脑膜炎大肠杆菌侵袭素ibeA蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:为了研究大肠杆菌ibeA的有效表达方法。方法:通过PCR扩增得到大量ibeA基因,并将扩增后的ibeA蛋白基因插入pGEX载体,转化E.coliDH5α,得到ibeADNA重组子的克隆。并以包涵体和可溶形式获得大量表达。结果:亲和层析纯化后获得了大量纯化蛋白,所获得的ibeA蛋白具有良好的抗原性。结论:该方法为进一步研究ibeA介导E.coli穿入血脑屏障的机理,以及筛选ibeA侵袭素的拮抗剂奠定了基础。

禽致病性大肠杆菌ibeA基因缺失及其特性分析

运用大肠杆菌Red同源重组系统,对禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)DE02株的ibeA基因进行了缺失,其结果为揭示IbeA的功能奠定了基础。通过对APECibe A基因缺失株与人脑微血管内皮细胞(Human brain microvascular endothelial cells,HBMECs)的黏附与侵袭,发现ibeA基因缺失后与HBMECs的黏附率为45%,侵袭率为1.2%,相对于野生型APEC均显著降低;提示ibeA基因是APEC的重要致病因子。