IRES特异性IRNA对HCV IRES启动蛋白翻译细胞内抑制作用

目的:研究核糖体内部进入位点(internalribosomeentrysite,IRES)特异性抑制性RNA(inhibitorRNA,IRNA)细胞内对丙型肝炎病毒(HCV)IRES介导蛋白翻译的抑制作用.方法:体外应用脂质体细胞转染法,将IRNA及其突变体mIRNA真核表达载体pcRz-IRNA/pcRz-mIRNA转染人肝癌细胞株(HHCC),经G418筛选4wk后建立IRNA及mIRNA表达株;以相同的方法构建pcHCVcluc转染株;以脂质体介导细胞转染法将pCMVNCRLuc转染IRNA及mIRNA细胞株,于转染后48h检测荧光素酶表达量;将IRNA及mIRNA真核表达体转染pcHCVcLuc表达株,于转染后不同时间检测荧光素酶表达量.结果:HCVIRES介导蛋白翻译在IRNA表达株明显受到抑制,同样IRNA对HCV翻译复制子的蛋白翻译作用有明显抑制性;突变体mIRNA表达株和空载体对照株中未见相似的抑制性.结论:pcHCVcluc在HHCC细胞中获得有效表达;IRES特异性IRNA能有效的抑制HCVIRES介导细胞内蛋白翻译作用.

抗肝癌iRNA及S-TF对肝癌患者LAK活性、IL-2活性及IL-2R表达的调节效应

观察抗肝癌iRNA及S－TF对原发性肝癌（PHC）患者外周血LAK、IL－2活性及IL－2R表达的影响。发现PHC病人LAK、IL－2活性及IL－2R表达均明显低于正常人，且IL-2与LAK间呈正相关；经抗肝癌iRNA及S-TF治疗后，PHC病人的上述指标及WBC数均较治疗前显著升高。提示PHC病人的免疫功能低下或紊乱可能与肿瘤的发生及发展有关，应用抗肝癌iRNA及S－TF可给肿瘤宿主转移介导其细胞免疫功能，改善其免疫状态。

5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响

目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响。方法将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制。再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型。裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2)。接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积。Westernblot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖。

siRNA抑制X连锁凋亡抑制蛋白基因对人HeLa细胞凋亡及周期的影响

目的：探讨特异性 siRNA 对宫颈癌 Hela 细胞 X 连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因的抑制作用及其抑制后细胞凋亡和细胞周期的变化。方法设计合成 XIAP 特异性抑制 siRNA，并将 Hela 细胞分成4组，即观察组（pG-PU6／GFP／Neo ／XIAP -siRNA 转染细胞）、空白组（未加 siRNA 及转染试剂）、NC 组（阴性对照，为所选目的序列被无序打乱的 siRNA 转染）、Mock 组（转染试剂对照，加转染试剂未加 siRNA）。RT-PCR 法检测各组 XIAP mRNA 表达情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及细胞周期变化。结果转染48、72 h，观察组 XIAP mRNA 表达分别为20．20±0．10、19．99±0．14，空白组分别为21．43±0．04、20．95±0．15，两组比较均有统计学差异（P 均＜0．05）。转染48 h，观察组、空白组细胞凋亡率分别为（28．91±0．12）％、（9．73±0．02）％；转染72h，观察组、空白组细胞凋亡率分别为（37．29±0．10）％、（10．62±0．04）％；观察组细胞凋亡率均高于空白组（P 均＜0．05）。空白组、Mock组、NC 组间 XIAP mRNA 表达、细胞凋亡率比较均无统计学差异（P 均＞0．05）。与空白组相比，观察组转染48、72 h 后 G0～G1期细胞增多而 S 期细胞减少（P 均＜0．05）。结论特异性 XIAP-siRNA 可有效沉默宫颈癌 Hela 细胞XIAP 基因，抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。

siRNA介导的HPV16E6/E7基因沉默对宫颈癌SiHa增殖及凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)介导的人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因沉默对宫颈癌Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。方法设计靶向HPV16 E6/E7基因启动子区的siRNA序列,构建质粒转染Si Ha细胞,筛选稳定沉默E6/E7基因的细胞系。用QT-PCR和RT-PCR检测细胞E6/E7基因mRNA的变化、Western blot检测细胞E6/E7蛋白变化;利用MTT、RT-PCR、免疫组化法检测细胞增殖情况,Tunel检测细胞的凋亡情况。结果成功构建E6/E7基因稳定沉默的细胞株,其mRNA与蛋白沉降效率明显。MTT及Ki-67表达显示细胞增殖活性降低;Tunel显示沉默细胞凋亡增加。结论 siRNA技术可以成功诱导HPV16型E6/E7基因沉默,从而影响癌细胞的生长、增殖和凋亡。

