鲤春病毒血症病毒糖蛋白的截短表达及其免疫原性分析

为了揭示鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus,SVCV）糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域,本研究对SVCV的糖蛋白基因进行截短表达,并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。通过SOSUI以及DNAStar 6.0软件对SVCV糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后,采用RT-PCR对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增,并构建重组表达质粒p GEX-Gtr,对其进行诱导表达后获得截短的SVCV糖蛋白的重组蛋白。将表达的重组蛋白进行纯化复性后,作为免疫原制备兔抗血清,采用ELISA法检测其效价,采用免疫印迹以及间接免疫荧光技术检测该重组蛋白的免疫原性。研究结果显示,截短表达的糖蛋白编码基因长1317 bp,编码439个氨基酸（29~467）,推测分子量为49.6 k D。利用该重组蛋白制备的兔抗血清,其与重组蛋白的反应效价为1∶64000,。免疫印迹及间接免疫荧光结果显示,该兔抗血清与SVCV-HN株能发生特异性反应,表明该重组蛋白与天然的病毒表面糖蛋白的免疫原性无差异。上述研究结果表明,截短表达的重组蛋白具有很好的免疫原性,可应用于免疫诊断技术研发与基因工程疫苗的研制。

LTB-hpaA融合基因原核表达产物的鉴定及其免疫保护作用

分别从幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）临床菌株Y06和大肠杆菌44851株DNA中扩增1tB和hpaA基因，构建1tB-hpaA融合基因厦其原核表达系统，鉴定其表达产物的免疫原性、佐荆活性及其对Hp SS1株感染小鼠的保护作用．采用PCR分别从上述菌株DNA中扩增hpaA基因和1tB基因片段，构建1tB-hpaA融合基因，T—A克隆后测定核苷酸序列．采用质粒pOE32和宿主菌E．coliM15构建1tB-hpaA融合基因表达系统，并用不同浓度的IPTG诱导表达．采用western blot和GM1—ELISA鉴定表达产物的抗原性、免疫反应性和佐荆活性．建立HP SS1株感染BALB／e小鼠模型，检测rLTB-HpaA的免疫保护效果．采用ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中HpaA抗体和41株Hp临床菌株HpaA表达情况．与Gen Bank登录的相关序列比较，所构建的ltB-hpaA融合基因核苷酸序列同源性分别为94．25％～99．71％和95．38％～99．19％．所构建的表达系统pQE32-1tB-hpaA—M15的目的重组蛋白（rLTB-HpaA）表达量高达细菌总蛋白的1／3左右．rLTB-HpaA能与Hp全菌抗体发生结合反应，免疫家兔能产生特异性抗体．GM3-ELISA结果显示rLTB-HpaA能与牛GM1结合．rHpaA免瘦小鼠的保护率仅为66．7％，rLTB-HpaA免疫小鼠的保护率可增至83．3％.81．6％患者血清（102／125）HpaA抗体检测结果阳性，所有菌株均含有HpaA．本文成功地构建了ltB-hpaA融合基因高效原核表达系统，所表达的rLTB-HpaA有良好的免疫原性和佐剂活性，并对Hp感染小鼠有较强的免疫保护作用．

吸附无细胞百白破联合疫苗加强免疫与水痘减毒活疫苗联合接种的效果观察

目的评价吸附无细胞百白破联合疫苗(Diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,DTaP)加强免疫单独接种和同时接种水痘减毒活疫苗(Varicella attenuated live vaccine,VarV)的免疫效果。方法选取满18月龄且已完成DTaP基础免疫的健康儿童218名,其中110人接种DTaP,108人同时接种DTaP和VarV。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前、后抗百日咳毒素抗体(Antibody to pertussis toxin,Anti-PT)、抗丝状血凝素抗体(Antibody to filamentous hemagglutmin,Anti-FHA)、抗白喉毒素抗体(Antibody to diphtheria toxin,Anti-DT)和抗破伤风毒素抗体(Antibody to tetanus toxin,Anti-TT),计算抗体几何平均浓度(Geometric Mean Concentration,GMC)和抗体阳转率(Seroconversion rate,SCR)。结果单独接种组和同时接种组免疫后Anti-PT、Anti-FHA、Anti-DT和Anti-TT的SCR分别为43.64%、81.48%(x^2=33.26,P=0.000),72.73%、85.19%(x^2=0.84,P=0.358),90.00%、85.18%(x^2=1.16,P=0.281),13.64%、11.11%(x^2=0.32,P=0.571);GMC分别为94.74IU/ml、98.86IU/ml(t=1.15,P=0.251),39.59IU/ml、44.10IU/ml(t=1.90,P=0.059),1.89IU/ml、1.47IU/ml(t=3.83,P=0.000),3.85IU/ml、2.72IU/ml(t=5.51,P=0.000)。两组Anti-PT、Anti-FHA免疫前阴性者免疫后SCR高于免疫前阳性者。同时接种组免疫后Anti-PT、Anti-FHA的GMC增长高于单独接种组,而免疫后Anti-DT、Anti-TT的GMC增长低于单独接种组。结论 DTaP加强免疫对预防百日咳的保护力有限,对预防白喉、破伤风的加强免疫时间可以延长,同时接种DTaP和VarV对DTaP的免疫原性无影响。

非脊髓灰质炎肠道病毒感染对口服脊髓灰质炎减毒活疫苗免疫原性影响的Meta分析

目的评价非脊髓灰质炎（脊灰）肠道病毒感染（Non-Poliomyelitis Enteroviruses Infection,n PEI）对口服脊灰减毒活疫苗（Oral Poliomyelitis Attenuated Live Vaccine,OPV）免疫原性的影响。方法电子检索美国国家医学图书馆数据库（National Center for Biotechnology Information,NCBI）、考克兰（Cochrane）协作网图书馆等数据库,将有关nPEI对OPV免疫原性影响的研究纳入分析。使用综述管理（Rev Man）5.1软件进行统计分析。结果共纳入13篇文献,nPEI对接种OPV后血清阳转率影响的相对危险度（Relative Risk,RR）是0.87[95%可信区间（Confidence Interval,CI）：0.79-0.97],其中nPEI对接种单价（Monovalent）OPV（mOPV）后阳转率影响的RR是0.69（95%CI：0.63-0.76）,对接种三价（Trivalent）OPV（tOPV）后阳转率影响的RR是0.96（95%CI：0.84-1.09）;nPEI对肠道疫苗病毒排出率（Vaccine Virus Shedding Rate,VVSR）影响的RR是0.78（95%CI：0.61-1.00）,其中nPEI对接种mOPV后VVSR影响的RR是0.54（95%CI：0.45-0.64）,对接种t OPV后VVSR影响的RR是1.11（95%CI：0.83-1.46）。结论 nPEI可降低OPV血清型Ⅰ免疫原性的同时,也可降低mOPV的免疫原性。提示制定OPV免疫策略时,应考虑nPEI的因素,如尽量避开nPEI高发季节。