形态学改变和免疫组化检测肺表面活性物质的变化。结果高氧液治疗组在输注高氧液后2 h PaO2明显高于盐水对照组（P 〈0.001）,而 PaCO2则低于盐水对照组（P 〈0.001）。光镜下高氧液治疗组家兔肺组织损伤程度较盐水对照组轻。免疫组化及肺泡灌洗液测定结果显示,高氧液治疗组肺表面活性物质 A 含量明显高于盐水对照组（P 〈0.001）。结论静脉输注高氧液可减轻肺组织损伤程度,减少肺泡表面活性物质的破坏。