HRE和hTERT修饰条件复制型腺病毒携带Egr-1介导的Smac对人食管癌细胞Eca109周期和凋亡的影响

目的探讨以HRE和hTERT修饰条件复制型腺病毒携带Egr-1介导的Smac(CARd.pE-Smac)对人食管癌细胞Eca109周期和凋亡的影响。方法利用氯化钴进行化学乏氧,病毒感染滴度为5MOI[Multiplicity of infection(virus/cell)]感染人食管癌Eca109细胞24h,并进行2Gy照射,12h后分别利用Western blotting检测Smac蛋白的表达,PI染色和AnnexinⅤ-FITC双染,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡变化。实验分为control、CARd.pESmac、hypoxia、2Gy、H+CARd.pE-Smac、CARd.pE-Smac+2Gy和H+CARd.pE-Smac+2Gy组。结果 CARd.pE-Smac感染常氧和乏氧的Eca109细胞后均未见Smac蛋白表达增加,而2Gy照射后,常氧、感染CARd.pE-Smac和乏氧再感染CARd.pE-Smac均能使Smac蛋白表达增加,尤其以三者联用后Smac表达增加最大;感染CARd.pESmac未对细胞周期有明显改变,而乏氧、2Gy和感染CARd.pE-Smac任二者(乏氧与2Gy除外)或者三者联用均能显著增加S期和G2/M期细胞百分比增加(P<0.05,P<0.01),尤其以三者联用作用更强;而且,对于细胞凋亡的诱导作用与周期进程变化的规律相类似。结论 HRE和hTERT修饰条件复制型腺病毒携带Egr-1介导的Smac在人食管癌细胞Eca109中显著过表达,且能够导致细胞发生S期延迟和G2/M期阻滞,并诱导细胞发生凋亡。

携带mda7／IL24的三调控增殖腺病毒治疗肝癌的体外实验

目的:构建缺失E1A区24 bp,由端粒酶反转录酶基因启动子和缺氧基因启动子调控的增殖腺病毒SG600-IL24,研究人白细胞介素24(interleukin 24,IL24)在肝癌细胞内的表达水平和SG600-IL24的增殖情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。方法:利用DNA克隆和重组技术,构建SG600-IL24。ELISA检测IL24在肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7404和正常成纤维细胞BJ内的表达。半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infectious dose,TCID50)法检测SG600-IL24在3种细胞内48和96 h的增殖情况。MTT法和细胞病理效应(cytopathic effect,CPE)染色法检测SG600-IL24在不同MOI值对3种细胞的杀伤作用。结果:IL24在SMMC-7721和BEL-7404细胞内高表达而在BJ细胞内低表达。感染48和96 h后,SG600-IL24在SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞内分别增殖794和7940倍、622和7 810倍、20和200倍。MTT结果显示,杀伤50%和90%的SMMC-7721、BEL-7404和BJ细胞所需SG600-IL24的MOI值分别为0.3和5,3和20,50和150。CPE染色显示,SG600-IL24对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404有明显杀伤作用,而对BJ细胞无明显影响,并且该病毒的杀伤能力比增殖腺病毒ZD55-IL24和非增殖腺病毒Ad-IL24强。结论:SG600-IL24高效感染肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7404后,病毒增殖活跃,IL24的表达量显著升高。SG600-IL24对此2种肝癌细胞有良好的特异性杀伤作用,而对正常细胞没有明显影响,为应用该病毒治疗肝癌的体内研究建立了基础。