Metabolites of Icariin in the Gastrointestine of Rats Following Oral Administration

Further investigation of the metabolites of orally administered icariin in rats was made. Two minor metabolites, icariside I and icariside II, were identified in gastric content, and two metabolites, icariside II and icaritin, in intestinal content. The major metabolic route of icariin was proposed.

四川不同产地淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷含量的分析测定

目的筛选四川地区淫羊藿属植物优质种质资源,为大规模引种驯化提供科学依据。方法紫外吸收分光光度法测定总黄酮的含量,HPLC测定淫羊藿苷的含量。结果总黄酮含量测定中,淫羊藿苷质量浓度在0.002~0.016 mg·ml-1范围内与吸光度线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为98.63%,RSD为1.61%;淫羊藿苷含量测定中,淫羊藿苷进样质量在0.2~1.6μg范围内与色谱峰面积线性关系良好（r=0.999 4）,平均回收率为101.56%,RSD为1.03%。结论雅安市上里镇、都江堰市青城山、都江堰市和北川羌族自治县的柔毛淫羊藿、雅安市宝兴县的无距淫羊藿、雅安市天全县的天全淫羊藿、巴中市南江县的巫山淫羊藿和雅安市汉源县的强茎淫羊藿均可入药,其中柔毛淫羊藿与巫山淫羊藿适宜大规模引种栽培。

淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对THP-1细胞分泌细胞因子的影响

目的 :比较淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对人组织细胞瘤THP 1细胞分泌 4种细胞因子的影响。方法 :放射免疫测定方法 (RIA)。结果 :在LPS和PMA存在下 ,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物 (宝藿苷I和淫羊藿苷元 )对IL 6的产生有促进作用 ,代谢物的作用更强 ,对IL 8的产生有一定的抑制作用。当LPS和PMA不存在时 ,对IL 6的产生无明显影响 ,而对IL 8的产生则有促进作用。不论LPS和PMA存在与否 ,原苷对TNFα的产生有抑制作用 ,原苷及其肠菌代谢产物对IL 1α的产生均有明显抑制作用。结论 :在不同的实验条件下 ,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对各种炎症性细胞因子的产生均有特异的调节作用。

HPLC法同时测定肿瘤Ⅰ号胶囊中丹参素与淫羊藿苷的含量

目的建立肿瘤I号胶囊中丹参素与淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用HPLC法，以乙腈-体积分数为1％的冰醋酸溶液梯度洗脱，色谱柱为Kromasil C18（4．6mm ×200mm，5μm），流速为1．0mL·min^-1，柱温为35℃，检测波长为275nm。结果丹参素在儿．38～227．50mg·L^-1内，淫羊藿苷在2．0～40．0mg·L^-1内，与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0．9995和0．99960方法平均回收率分别为98．6％（RSD=1．9％）、96．0％（RSD=0．84％）。结论可作为肿瘤I号胶囊质量控制方法之一。

淫羊藿提取物中淫羊藿苷及其代谢产物在骨质疏松模型大鼠肾脏中的分布研究

目的:骨质疏松模型大鼠灌胃给予淫羊藿提取物后,利用HPLC法对其肾脏中的淫羊藿苷及其代谢产物(淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ)进行测定,以考察淫羊藿苷及其代谢产物在肾脏中的分布情况。方法:按118mg/kg(相当于淫羊藿苷)灌胃给予骨质疏松模型大鼠淫羊藿提取物后,于40min、1.5h、8h、24h取组织,经生物样品预处理后,利用HPLC法测定肾脏中各成分的浓度。色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温为40℃;流动相:A(0.4%HAC水)-B(甲醇);流速为1.0mL/min进行梯度洗脱;检测波长为270nm。结果:淫羊藿提取物给药40min后在肾脏中即有分布且能被检测,1.5h浓度较高,其后逐渐消除或代谢为其代谢产物;其代谢产物淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ在肾中均被检测;给药8h后,淫羊藿苷在肾脏中浓度较低,其代谢产物仍维持一定浓度;给药24h后各成分逐渐消除。结论:淫羊藿苷在大鼠肾脏中有一定程度的蓄积,并且与其代谢产物共存于肾脏组织中,并能维持一定的时间,与中医学认为淫羊藿归肾经补肝肾强腰膝的理论相符。

