冷诱导RNA结合蛋白联合IL-6的检测在妊娠期高血压疾病中的诊断价值

目的探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRBP)联合白细胞介素-6(IL-6)检测在妊娠期高血压疾病中的诊断价值。方法前瞻性选取2022年7月至2023年10月入上海市第四人民医院妇产科病区经剖宫产分娩的高血压产妇30例作为实验组,选取正常产妇30例作为对照组,分别采用免疫组织化学染色、Western blot、qRT-PCR和ELISA法检测两组研究对象胎盘组织及血浆中CIRBP、IL-6的表达并进行对比分析。根据疾病程度将实验组患者分为妊娠期高血压组(12例)和重度子痫前期(18例)。比较两组患者的血浆中CIRBP和IL-6的表达水平。采用ROC曲线分析CIRBP+IL-6联合检测对疾病的诊断效能。结果实验组患者胎盘组织中CIRBP和IL-6阳性表达率明显高于对照组(P<0.05);实验组患者胎盘组织中CIRBP和IL-6 mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);实验组患者中血浆中CIRBP和IL-6表达明显高于对照组(P<0.05);重度子痫前期组患者血浆中CIRBP和IL-6表达明显高于妊娠期高血压组(P<0.05)。结论妊娠高血压患者胎盘组织及血浆中CIRBP和IL-6均呈高表达,且随着病程的加重不断升高,对诊断高血压产妇有深远的影响。

PCR-SSCP银染法在检测错配修复基因突变中的应用

目的建立稳定、有效地检测错配修复(Mismatch Repair,MMR)基因突变的方法。方法对30例肠癌及癌旁正常组织标本分别提取DNA,设计错配修复基因hMSH1引物,应用聚合酶链式反应进行PCR扩增,10%聚丙稀酰胺凝胶电泳PCR产物,银染等技术检测分析错配修复基因hMSH1突变;hMSH1抗体为一抗,免疫组化法检测30例肠癌及例癌旁正常组织石蜡切片中hMSH1蛋白的表达。结果30例肠癌组织中发生错配修复基因hMSH1突变4例(发生率13.3%),10例癌旁正常组织中无一例发生错配修复基因hMSH1突变;免疫组化检测到30例肠癌组织中有6例hMSH1蛋白表达阴性,其中hMSH1基因突变的组织hMSH1蛋白均未表达,正常组织中hMSH1蛋白表达正常。结论PCR-SSCP银染法是检测错配修复基因突变的简捷、稳定、有效的方法之一。可成为早期诊断肿瘤发生的分子手段。在肿瘤的早期治疗中具有重要作用。

鲈鱼在4℃冷藏过程中的肌肉品质变化

目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化分析评价组织形态学变化,利用酶解荧光肽底物测定特异性酶解胶原蛋白的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)活力变化。结果:鲈鱼在贮藏期间pH值呈先下降后升高趋势,菌落总数、TVB-N含量和K值随贮藏时间的延长而增加,并在第8天超过临界值。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果显示,贮藏至6 d鲈鱼肌肉蛋白组成没有明显变化,而在第8天肌球蛋白重链降解明显。Masson染色和I型胶原免疫组化分析结果显示,随贮藏时间的延长,肌内膜逐渐被降解,至第12天,肌膜I型胶原蛋白和肌纤维之间出现明显间隙。MMPs活力随贮藏时间的延长而明显增加,而鱼肉硬度不断下降。结论:鱼类冷藏期间肌肉的软化与胶原蛋白分解密切相关,而MMPs对I型胶原蛋白的降解可能是鱼死后肌肉软化的主要原因。

三种弓形虫株感染小鼠的早期病理观察

为加深对弓形虫病发病机理和病变特点的了解，用RH株、B36株和Fukaya株三种弓形虫株分别感染小鼠，用组织学和免疫组化方法对感染后各脏器病变进行系统观察，并着重对早期改变进行分析和比较。结果表明三种虫株引起的改变在病变程度和范围上有所不同，但无质的差异。病变程度可能与虫株在宿主内的繁殖能力有关。

