鸡Piwi蛋白的亚细胞定位研究

通过构建2种真核表达载体比较Piwi蛋白在真核细胞中的表达部位,为进一步研究Piwi蛋白的生物学功能提供依据。采用RT-PCR方法克隆了狼山鸡睾丸组织中Piwi基因CDS,构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-Piwi,脂质体PEI介导基因转染NIH-3T3细胞,同时构建pcDNA3.1-Piwi真核表达载体,采用细胞间接免疫荧光方法检测Piwi蛋白在NIH-3T3细胞的表达部位。结果表明,成功克隆出公鸡Piwi基因的全序列CDS,大小为2 604bp,与GenBank中预计的序列基本一致;融合表达载体pEGFP-C1-Piwi在整个细胞中都有表达;而间接免疫荧光方法检测到pcDNA3.1-Piwi载体主要在NIH-3T3细胞质中表达。Piwi蛋白主要在细胞质中表达,采用间接免疫荧光方法比EGFP报告基因法更为可靠,适合目的蛋白的亚细胞定位研究。

不典型抗中性粒细胞胞质抗体阳性伴肾脏受累的临床分析

目的:研究不典型抗中性粒细胞胞质抗体(A鄄ANCA)阳性伴肾脏受累者的临床和病理特点。方法:以间接免疫荧光(IIF)法作初筛,阳性及可疑血清经酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测蛋白酶3(PR3)和髓过氧化物酶(MPO)两种靶抗原特异性。结果:肾脏受累伴A鄄ANCA阳性患者6例,男性3例(58～72岁),女性3例(28～40岁),IIF法示细胞内弥漫性细颗粒状荧光亮染,MPO鄄ANCA及PR3鄄ANCA均阴性。多系统受累,肾小管功能不同程度受累,2例肾损均见于男性,4/6例合并肝脏受累。结论:①男性发病年龄晚,临床表现重,部分伴肾功能受累。②多脏器损害以肝脏受累尤为突出,肺部、肾脏受累比例及程度远较MPO鄄ANCA及PR3鄄ANCA阳性患者小而轻。③肾脏损害无特异性,肾小管功能轻度异常较多见。④患者自身免疫功能紊乱,多项免疫指标异常,不排除GS鄄ANA与ANCA部分交叉现象。⑤靶抗原与MPO、PR3关联程度较少,临床、病理表现存在差异。

磁刺激对小鼠海马原代神经元即刻早期基因和细胞骨架蛋白表达的影响

目的：观察磁刺激对小鼠海马原代神经元c-fos、活性调节的细胞骨架蛋白（Arc）和微管相关蛋白2（MAP2）的表达及神经元突起生长的影响，探讨磁刺激对细胞突起生长的影响机制。方法：体外培养的海马原代神经元，分为对照组，假刺激组，20％（20％强度组）、30％（30％强度组）、40％最大刺激强度组（40％强度组），24h后开始刺激，频率1Hz，最大输出强度3．7T。连续刺激5d后应用荧光显色检测c-fos、Arc和MAP2阳性神经元免疫荧光强度，计数MAP2阳性神经元多突起神经元个数及细胞突起长度，并应用免疫印迹和RT-PCR技术对免疫荧光显色结果进行验证。结果：磁刺激能促进小鼠海马原代神经元突起数目和长度的生长，3个强度组多突起神经元（n≥2）占总神经元的比例以及海马原代神经元突起长度均高于对照组，且30％强度组高于20％、40％强度组，结果有统计学意义。免疫荧光显色30％强度组c-fos阳性神经元比例、Arc和MAP2免疫荧光强度高于相关对照组，差异有统计学意义。免疫印迹和RT-PCR结果同免疫荧光显色结果一致。结论：磁刺激能促进体外培养的海马原代神经元突起生长，其机制可能和c-fos、Arc和MAP2的表达上调有关。

中国西南地区儿童Alport综合征临床及病理特点

目的:分析中国西南地区儿童Alport综合征(Alport syndrome,AS)临床及病理特点。方法:回顾性分析中国西南地区20例AS患儿病例资料,采用间接免疫荧光法检测Ⅳ型胶原α链在患儿肾脏、皮肤组织的表达,并比较不同临床表型的AS患儿的临床及病理特征。结果:该组患儿以血尿合并蛋白尿为最常见首发症状,首发症状为孤立蛋白尿的患儿24 h尿蛋白水平较血尿合并蛋白尿者高(H=11.959,P=0.003)。有蛋白尿的患儿其家族中尿毒症患者的比例(6/16)较血尿表现者多(1/4)。光镜病理改变以轻中度系膜增生性肾小球肾炎(70.00%)多见,不同临床表型的AS患儿其病理类型分布无统计学差异(χ2=4.149,P=0.900),60.00%的AS存在间质细胞泡沫样,其尿蛋白水平明显高于无间质泡沫样改变者(T=-2.083,P=0.039)。肾脏α5(Ⅳ型)链免疫荧光结果分析,15例(75.00%)为X性连锁显性遗传性AS(X-linked dominant inherited Alport syndrome,XLAS),余5例尚不能根据α5(Ⅳ型)链的缺失判断其遗传类型。2例患儿同时行皮肤基底膜α5(Ⅳ型)链检测,结果与肾脏检测一致。结论:中国西南地区儿童AS血尿合并蛋白尿是最常见首发症状,主要遗传方式为XLAS(75.00%)。不同临床表型的AS患儿其病理类型分布无统计学差异,但蛋白尿越重,其肾小管间质泡沫样改变越重。皮肤活检诊断XLAS与肾脏检测结果一致,必要时可替代肾活检,对家系调查筛选携带者及遗传咨询具有重要意义。

抗体偶联药物在乳腺癌治疗中的研究进展

抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADCs)是一类由单克隆抗体经由连接子与细胞毒性化疗药物相结合的药物。ADCs具有靶向性,与传统化疗药物相比,具有更高的抗肿瘤活性及更低的毒副作用。目前,包括曲妥珠单抗-美坦新偶联物(T-DM1)、DS-8201在内的多种ADCs在肿瘤治疗方面已显示出良好的临床应用前景,本文就ADCs在乳腺癌治疗的应用进展作一综述。