肾移植患者HGPRT活性及多态性与硫唑嘌呤所致不良反应的相关性研究

目的：本研究旨在探索次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）活性及基因多态性与硫唑嘌呤（AZA）所致不良反应的相关性,为临床合理使用AZA提供理论依据。方法：用本实验室建立的HPLC法测定入选样本的HGPRT活性,直接测序法测定HGPRT IVS6-12C〉A的基因型,结合受试者不良反应发生情况,分析HGPRT活性及多态性与AZA所致不良反应的相关性。结果：86例肾移植受者HGPRT活性范围为（44.59~262.16）U,平均为（100.17±33.50）U,健康受试者HGPRT活性范围为（28.43~153.65）U,平均为（99.30±17.21）U,均呈正态分布。两组HGPRT活性均值差异无统计学意义（P〉0.05）。304例肾移植患者中发现2例HGPRT IVS6-12C〉A突变体,突变频率为2.30%。而健康受试者中未发现突变,分析发现HGPRT活性与基因型之间无明显相关性（P〉0.05）。流行性感冒样症状组患者的平均HGPRT活性明显高于肾移植对照组[（147.47±101.24）Uvs（100.46±29.31）U,P〈0.05）],而血液毒性组、肝脏毒性组、胃肠道反应组与肾移植对照组比较,活性差异无统计学意义。AZA所致不良反应与HGPRT基因多态性之间没有明显相关性（P〉0.05）。结论：在服用AZA之前,测定患者HGPRT活性,筛选出HGPRT高活性者,减少AZA的初始剂量,有利于减少AZA所致流行性感冒样症状不良反应的发生率。

磷氧氮丙啶诱发CHO细胞HGPRT基因位点正向突变的分子特征

ＭＡＰＯ诱发的ＣＨＯ细胞ＨＧＰＲＴ基因位点突变克隆ＤＮＡ，经ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ酶切消化后，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，与ＨＧＰＲＴ基因探针杂交。从杂交图谱可见，正常ＣＨＯ细胞基因组ＤＮＡ经ＰｓｔＩ酶切后杂交可显出６条杂交带，其中８３ｋｂ，７６ｋｂ，６０ｋｂ，和３２ｋｂ带为Ｘ染色体连锁的ＨＧＰＲＴ基因所有，分别代表外显子２，６８，４和３，其余两条带为假基因。而经ＥｃｏＲＩ酶切后，正常ＣＨＯ细胞基因组ＤＮＡ有１７５ｋｂ和１１３ｋｂ两条ＨＧＰＲＴ基因杂交带，分别代表了外显子６９和２４。而从ＭＡＰＯ所诱发的ＨＧＰＲＴ基因突变细胞杂交图谱可见，其主要改变是ＨＧＰＲＴ基因全部缺失或部分缺失，同时出现了新的杂交带。ＰｓｔＩ酶切的７个突变克隆均显出基因缺失或新的杂交带型，而ＥｃｏＲＩ酶切８个突变克隆中，有３个无ＨＧＰＲＴ基因改变。由此可见，ＭＡＰＯ诱发ＨＧＰＲＴ基因位点突变的分子机理主要是由于基因缺失或重排。

3,5,2',4'-四羟基查尔酮对大鼠尿酸及PC12细胞嘌呤代谢酶的影响

目的研究3,5,2',4'-四羟基查尔酮(P40)对高尿酸血症大鼠尿酸的影响及对PC12细胞嘌呤代谢关键酶的影响.方法灌胃给予SD大鼠P40(2.0、4.0和8.0 mg/kg)5次,末次给药前1 h腹腔注射氧嗪酸钾(250mg/kg)诱导成高尿酸血症动物模型,注射后2 h取血,用磷钨酸法测定血尿酸水平及肝尿酸含量.给予PC12细胞系列浓度的P40和阳性对照药别嘌醇后培养48 h,收集细胞提取总RNA,采用逆转录聚合酶链(RT-PCR)的方法,检测嘌呤代谢关键酶HGPRT、PRPS和PRPPAT m RNA的表达水平.结果给予P40 2.0、4.0 mg/kg均能显著降低高尿酸血症大鼠的血尿酸水平,和模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01),但对肝尿酸含量没有影响.给予P40 1×10^(-8),1×10^(-7),1×10^(-6) mol/L处理PC12细胞48 h后,对HGPRT、PRPS和PRPPAT基因的m RNA表达没有明显影响,与对照组相比差异无统计学意义(P<0.01).结论在本实验条件下,P40能降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠的血尿酸水平,对PC12细胞的HGPRT、PRPS和PRPPAT基因的m RNA表达无影响.