改良人视网膜微血管内皮细胞原代培养及鉴定

目的建立人视网膜微血管内皮细胞的改良培养方法并研究其体外免疫组化特征。方法由人微血管片断生长出的内皮细胞首先通过CD31+免疫磁珠标记,于明胶包被培养瓶接种,采用含有20mg·L-1内皮细胞生长因子、90mg·L-1肝素、150mL·L-1马血清和100mL·L-1人血清的内皮细胞基本培养基;非内皮细胞例如周细胞可机械除杂,保留的内皮细胞克隆特征性的标志物为CD31+磁珠标记;特征通过免疫组化和激光共聚焦显微镜评价。人视网膜微血管内皮细胞的生长曲线通过MTT法测定。结果在这样的培养条件下,内皮细胞1-2d由微血管片断游出,1周可形成较大克隆,大约2周可融合成单层细胞。这些细胞证实可被CD31+磁珠附着,表达von Willebrand因子、细胞粘附蛋白CD31与CD34,并不表达α-平滑肌肌动蛋白。内皮细胞可部分混杂其他细胞,持续生长并传代。结论本研究为采用磁珠鉴定人源性视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定的新改良方法。本培养实验为研究人眼异常血管疾病提供了新的平台。

组织化学染色与免疫电镜双标记方法在检测大鼠脑干前包钦格复合体细胞色素氧化酶活性中的应用

目的研究脑干前包钦格复合体(pre-B9t C)细胞色素氧化酶(COX)的活性变化。方法采用COX的组织化学染色与pre-B9t C的标记物神经激肽1受体(NK1R)纳米金-银加强免疫组织化学染色双标法,进行pre-B9t C特定神经核团尤其是不同亚细胞结构的COX活性检测,并进行COX活性的半定量分析。结果光镜下NK1R免疫反应性(NK1R-ir)产物主要分布于pre-B9t C神经细胞膜,清晰勾勒神经元轮廓,COX组织化学染色呈棕色,弥漫表达于NK1R-ir神经元胞质及突起内。电镜下NK1R-ir金颗粒主要分布于pre-B9t C神经元胞体和树突膜内表面,胞质内也可见金颗粒标记。pre-B9t C神经元不同亚细胞结构(胞体、轴突终末、树突)线粒体的形状和分布均有不同,在胞体和轴突终末线粒体多为圆形和椭圆形,在树突则以长杆状线粒体多见,胞体线粒体多为管泡状嵴,而板层嵴线粒体以轴突终末和树突多见。轴突终末内线粒体多聚集分布,树突内线粒体多近胞膜散在分布,但在突触部位,线粒体分布密集,且局部膨大接近突触后膜,这与突触的信息传递功能需要大量ATP产生密切相关。COX活性反应产物分布于线粒体嵴上,线粒体嵴电子密度不同表明COX活性不同。轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体。结论 pre-B9t C神经元不同亚细胞结构能量代谢不同,其中轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体,尤其突触部位线粒体分布密集,且表达高COX活性。将COX组织化学技术和免疫电镜技术相结合,为检测区域性COX活性,尤其是区域内不同亚细胞结构的COX活性提供了新方法。

应用免疫金探针定位和定量测定稻种中的水稻细菌性条斑病菌

本文首次报道用免疫金染色和免疫金银染色对水稻细菌性条斑病病种的带菌部位及带菌量的研究。结果表明:病原细菌分布于谷壳、籽实皮、胚和胚乳,主要集中在谷壳上。谷壳外表带菌量多于内表面。籽实皮外表面由于受谷壳污染较之内表面的带菌量多。籽实皮内表面、胚和胚乳的带菌量均较少,差异不显著。谷壳、谷壳内表面、籽实皮、胚乳(或胚)的带菌量之比为36:13:9:1。

