microRNA-125b对人视网膜母细胞瘤增殖和凋亡作用实验研究

目的:探讨microRNA-125b(miR-125b)在人视网膜母细胞瘤细胞中的表达,及其对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:采用RT-PCR方法检测miR-125b在视网膜母细胞瘤细胞系Y79中的表达;构建miR-125b过表达(miR-125bmimic)和抑制载体(miR-125inhibitor)转染Y79细胞,检测miR-125b表达情况;通过细胞凋亡实验和细胞增殖实验(CCK-8)观察miR-125b过表达和抑制表达后,对肿瘤细胞增殖力和凋亡的影响。结果:miR-125b在人视网膜母细胞瘤细胞系中Y79细胞系中呈高表达;miR-125bmimic组(Y79+miR-125bmimic)中miR-125b的表达较miR-NC组(未处理的Y79细胞)表达显著增多,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-125binhibitor组(Y79+miR-125binhibitor)中miR-125b的表达较miR-NC组表达显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-125bmimic组较miR-NC组相比,Y79细胞增殖力显著增高,细胞凋亡显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05);而miR-125inhibitor组较miR-NC组相比肿瘤细胞增殖力显著下降,细胞凋亡率显著提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-125b可能是通过DRAM2基因来发挥其致癌作用;结论:miR-125b可能作为癌基因在视网膜母细胞瘤中发挥作用,并对肿瘤细胞增殖和凋亡具有显著影响。

MicroRNA-126慢病毒增强MSCs-水凝胶修复下颌骨缺损效果的研究

目的构建MicroRNA-126慢病毒载体以及研究MicroRNA-126对缺血条件下间充质干细胞存活和成骨分化的影响。方法构建MicroRNA-126慢病毒载体并感染间充质于细胞（Mesertchymalstemcells，MSCs）；流式检测转染能力和MSC合成Ⅰ型胶原能力；ELISA检测细胞培养上清中骨钙素、胰岛素样生长因子1（Insulin—likegrowthfactor1，IGF-1）和转化生长因子p（Transforminggrowthfactor-β，TGF-β）的含量；构建下颌骨骨缺损模型，在体内注射混合有MSCs的水凝胶，移植48h，检测存活率和分化为成骨细胞的比率。结果流式的结果显示MicroRNA-126的慢病毒载体能顺利的转染进入细胞；ELISA的结果显示MicroRNA-126的慢病毒载体转染的MSC能分泌更多的骨钙素、IGF-1和TGF-β，相对于对照病毒处理组分别上升了1．43、1．87和2．63倍（P〈0．05）；动物实验的结果显示移植48h后，MicroRNA-126组存活的干细胞的数量是对照病毒组的4．56倍，分化为成骨细胞的MSC的比例为75％，是对照病毒组的3．95倍（P〈0．05）。结论MicroRNA-126可以维持缺血条件下间充质干细胞存活及其向成骨细胞的分化。

荧光定量PCR对微小RNA的检测及应用

目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.