针刺和静力牵张对大负荷运动后骨骼肌收缩结构变化影响的免疫电镜研究

用免疫电镜的方法观察大负荷运动后骨骼肌收缩结构变化时M蛋白、α-辅肌动蛋白和肌球蛋白的定位,以探索超过习惯负荷后收缩结构延迟性变化的性质,以及针刺和静力牵张对促进其恢复的机理,结果发现:在多组力竭性工作后,收缩结构发生变化的同时,伴有该结构的免疫标记密度下降以及有关收缩蛋白的免疫标记向其结构以外区域扩散,这一结果提示:超过习惯负荷后收缩结构变化或解体是由于延迟性的收缩蛋白的降解优势所致。由于这种变化是一过性的,经过休息和调整训练负荷即可能恢复,并未形成稳定的改变,因而其性质仍可认为是生理性的或是生理向病理性变化的过渡状态。针刺和静力牵张能通过加强收缩蛋白的合成代谢而有效地促进收缩结构的恢复并出现疼痛的消除,其作用的机理尚待进一步的研究。

针刺和静力牵张对大负荷运动后骨骼肌M线变化影响的免疫电镜研究

用胶体金标记技术定位运动后及运动后经针刺或静力牵张处理的人骨骼肌M蛋白,以探讨超过习惯负荷后骨骼肌收缩结构变化以及针刺和静力牵张对促进其恢复的机制。我们发现:大负荷斜蹲后未经针刺的对照腿股外肌M线的M蛋白标记密度低于针刺腿(P<0.05),而对照腿M线两侧及M线两侧以外的M蛋白标记密度高于针刺腿(P<0.05)。对照实验证明运动腿M线以外增加的标记物为物异性标记。静力牵张组在M线及M线两侧的标记结果与针刺组一致。仅在M线两侧以外区域牵张腿与运动对照腿之间标记密度的差异没有统计学意义。我们还观察到运动后对照腿变化M线体密度达42—48％,而针刺或牵张腿为6—9％。上述结果表明大负荷运动加强了负荷后骨骼肌M蛋白的解聚或降解,从而导致M线结构改变;针刺和静力牵张可显著促进M蛋白的合成或抑制其降解,而使M线结构恢复或稳定。本文还探讨了M线变化与肌粗丝结构变化的关系。

球孢白僵菌HsbA蛋白的原核表达及免疫定位

【目的】明确虫生真菌球孢白僵菌(Beauveria bassiana)疏水表面结合蛋白HsbA(hydrophobic surface binding protein A)的致病过程。【方法】对HsbA进行克隆、亚克隆和原核表达,根据纯化后的蛋白制备多克隆抗体并进行抗原性分析,利用免疫电镜对HsbA蛋白进行定位观察。【结果】原核表达系统成功诱导了白僵菌的HsbA融合蛋白,制备多克隆抗体经Western杂交分析表明,该多抗能特异性识别目的蛋白。免疫电镜结果显示,HsbA蛋白在孢子和菌丝中呈随机分布。正常生长状态下,菌丝中的HsbA蛋白数量要明显多于孢子中被标记的数目,此外,孢子在侵染状态和正常生长状态下的HsbA蛋白数量也有显著差异,侵染状态下孢子的HsbA蛋白表达量更高,但菌丝在这2种状态下均呈现高表达。感染虫体中HsbA蛋白被标记的部位集中在体壁。【结论】原核表达实现了HsbA蛋白的高效表达,且制备的多克隆抗体具有较好的免疫原性。此外,免疫定位表明HsbA蛋白与菌丝的生长有关,并在白僵菌致病过程中参与了吸附作用,其作用部位位于昆虫体壁。

兔早期心肌缺血Connexin43的变化

目的 探讨早期急性心肌缺血缝隙连接蛋白 4 3(Cx4 3)的变化。方法 结扎兔左冠状动脉造成急性心肌缺血模型 ,于结扎后 30 min取左心室前壁心肌 ,用免疫组织化学法和免疫电镜胶体金法观察、定位心肌缺血Cx4 3的分布 ,半定量统计分析。结果 急性心肌缺血 (30 m in) ,免疫组化图像分析系统分析结果显示 Cx4 3阳性面积减少约 4 0 % ;免疫电镜显示胶体金颗粒明显减少 ,分布未见改变。结论 兔急性心肌缺血早期 Cx4

