嗜水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素+弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。

BSA-ISCOMs对大黄鱼免疫机能及抗病力的影响

利用免疫刺激复合物(ISCOMs)非特异免疫增强作用和可经黏膜呈递的特点,将BSA制备成ISCOMs(BSA-ISCOMs),大黄鱼连续口服免疫10d。免疫后第15d和30d采血,测血清部分非特异性免疫指标。结果显示,免疫后第15d,试验组血清SOD、补体C3、总蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),γ-干扰素高于对照组,但差异不显著(P>0.05),溶菌酶则显著低于对照组(P<0.05);免疫后第30d,除溶菌酶外,试验组各指标与对照组差异不显著(P>0.05)。免疫完成后第30d,创伤弧菌(Vibrio vulnificus)攻毒结果显示,对照组死亡率100%,试验组死亡率26.7%,相对免疫保护率为73.3%。因此,口服BSA-ISCOMs在一定药效期限内能有效提高大黄鱼的免疫机能,增强抗病能力。

BSA-ISCOMs对欧洲鳗鲡免疫效应及抗细菌性病原的效果研究

为证实免疫刺激复合物(ISCOMs)的非特异免疫增强作用,将牛血清白蛋白(BSA)制备成ISCOMs(BSA-ISCOMs).将欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)随机分为3组,分别用BSA-ISCOMs、BSA和磷酸盐缓冲液(PBS,对照组)腹腔注射免疫.二次免疫完成后第30d采血,测血清部分非特异性免疫指标,剩余鳗鲡分别用创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和嗜水气单胞菌(Aeromona hydrophila)攻毒.结果显示,BSA-ISCOMs组的血清溶菌酶活力显著高于BSA组和对照组(p≤0.05);超氧化物歧化酶(SOD)和补体C3活力与对照组无显著差异(p>0.05).攻毒结果显示,BSA-ISCOMs组的存活率显著高于BSA组和对照组(p≤0.05),对创伤弧菌和嗜水气单胞菌攻击的相对免疫保护率分别为43.3%和51.7%.表明BSA-ISCOMs能有效增强欧洲鳗鲡对主要病原创伤弧菌和嗜水气单胞菌的抗病能力.

ISCOMs作为粘膜免疫佐剂在避孕疫苗构建中的作用研究

目的 探索有效提高避孕疫苗生殖道粘膜免疫的方法。方法 将合成纯化的 3 5多肽与皂甙QuilA、脂类混合物 (等体积比的磷脂和胆固醇 )以 1∶4∶1比例混合 ,经充分透析后得到 3 5肽 ISCOMs ;将 3 5肽 ISCOMs和 3 5肽 弗氏佐剂混悬物分别免疫纯系BALB c雌性小鼠 ,并比较免疫后小鼠生殖道内特异性IgA的动态变化以及小鼠生育力的变化。结果 制备成功的 3 5肽 ISCOMs在电镜下可见明显的、较规则的蜂巢样结构 ;3 5肽 ISCOMs免疫组IgA抗体在第 10周时达最高值 ( 1∶60 0 ) ,约持续 4周左右 ;而 3 5肽 弗氏佐剂组IgA抗体在第 14周时达最高值 ( 1∶3 0 0 ) ,约持续 1周左右 ;3 5肽 ISCOMs免疫后小鼠的受孕率 ( 14 3 % )显著低于 3 5肽 弗氏佐剂免疫组 ( 60 0 % )。结论 ISCOMs可以显著提高抗原在生殖道内的粘膜免疫效应 ,增强抗生育作用 ,是一种极富潜力的粘膜免疫佐剂。

嗜水气单胞菌主要外膜蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护试验

制备出4株分属3个不同血清型嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白(MOMP)免疫刺激复合物(ISCOMs)亚单位疫苗,腹腔注射免疫欧洲鳗鲡,ELISA法测得免疫后第14d和第30d所采集的血清的平均抗体效价在1∶320—1∶1280之间。免疫印迹结果显示,在印迹膜上对应的位置均可检测到MOMP的主要蛋白条带。第40d的免疫保护试验表明,免疫欧鳗对TPS-30菌株约100倍半数致死剂量的攻击无免疫保护作用,其中的3组被测免疫欧鳗对TPS-30菌株约10倍半数致死剂量的攻击的免疫保护率皆在80%以上。上述试验结果提示,嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白是重要的保护性抗原,在制备成ISCOMs亚单位疫苗的情况下,较小的剂量免疫一次即可显示出较高的相对免疫保护率,且没有明显的血清型特异性。