5-LOX siRNA人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤模型的建立及意义

目的建立5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)5-LOX siRNA转染人肝癌细胞HepG2裸鼠瘤动物模型,探讨iR-NA干扰技术在裸鼠瘤模型中应用的可行性,为肿瘤的实验研究提供平台。方法分别用pRNAT-U6.1-5-LOX siRNA转染的HepG2细胞、空白质粒pRNAT-U6.1转染的HepG2细胞和未转染的HepG2细胞接种裸鼠建立移植瘤模型,分为转染组、转染空载体组和未转染组。建模前,用免疫荧光定量PCR检测转染HepG2细胞5-LOX mRNA表达,成瘤后测量种植瘤体积,并用Western-blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX的蛋白和mRNA表达。结果 5-LOX siRNA转染的细胞5-LOX mRNA表达量下降(P<0.01),转染组肿瘤平均体积与转染空载体组及未转染组比较明显减小(P<0.01),而且瘤体5-LOX蛋白及mRNA表达量亦明显下降(P<0.01)。结论 5-LOX siRNA转染肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤瘤实验模型建立成功。将干扰技术和裸鼠移植瘤相结合,为肿瘤的实验研究提供一种更可靠有效的研究方法。

乙肝六号片联合抗乙肝IRNA治疗慢性乙型肝炎

1 一般资料 自1995年2月～1996年11月,我们在本院乙肝门诊及传染科病房治疗慢性乙型肝炎147例。其诊断符合1995年(北京)会议修订的诊断标准。随机分为两组:治疗组89例,男63例,女26例,年龄14～16岁,病程6个月～16年。其中HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-NBc(+)者52例,HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)者31例;

抗禽流感iRNA提取及其部分免疫活性的研究

为了比较不同方法抽提抗禽流感iRNA的含量、纯度,以及了解iRNA对小鼠的免疫活性,本研究就抗禽流感iRNA提取及其部分免疫活性进行了研究。结果表明:酚-氯仿抽提与Trizol reagent试剂盒抽提的效果差异不显著,所得到的iRNA含量和纯度较高,而冷热酚法抽提的效果则明显不及酚-氯仿法与Trizol reagent试剂盒;小白鼠腹腔注射提取的iRNA制剂,小白鼠生长良好,10 d内未见小白鼠有死亡,由此说明iRNA对小白鼠是安全的;禽流感HI试验及ELISA试剂盒检测iRNA免疫小白鼠血清抗体,结果为阴性,由此说明抽提的iRNA不能诱导机体产生体液免疫。

介绍一种制备特异性TF和特异性iRNA的方法

以乙肝疫苗、人喉癌细胞膜抗原为抗原，猪脾细胞为效应细胞，经体外免疫后收集应答细胞，制备ＰＳＨＢＶ－ＴＦ和ＰＳＡＣ－ｉＲＮＡ。通过抗原特异性细胞免疫功能试验证实，ＰＳＨＢＶ－ＴＦ和ＰＳＡＣ－ｉＲＮＡ都能转移特异性细胞免疫功能。采用体外免疫法制备ＰＳＨＢＶ－ＴＦ和ＰＳＡＣ－ｉＲＮＡ是可行的，并且具有诸多优点。

抗瘤iRNA、S－TF联合化疗对消化道肿瘤病人LAK、IL－2活性及IL－2R表达的影响

抗瘤ｉＲＮＡ、Ｓ－ＴＦ联合化疗对消化道肿瘤病人ＬＡＫ、ＩＬ－２活性及ＩＬ－２Ｒ表达的影响张方信，袁爱力，梁守德，邓芝云兰州军区总医院消化科（兰州市·７３００５０）生物学反应调节治疗，是肿瘤综合治疗的一种新途径。抗瘤免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ）及肿瘤特异性...