淫羊藿总黄酮胶囊指纹图谱研究

目的:建立淫羊藿总黄酮胶囊HPLC指纹图谱测定方法。方法:以淫羊藿苷为参照物,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);柱温为25℃;检测波长为270 nm。结果:建立了淫羊藿总黄酮胶囊的指纹图谱,确定了淫羊藿总黄酮胶囊中14个共有峰,10批成品指纹图相似度在0.95以上,同时指认了淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和宝霍苷Ⅰ各色谱峰。结论:建立的HPLC指纹图谱有较好的精密度、重复性和稳定性,适用于淫羊藿总黄酮胶囊的质量控制。

不同产地不同部位巫山淫羊藿中黄酮的HPLC分析

建立HPLC梯度洗脱法同时测定巫山淫羊藿中3种黄酮:淫羊藿次苷Ⅰ,朝藿定C和淫羊藿苷质量分数的方法。采用HPLC法,色谱柱为phenomenex C18分析柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为(A)水,(B)乙腈;柱温35℃;流速1.0 mL/min;检测波长270 nm;线性梯度洗脱条件:B∶15%(5 min),B∶30%(10 min),B∶50%(30 min)。本方法测定淫羊藿次苷Ⅰ,朝藿定C和淫羊藿苷的线形范围在0.20—1.80μg,r=0.999 3,r=0.999 9和r=0.999 7;平均回收率分别为98.43%,97.58%和97.91%,RSD(n=3)分别为2.16%,1.77%和1.90%。该方法简便、准确、重现性好,可作为同时测定淫羊藿次苷Ⅰ,朝藿定C和淫羊藿苷质量分数的方法。

HPLC法同时测定淫羊藿药材中的5个黄酮类成分

目的：建立同时测定淫羊藿药材中5种成分的HPLC方法。方法：采用Diamonsil—C18柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈和甲酸水（pH=3．0），梯度洗脱；流速：0．9mL／min；DAD检测，检测波长：270nm。结果：淫羊藿药材中5个主要黄酮类成分朝藿定A、朝藿定c、淫羊藿苷、箭藿苷A、宝藿苷1分别在0．7800～83．20μg/mL、2．081～222．0μg／mL、3．288～350．7μg／mL、0．8311～88．65μg／mL、0．3518～37．52μg／mL的浓度范围内呈良好的线性关系，最低检测限分别为0．50、0．75、0．87、0．32、0．12μg／mL。重复性、稳定性实验结果的RSD〈3％；各成分平均回收率均小于107％，RSD〈6％。结论：该方法快速简便、准确可靠，各主要化学成分均能达到基线分离，适用于淫羊藿药材的质量控制。

HPLC梯度洗脱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量

目的建立高效液相色谱法同时测定参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量的方法。方法采用Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流速：1.1 mL/min;流动相A为乙腈-甲醇（2∶1）,流动相B为0.1%冰醋酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为246 nm（补骨脂素和异补骨脂素）、270 nm（淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ）。结果补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在0.033 2～0.664 0μg（r=0.999 8）、0.022 6～0.452 0μg（r=0.999 1）、0.029 4～0.588 0μg（r=0.999 5）、0.024 2～0.484 0μg（r=0.999 4）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.48%、98.44%、99.13%、98.71%,RSD分别为0.92%、1.39%、1.17%、1.21%。结论本方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为参茸延龄片中补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量控制方法。