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析

创伤弧菌（Vibrio vulnificus）是一种革兰氏染色阴性、多形性、运动性、有荚膜的嗜盐性细菌,属于弧菌属第5群,主要生长于海水中、鱼类及贝母类等体内[1]。根据寄主范围和生化反应类型的不同,将创伤弧菌分为3个生物型：生物Ⅰ型（产吲哚）[2]、生物Ⅱ型（不产吲哚）[3]以及1999年以色列的研究人员报道的创伤弧菌生物III型。

流感裂解疫苗H3N2-抗H3N2免疫原性复合物滴鼻诱导小鼠黏膜免疫应答的研究

目的研究流感裂解病毒疫苗抗原抗体复合物滴鼻诱生小鼠黏膜免疫应答。方法分别以15μgH3N2、H3N2- CpG、H3N2-鼠抗H3N2及H3N2-PEG滴鼻免疫小鼠,检测肺泡灌洗液抗H3N2 IgA、血清抗H3N2 IgG效价。取免疫小鼠脾细胞,体外抗原刺激,用定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液IFN-γ及IL-4分泌水平。结果H3N2-抗H3N2免疫原性复合物诱生的抗H3N2 IgA效价明显高于H3N2单独免疫组(P<0．01),而与H3N2-CpG组无显著性差异。此外,复合物诱生的血清抗H3N2也高于H3N2单独免疫组(P<0．05)。H3N2-CpG组诱生的IFN-γ水平明显升高,而其他组之间无明显差异。结论流感病毒血凝素抗原抗体复合物、血凝素抗原加CpG佐剂可以诱生较强的局部黏膜免疫和体液免疫。这两组诱生的IgA效价均明显高于H3N2单独免疫组。另外,H3N2-CoG组小鼠的脾脏细胞经特异性抗原诱导后培养上清液中的IFN-γ水平明显升高。

乙肝患者抗HSS自身抗体与HSS特异性免疫复合物的测定

应用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝患者血清中抗ＨＳＳ自身抗体（ＨＳＳ－ＡＢ）、ＨＳＳ特异性免疫复合物（ＨＳＳ－ＩＣ）。结果显示：正常人血清中ＨＳＳ－ＡＢ和ＨＳＳ－ＩＣ为阴性，各型乙肝患者血清中ＨＳＳ－ＡＢ、ＨＳＳ－ＩＣ阳性率均显著增高（Ｐ＜０．０１）。提示血清中检出ＨＳＳ－ＡＢ、ＨＳＳ－ＩＣ与肝脏病变有关。

脂质体、免疫刺激复合物和壳聚糖作为黏膜免疫载体的研究现状

查阅国内外文献,采用整理归纳、引用和分析的方法,概述了鼻黏膜免疫载体材料脂质体、免疫刺激复合物和壳聚糖的生物学特性及其在气溶胶疫苗领域的应用。脂质体、免疫刺激复合物和壳聚糖作为气溶胶疫苗鼻黏膜免疫的载体,能够增强疫苗的免疫原性,提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,因此,可作为疫苗抗原激发特异免疫应答的生物材料。

肝细胞刺激物质及其自身抗体与特异性免疫复合物的测定与研究

从人胎肝中提取出肝细胞刺激物(HSS),用ELISA方法分别对肝病患者及自身免疫病,心血管病及慢性肾病血清中肝细胞刺激物质的含量,抗人肝细胞激物(HSS-Ab)及其人肝细胞刺激物-抗人肝细胞刺激物特异免疫复合物(HSS-IC)进行测定。结果表明:丙型肝炎患者血清中HSS含量,HSS-Ab和HSS-IC阳性率均高于其它对照组。

乙型肝炎病毒表面抗原的微团化及其免疫刺激复合物抗原的理化特性和免疫原性

本文用哺乳动物细胞系表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),制备了HBsAg的微团化(Micelle)和免疫剂激复合物(Immune-stimulating Complexes,简称ISCOMS)两种形式的抗原。在电镜下观察,微团化抗原是由球形亚单位颗粒组成直径100～150nm的较原颗粒大得多的大颗粒,在蔗糖中的浮力密度为1.24g/ml;而ISCOMS在电镜下为直径30～40nm左右稍大于原颗粒的多面体形态颗粒。SDS-PAGE分析表明,这两种形式的颗粒都是由HBsAg的P23和GP27蛋白所组成。 小鼠免疫接种结果显示,ISCOMS的免疫原性优于微团化抗原,后者又优于原22nm HBsAg颗粒。在抗体产生的速度和强度上,ISCOMS组显著优于微团化抗原组,而微团化抗原组略优于22nm HBsAg组。 ISCOMS的免疫性强,抗体产生早,强度高,又易于制备,而且不需要使用氢氧化铝胶佐剂,有可能发展成为一种新一代的乙型肝炎疫苗。