兔圆小囊产溶菌酶细胞的免疫电镜组织化学观察

采用免疫组织化学和免疫电镜细胞化学的方法 ,对兔圆小囊组织中产溶菌酶细胞进行了观察。免疫组织化学观察发现 ,产溶菌酶阳性细胞在兔圆小囊的粘膜上皮、圆顶上皮以及淋巴组织的滤泡生发中心、圆顶区和帽区均有分布 ,且受到多杀性巴氏杆菌感染后 ,阳性细胞增多 ,阳性反应增强。免疫电镜结果显示 ,在兔圆小囊的淋巴组织DNES细胞的颗粒中发现溶菌酶免疫组织化学阳性反应物。这一重要发现为神经 内分泌 免疫网络学说提供了新的证据。

针刺和静力牵张对大负荷运动后人骨骼肌Z带变化影响的免疫电镜研究

我们用兔抗人α-actinin(α-辅肌动蛋白)抗血清和羊抗兔IgG-胶体金复合物作为标记物,在由Lowicryl K4M包埋的组织超薄切片上定位Z带蛋白α-actinin。在大负荷斜蹲后48小时从6名男性受试者(年龄为22—22岁)的两侧腿股外肌中取得活检样品,并在运动后不同时刻及活检取样前对随机确定的每一受试者的一条腿进行针刺或静力牵张,另一侧腿作对照。结果发现,针刺或静力牵张腿Z带特异性标记密度比其对照腿高。此外,针刺或静力牵张还能使Z带发生超微结果的变化率分别减少36％和22％,并使显著变化的比例减少,轻度变化的比例增加。以上观察结果揭示了针刺或静力牵张能抑制由于α-actinin的解聚或降解引起的Z带超微结构变化过程,或者通过加速α-actinin的聚合或合成而促进Z带超微结构的恢复。

低温包埋显示甲状腺肿瘤相关基因蛋白产物的免疫电镜研究

目的 :运用Lowicry1K4M低温包埋及免疫电镜法对甲状腺滤泡细胞源性肿瘤及瘤样病变中甲状腺球蛋白 (Tg)、癌基因蛋白 (Ret)、黏糖蛋白 1(Muc 1)和Galectin 3(Gal 3)基因蛋白产物的表达进行检测。 方法 :对 18例患者手术切除的甲状腺标本进行低温包埋和免疫电镜研究。 结果 :良、恶性甲状腺滤泡上皮细胞的细胞质中胶质小滴、粗面内质网、高尔基复合体及近滤泡的吞饮泡、滤泡腔中有Tg胶体金颗粒 ;本组 9例良性病变 (甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿 )标本Ret、Muc 1和Gal 3三种标记均阴性 ,乳头状癌和滤泡性癌标本的Ret标记可见癌细胞的细胞质中核膜外粗面内质网的核糖体上、粗面内质网腔内及细胞质小泡中有金颗粒的积聚 ,而线粒体、胶质小滴、细胞核、滤泡腔中为阴性 ;Muc 1金颗粒见于粗面内质网、细胞质小泡和细胞膜下 ,细胞核、线粒体、胶质小滴、滤泡腔为阴性 ;Gal 3金颗粒分布较广 ,细胞核常染色质区多见 ,核膜下、粗面内质网、细胞质小泡以及胶质小滴的外周质膜下亦有分布 ,滤泡腔为阴性。 结论 :Ret、Muc 1和Gal

葡萄幼苗对温度逆境交叉适应过程中HSP70在叶片中的亚细胞定位

为了进一步分析热激蛋白在温度锻炼诱导的交叉适应性形成过程中的保护功能,此文以葡萄(Vitis vinifera L.cv.Jingxiu)幼苗为试材,采用胶体金免疫电镜定位技术,定位观察了HSP70在葡萄叶片中的亚细胞分布情况。结果表明,低温锻炼预处理可增强其在高温胁迫条件下的表达水平,细胞核和叶绿体中代表HSP70的免疫金颗粒密度比相应的对照细胞明显增多,尤其是胁迫处理3 h时。与低温锻炼相似,高温锻炼预处理增强了葡萄叶片在高温胁迫下细胞核和叶绿体中HSP70的表达量。这一结果为HSP70参与温度锻炼诱导的交叉适应性提供了更直观的细胞学证据。