高效液相色谱波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ

目的建立HPLC波长切换法同时测定微达康膏中的梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的方法。方法采用Waters Nova-pak C_(18)色谱柱,以乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.9 mL·min^(-1)。结果梓醇、刺五加苷B、刺五加苷E、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ分别在4.53~90.60μg·mL^(-1)、6.18~123.60μg·mL^(-1)、3.92~78.40μg·mL^(-1)、7.51~150.20μg·mL^(-1)、7.14~142.80μg·mL^(-1)与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999、0.9998、1.000、0.9996、0.9999;平均加样回收率及相应的RSD分别为98.5%(1.2%)、98.9%(0.77%)、99.1%(0.90%)、97.5%(1.8%)、97.1%(0.84%)。结论本方法快速、准确度高、专属性好,可用于微达康膏的质量控制。

HPLC法测定不同产地淫羊藿药材中两种黄酮类化合物的含量

目的:建立HPLC法测定不同产地淫羊藿药材中淫羊藿苷、epimedokoreanosideΙ成分含量的方法。方法:色谱柱:Agilent Zorbax SB-C18柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,检测波长为270nm,流速为1.0m L·min^(-1)。结果:淫羊藿苷、epimedokoreanosideΙ成分的线性关系良好,线性范围分别为0.800~45.00,0.550~24.90mg·L^(-1);加样回收率分别为96.85%、98.16%,RSD分别为0.45%、1.28%(n=6)。结论:该方法准确、简便、重复性好。淫羊藿苷、epimedokoreanosideΙ为淫羊藿药材中特征性成分,可作为指标性成分用于淫羊藿药材的质量控制。

荧光光谱法研究淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白的相互作用(英文)

在模拟生理条件下应用荧光光谱学方法分别研究了淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与牛血清白蛋白(BSA)间的结合作用.根据荧光强度数据,计算出了结合常数KA,结合位点数n和热力学参数(△G,△H和△S).实验结果表明,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ都能显著猝灭BSA的内源荧光,猝灭机制均为形成基态复合物的单一静态猝灭过程.不同温度下(17℃,27℃,37℃)得到的KA和n值,表明淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合强于淫羊藿苷.从得到的热力学参数判断,淫羊藿苷与BSA间的主要作用力是氢键作用和范德华力,而疏水作用和静电引力在淫羊藿次苷Ⅰ与BSA形成复合物过程中起主导作用.而且同步荧光光谱显示,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅰ与BSA的结合导致BSA构象发生了变化.

淫羊藿苷及宝藿苷Ⅰ对气管切开模型大鼠肺组织病理学及炎症因子的影响

目的探讨淫羊藿苷及其代谢产物宝藿苷I对气管切开模型大鼠肺组织病理及炎症的影响。方法将72只SPF级雄性SD大鼠随机分成四组,正常对照组(A)、模型非用药组(B)、模型+宝藿苷I组(C)、模型+淫羊藿苷组(D),每组18只。制备大鼠气管切开插管留置模型。模型成功6h后给予C组宝藿苷I,D组淫羊藿苷干预,A、B组给与等量0.9%生理盐水。分别在24、72、168h取肺组织及肺泡灌洗液。肺组织用苏木精-伊红染色(HE染色),光镜下观察分析肺组织的病理学改变;ELISA检测肺泡灌洗液白细胞介素6(IL-6),肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果1)肺组织病理结果显示:气管切开后B组大鼠肺损伤程度随时间延长逐渐加重,明显高于A组(P<0.05)。C、D组肺损伤程度均明显轻于B组,且D组在24、168h均明显轻于C组(P<0.05)。D组在168h病理评分明显降低(与24h比较P<0.01)。(2)肺泡灌洗液IL-6、TNF-α含量:气管切开插管后大鼠肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量在三个时段均明显高于A组(P<0.05)。用宝藿苷I和淫羊藿苷干预后,C、D组IL-6、TNF-α含量在72、168h明显低于B组(P<0.05);且C、D组组内IL-6和TNF-α含量在72、168h明显低于24h(P<0.05);D组与C组相比,IL-6含量无明显统计学差异(P>0.05)。D组TNF-α在72h、168h均明显低于C(P<0.05)。结论宝藿苷I和淫羊藿苷对气管切开术后早期肺部炎症有一定疗效,其机制与抑制肺泡灌洗液炎症因子IL-6、TNF-α的表达,减轻肺组织损伤有关,且淫羊藿苷效果更佳。