雌激素对大鼠心内神经节血管内皮生长因子表达的影响

目的:用免疫组织化学方法观察成年雌性大鼠,卵巢摘除组大鼠,卵巢摘除后17beta雌二醇肌肉注射组大鼠的心内神经节血管内皮生长因子(VEGF)的表达及变化。方法:免疫组织化学染色。结果:①各组大鼠心内神经节均存在VEGF表达阳性神经细胞;②卵巢摘除组大鼠心内神经节VEGF阳性神经元明显减少,表达明显减弱(P<0.05)。结论:心内神经节细胞表达血管内皮生长因子(VEGF);雌激素可能影响心内神经节VEGF的表达。

全自动免疫组织化学染色技术的应用

目的：探讨全自动免疫组织化学染色技术在基层医院的应用。方法：随机选取常见肿瘤50例，经包埋、切片后分为2组，分别采用全自动免疫组化机与手工操作2种免疫组化染色方法，显微镜下观察染色结果。结果：免疫组化机染色的组织定位准确，染色强度强，背景清晰，未见切片边缘着色现象。而手工染色虽然组织定位准确，但染色强度强弱不一，背景不清晰，存在非特异性染色，切片边缘着色现象较多，两者比较有显著性差异，均P〈0．05。结论：全自动免疫组织化学染色技术比手工操作染色效果好，易于做到染色标准化。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫小鼠DC亚群对哮喘的影响及对CCL-11和IL-13Rα2表达的抑制作用

目的通过过继转移日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫的小鼠树突状细胞(DC)亚群,探讨SEA免疫的DC亚群在抑制过敏性哮喘中的作用及可能的作用机制。方法用CD8α和CD11c磁珠分离纯化日本血吸虫SEA免疫小鼠CD8α+DC、CD8α-DC亚群。另取24只BALB/c小鼠,随机分为4组:正常对照组、单纯哮喘组、过继转移SEA免疫CD8α+DC(SEA-CD8α+DC)组和过继转移SEA免疫CD8α-DC(SEA-CD8α-DC)组。SEA-CD8α+DC组、SEA-CD8α-DC组每只小鼠分别经尾静脉过继转移SEA免疫CD8α+DC或CD8α-DC 5×105个。1h后单纯哮喘组、SEA-CD8α+DC组、SEA-CD8α-DC组小鼠同时用卵白蛋白(OVA)诱发哮喘,4周后剖杀,取肺组织做病理切片和免疫组织化学染色,观察炎症变化,同时检测肺组织CCL-11和IL-13Rα2表达情况。结果与单纯哮喘组和SEA-CD8α+DC组比较,SEACD8α-DC组小鼠肺部炎症显著减轻。免疫组化染色后小鼠肺组织CCL-11平均吸光度值分别为:正常对照组0.1496±0.0009,单纯哮喘组1.7121±0.4994,SEA-CD8α+DC组0.9631±0.1201,SEA-CD8α-DC组0.3458±0.0543,SEACD8α-DC组与单纯哮喘组和SEA-CD8α+DC比较差异有统计学意义(P<0.05);小鼠肺组织IL-13Rα2平均吸光度值分别为:正常对照组0.1029±0.0103,单纯哮喘组0.3136±0.0174,SEA-CD8α+DC组0.3263±0.0128,SEA-CD8α-DC组0.1859±0.0294,SEA-CD8α-DC组与单纯哮喘组和SEA-CD8α+DC组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论日本血吸虫SEA免疫的DC亚群对过敏性哮喘有抑制作用,且CD8α-DC亚群起主要作用。

紧密连接蛋白1和血管内皮生长因子C在大肠癌表达的相关性

目的探讨紧密连接蛋白1（Claudin-1）和血管内皮生长因子C（VEGF-C）蛋白在大肠癌发生发展中的相关性。方法应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（sP）法检测45例大肠癌组织、癌旁组织以及20例大肠组织中2个基因的表达，并进行相关分析。结果大肠癌组织中的C｜audin-l表达阳性率明显高于癌旁组织和正常组织（60．0％、33．3％和10．0％），VEGF—C表达阳性率明显高于癌旁组织和正常组织（64．4％、26．7％和10．0％），并且两者的表达均与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及临床分期密切相关，两者的表达呈直线正相关。结论Claudin-1可能通过VEGF-C信号途径参与大肠癌的发生发展。