自身免疫性疾病患者血清BlyS、抗-BlyS及其特异性免疫复合物的测定研究

目的研究B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BlyS)、抗-BlyS(BlyS-Ab)及其特异性免疫复合物(BLyS-IC)在各种自身免疫病(AID)患者中的检出水平及其在AID中的作用。方法优化试验反应条件,建立检测BlyS、BlyS-Ab及BlyS-IC的酶联免疫吸附试验(ELISA)测定法,并进行方法学考核和临床检测。结果优化的ELISA对BlyS的最低检出量可达0.4μ／L,在3．2～400．0μg／L浓度范围内呈现良好的线性关系(r>0．99)。BlyS-Ab精密度平均变异系数(CV)为7．4％,特异阻断抑制试验最高抑制率达83．3％。在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)、混合性结缔组织病(MCTD)等AID及抗核抗体(ANA)阳性的其他内科疾病(包括肾小球肾炎、过敏性紫癜和呼吸系统疾病)患者血清中BlyS质量浓度、BlyS-Ab及BlyS-IC水平均明显高于正常对照组(P<0．01)。ANA滴度与患者血清BlyS及BlyS-Ab水平呈平行升高趋势,但未发现BlyS水平与ANA某一特定荧光核型有相关关系。结论成功建立了人血清BlyS、BlyS-Ab及BlyS-IC的ELISA测定法,该方法敏感、特异、可靠。在SLE、RA和MCTD等患者中均有高水平的BlyS,同时伴随ANA、BlyS- Ab及BlyS-IC的升高。BlyS-Ab和BlyS-IC可能有助于AID诊断,并对阐明AID发病机制有一定意义。

含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗辅以不同佐剂在HBV转基因小鼠中的免疫原性

目的 研究以免疫刺激复合物（immune stimulating complex，ISCOM）或Al（OH）3为佐剂的含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗在HBV转基因小鼠中诱导的免疫应答。方法 将纯化的含PreS1、PreS2和S抗原的重组HBsAg（SS1S2）分别辅以ISCOM或Al（OH）3佐剂制成疫苗。HBV转基因小鼠每月肌内注射1针疫苗，共注射7针。免疫前及每针后1个月称量小鼠体重，观察小鼠生长情况。免疫前及每针后1个月采血，用ELISA检测HBV S、PreS1、PreS2抗原及其相应抗体。7针后1个月分离小鼠脾淋巴细胞，用酶联免疫斑点试验分别测定分泌IL-4、IL-5、IFN-γ的效应T细胞频数。结果 小鼠生长状况良好，每针后体重均有增长。首针后1个月，10只ISCOM＋SS1S2免疫鼠分别有3和1只抗S和PreS1抗体阳转，无一小鼠抗PreS2抗体阳转；10只Al（OH）3＋SS1S2免疫鼠的抗体均为阴性。7针后1个月，10只ISCOM＋SS1S2免疫鼠的抗S和PreS1抗体均阳转，8只抗PreS2 抗体阳转；10只Al（OH）3＋SS1S2免疫鼠分别有9、7和1只抗S、PreS1和PreS2 抗体阳转；ISCOM＋SS1S2组和Al（OH）3＋SS1S2组的抗S抗体几何平均滴度分别为1：15 647和1：1 039，差异有统计学意义（t=5.18，P=0.000）。7针后1个月，ISCOM＋SS1S2组和Al（OH）3＋SS1S2组分泌IL-4的斑点细胞数分别为219和78斑点形成细胞（spot-forming cell，SFC）/106细胞（t=10.50，P=0.000），分泌IL-5的斑点细胞数分别为286和34 SFC/106细胞（t=19.53，P=0.000 ），差异有统计学意义。结论 含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗辅以ISCOM或Al（OH）3佐剂在HBV转基因小鼠中均具有免疫原性，且ISCOM＋SS1S2的免疫原性强于Al（OH）3＋SS1S2。