淫羊藿次苷I通过Akt信号通路上调Bmi1促进小鼠精原干细胞增殖

目的:探究淫羊藿次苷I对小鼠精原干细胞增殖的促进作用及相关机制.方法:使用MTT实验、EdU细胞增殖实验检测淫羊藿次苷I对小鼠精原干细胞增殖能力的影响;Western blot法检测淫羊藿次苷I对Bmi1、p-Akt和Akt蛋白的表达情况;RT-PCR实验检测相关基因的表达结果,最后通过抑制剂和siRNA证明p-Akt和Bmi1蛋白之间存在上下游的调控关系.结果:与对照组相比,0.5-1μM淫羊藿次苷I促进小鼠精原干细胞增殖(P<0.05);相比于对照组,0.5-1μM淫羊藿次苷I处理组p-Akt和Bmi1蛋白表达水平上升(P<0.05);Akt抑制剂下调p-Akt和Bmi蛋白水平(P<0.05);siBmi1对Akt mRNA水平无显著影响(P>0.05).结论:淫羊藿次苷I激活Akt信号通路上调Bmi1表达促进小鼠精原干细胞增殖.

基于模型群体分析的淫羊藿抗骨质疏松活性成分筛选研究

筛选淫羊藿中对破骨细胞生长具有抑制作用的活性成分。搜集不同产地淫羊藿药材,MTT法考察不同产地淫羊藿抗前破骨细胞RAW264.7生长活性。结果显示不同产地淫羊藿的抗RAW264.7生长活性具有显著差别。采用模型群体分析,一个具有潜在活性的化合物宝霍苷I被筛选出。通过破骨细胞活性验证,发现宝霍苷I活性优于淫羊藿苷。模型群体分析方法适用于指导中药活性成分预测及发现,为中药活性成分筛选提供了新方法。

基于淫羊藿黄酮类化合物的体内代谢阐述其抗骨质疏松药效物质基础

全面系统阐述了淫羊藿饮片中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I、淫羊藿苷5种主要黄酮类化合物的体内代谢过程,整理了5种黄酮类化合物的体内代谢产物与代谢途径;基于5种黄酮类化合物主要体内代谢产物,总结其共性代谢规律和共有代谢产物,并结合淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷、宝藿苷I、淫羊藿素的抗骨质疏松药理作用及其作用机制,初步推断淫羊藿黄酮类化合物中的次糖苷和苷元是淫羊藿黄酮类化合物的主要体内代谢产物,次糖苷和苷元也可能是淫羊藿总黄酮抗骨质疏松重要药效物质基础。为淫羊藿饮片及淫羊藿黄酮类化合物抗骨质疏松药效物质基础及机制研究和抗骨质疏松有效药物研发提供了重要依据和指导。

淫羊藿苷仿生酶解过程的多因素考察

本实验对影响淫羊藿苷仿生酶解成宝藿苷Ⅰ的多种因素进行考察,并选择最佳反应条件,为构建新型的淫羊藿苷仿生酶解给药系统提供研究基础。以酶解温度为37℃、缓冲溶液为人工肠液和人工胃液模拟体内环境,并以宝藿苷Ⅰ转化率为指标,考察酶的种类、酶活力、水解底物浓度、反应时间、人工肠液中胰酶及表面活性剂对宝藿苷Ⅰ生成的影响。结果表明:在人工胃液中纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和蜗牛酶均失活,基本没有宝藿苷Ⅰ生成;人工肠液中胰酶对β-葡萄糖苷酶、蜗牛酶酶解反应没有明显影响(P>0.05),但显著降低纤维素酶的活性(P<0.05)。人工肠液中β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷得到的宝藿苷Ⅰ最多,最佳反应条件为酶活力10 U mL 1、底物浓度1 mg mL 1和3 g L 1鼠李糖脂,反应时间3 h,此条件下宝藿苷Ⅰ转化率达99.8%。