IRES特异性IRNA在丙型肝炎抗病毒治疗中作用

丙型肝炎基因治疗是目前研究的热点,HCVIRES是丙肝病毒核酸复制和蛋白翻译的关键结构.目前针对IRES结构的治疗策略主要包括反义核酸、核酶、抑制性RNA等.现就抑制性RNA在HCV感染基因治疗中作用研究进展作简要综述.

iRNA对家兔急性实验性血清病的免疫调节作用

本实验以一次性静脉注射BSA诱发的家兔急性实验性血清病(AESS)为模型。于免疫后连续4天用iRNA处理模型动物,观察了iRNA对AESS家兔的血清学和免疫病理学影响,并建立了家兔血清补体旁路活性的检测方法。结果表明:iRNA能降低AESS家兔循环特异性抗体和特异性免疫复合物水平,减轻血清补体消耗,减少肾小球内免疫复合物的沉积和炎性细胞的浸润,使肾炎病变得以缓解。提示:iRNA可能通过抑制特异性体液免疫应答,发挥对AESS的免疫调节作用,从而减轻其免疫病理损伤的程度。

体外免疫法制备特异性iRNA

体外免疫法制备特异性ｉＲＮＡ０５００２１河北省医学科学院韩彩芝，余素清，傅宏杰，魏丽君免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ），尤其是抗癌特异性ｉＲＮＡ在实验研究中能特异性增强细胞免疫功能［１］，增强ＬＡＫ细胞的杀瘤活性［２］。但现阶段因制备特异性ｉＲＮＡ的细胞来源...

腹腔内注射抗-HB IRNA治疗慢性乙型肝炎25例

我们用抗乙肝免疫核糖核酸(抗-HB IRNA)对75例慢性乙型肝炎患者采用不同给药途径和用药剂量进行观察治疗,其中25例患者经腹腔内注射的疗效较肌内注射者好,现总结如下。 1 对象与方法 1.1 病例选择 75例慢性乙型肝炎(中度)为我院住院患者,诊断标准按1995年5月(北京)

朝阳丸、抗乙肝iRNA联用乙肝疫苗治疗乙肝疗效观察

朝阳丸、抗乙肝ｉＲＮＡ联用乙肝疫苗治疗乙肝疗效观察臧淑华范国友董杰张艳琴（通化钢铁公司职工医院传染科１３４００３）我科于１９９３年１１月起采用朝阳丸（丹）及抗乙肝免疫核糖核酸（抗乙肝ｉＲＮＡ）联用乙肝疫苗对慢性乙型肝炎及乙肝病毒携带者进行了疗效观察。...

一种快速分离提纯iRNA的新方法

免疫核糖核酸(immuno ribonucleicacid,iRNA)属mRNA,没有种属特异性,可超越种属界限传递特异性免疫活性。这种免疫应答能力的传递既包括体液免疫,又包括细胞免疫。实验证明,在体液免疫方面,iRNA无论在体内还是在体外均能诱导特异性抗体的产生,形成免疫记忆。在细胞免疫方面,iRNA能够增强巨噬细胞的吞噬、杀抑细菌的功能,而且还能诱导干扰素等重要淋巴因子的产生。因此说iRNA具有强免疫活性,可用于多种疾病的治疗。

抗癌免疫核糖酸（IRNA）对晚期恶性肿瘤的疗效观察

目的 应用抗癌ＩＲＮＡ治疗晚期恶性肿瘤，以观察其临床疗效。方法 应用抗癌ＩＲＮＡ＋常规化疗８５例作为治疗组，单纯用化疗５１例作为对照组。所有病例均采用肌肉注射和投药器级药，其中乳腺癌３４例、胃癌３１例，大肠癌１４例，肝癌６例，所有病例均有病理诊断及可观察指标。通过Ｘ片、Ｂ超、ＣＴ等客观指标观察其病灶变化，免疫指标抗提高情况以白细胞升降情况。结果

FCA-iRNA对正常小鼠胸腺.脾形态结构及细胞免疫的影响

本文探讨了福氏完全佐剂免疫核糖核酸对正常小鼠胸腺、脾形态结构的影响。观察结果:胸腺重量增加,皮质增厚,胸腺细胞密集,母细胞型胸腺细胞和核分裂增多;脾重量增加,脾小体数目增多,体积增大;同时使末梢血白细胞、淋巴细胞,尤其T淋巴细胞升高。

特异性iRNA预防烧伤感染和改善伤后受损免疫功能的研究

特异性ｉＲＮＡ预防烧伤感染和改善伤后受损免疫功能的研究①１３２０１１吉林解放军第４６５医院卓安山陈爱娟申繁星张德林②王希珍②关键词灼伤；感染；免疫抑制中国图书资料分类号Ｒ６４４烧伤感染与伤后引起的免疫抑制有关，逆转和（或）纠正烧伤患者的免疫功能紊乱，...