淫羊藿低糖苷组分对UMR-106细胞及骨质疏松斑马鱼作用的研究

目的研究淫羊藿低糖苷组分(LGFEH)对UMR-106细胞和波尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼的作用。方法将不同质量浓度的LGFEH与UMR-106细胞共同培养后,MTT法测定LGFEH对UMR-106细胞增殖的影响,通过测定细胞内外碱性磷酸酶(ALP)活性评价LGFEH对细胞分化的影响。将受精后3 d的斑马鱼幼鱼分为空白培养基组、0.5%DMSO溶媒对照组、泼尼松龙组、依替膦酸二钠组、LGFEH(1、2、4、8、16μg/m L)组。每天换液至受精后9 d,处死,采用茜素红对各组斑马鱼幼鱼骨骼染色,并以显微检测、数码成像方法定量分析骨骼染色区域。结果 LGFEH不仅可以促进成骨样细胞UMR-106细胞的增殖,促进其合成和分泌ALP,而且能够显著增加斑马鱼头部骨骼染色面积(矿化面积)和染色累积吸光度值(骨密度)。结论 LGFEH体内及体外具有较好的抗骨质疏松作用。

HPLC法同时测定淫羊藿-川芎药对8种化学成分的含量

目的：建立补肾活血药对淫羊藿-川芎中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷-I、川芎嗪、阿魏酸和藁本内酯8种成分的HPLC含量测定方法,明确配伍对8种成分含量变化的影响。方法：采用RP-HPLC多波长切换梯度洗脱技术。色谱柱：Waters X Bridge-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相：乙腈-1%醋酸梯度洗脱;流速：1.0 m L·min^-1;分别以各成分最大吸收波长为检测波长;柱温：30℃。结果：淫羊藿-川芎药对中淫羊藿苷、川芎嗪、阿魏酸等8成分均呈良好的线性关系（r≥0.999）;平均加样回收率（n=6）为97.7%-103.8%（RSD〈3%,n=6）。淫羊藿、川芎配伍后川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯的含量分别由0.714、2.701、12.930 mg·g^-1变成1.492、3.032、13.97 mg·g^-1,含量显著增加,而淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和宝藿苷-I的含量分别由5.190、1.762、2.423、1.965、0.712 mg·g^-1变成5.475、1.645、2.440、2.035、0.729 mg·g^-1,含量则无明显变化。结论：该方法简便快速,结果准确可靠,方法重复性好,可用于淫羊藿-川芎药对及其制剂的质量控制,并为淫羊藿、川芎的临床配伍应用及其研究提供科学依据。

壳聚糖交联介孔二氧化硅固定化β-葡萄糖苷酶生物转化淫羊藿苷研究

目的制备壳聚糖交联SBA-15型介孔二氧化硅(SBA-15)固定化β-葡萄糖苷酶(β-Glc),促进淫羊藿苷高效转化为稀有宝藿苷I。方法采用吸附-交联法将β-Glc固定在壳聚糖交联SBA-15上,以载酶量和相对酶活力为评价指标,对其固定化条件进行优化;采用透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和N2吸附-脱附分析法对固定化酶进行表征,并对其酶泄露行为进行考察;以淫羊藿苷为底物,以游离酶为对照,考察固定化酶的最适酶解条件、酶解动力学和重复利用性。结果制备交联SBA-15固定化β-Glc的最佳p H值为6.0,固定化时间为8h,酶质量浓度为7 mg/mL;固定化酶的酶活力为439.2μmol/(h·g),载酶量为1.120 g/g载体,最适酶解条件为pH 6.0,转化温度50℃,底物质量浓度0.5 mg/mL,转化时间8 h,酶解动力学参数最大反应速率(V_(max))为10.24μg/min,米氏常数(K_(m))为16.15 mmol/L,重复利用5次后残余酶活大于80%。结论制备的交联SBA-15固定化β-Glc载酶量高、转化能力强、重复利用性好,可用于高效获取宝藿苷I。