进口大豆上菜豆荚斑驳病毒的免疫捕获巢式RT-PCR检测

利用DASELISA对进口大豆上BPMV进行检测发现,从美国进口的部分大豆样品对BPMV的多抗血清呈阳性反应;利用免疫吸附电镜观察发现,ELISA检测阳性的大豆种皮病汁液中存在直径约30nm的球状病毒粒子。根据BPMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对嵌合引物,建立了BPMV的高灵敏的免疫捕获巢式RTPCR(ICnestedRTPCR)检测方法。该方法经免疫捕获、反转录和2轮PCR扩增,能从带毒大豆种子中扩增到预期大小的DNA条带。序列测定与分析表明此条带的序列为BPMV部分CP基因,在系统关系树上与BPMV的其它分离物形成一簇亲缘关系很近。实验表明从进境大豆上检测到了BPMV。

伤胁迫对蚕豆叶片中茉莉酸分布的影响

在植物应对伤害等环境刺激的反应中,已知茉莉酸(JA)作为一种重要的信号分子在植物体内长距离运输,但目前对JA的细胞和亚细胞定位知之甚少。本研究用免疫荧光显微镜技术和免疫胶体金电镜技术证明茉莉酸分布在蚕豆叶片叶肉细胞的叶绿体、表皮细胞的细胞壁、保卫细胞的细胞壁、细胞质、叶绿体和细胞核上。其中保卫细胞的叶绿体和细胞核是JA分布的主要场所。叶片的局部灼伤可提高JA在质外体和气孔保卫细胞中的水平。由此推测,伤胁迫下JA分配的改变可能与植物体防御反应密切相关,并参与了对气孔运动的调控。

日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白rSj338的免疫细胞化学定位

目的 应用免疫电镜技术观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 方法 收集新鲜的日本血吸虫成虫 ,常规固定、包埋 ,制备日本血吸虫成虫超薄冷冻切片。用纯化的抗rSj338单特异多克隆抗体为一抗 ,同时 ,以正常兔血清作阴性对照 ;以直径为 10nm胶体金颗粒标记的蛋白A进行定位 ,进行组织化学反应 ,透射电镜观察日本血吸虫线粒体相关蛋白rSj338在成虫组织细胞中的分布和定位。 结果 高密度胶体金颗粒主要分布于日本血吸虫线粒体外膜上 ,在线粒体的嵴上也见分布。结论 rSj338蛋白确为日本血吸虫线粒体相关蛋白 。

电针对APP/PS1转基因小鼠海马及血脑屏障Aβ水平的影响

目的:通过观察电针对APP/PS1转基因小鼠海马、血脑屏障Aβ及行为学的影响,探讨电针能否通过改善血脑屏障Aβ清除能力来治疗阿尔茨海默病。方法:将24只6月龄雄性APP/PS1转基因小鼠随机均分为电针治疗组与模型组,正常对照组选取12只同性别的C57BL/6野生背景鼠。电针治疗组电针"百会""涌泉"穴,治疗后采用Morris水迷宫进行行为学检测,观察各组小鼠学习记忆能力;用ELISA测定Aβ1-42在海马的表达水平;使用胶体金免疫电镜观察Aβ1-42在海马脑微血管壁的表达。结果:Morris水迷宫试验显示模型组与正常组比较,逃避潜伏时上升,穿越平台位置次数及平台象限游泳时间、路程所占总时间和总路程百分比下降(P<0.01或P<0.05),电针治疗组逃避潜伏时较模型组下降(P<0.01);ELISA检测海马Aβ1-42结果显示电针治疗组较模型组明显降低(P<0.01);免疫电镜结果显示电针治疗组脑微血管壁胶体金颗粒较模型组减少。结论:电针治疗可改善APP/PS1转基因小鼠空间认知能力,降低海马Aβ1-42水平,其机制可能与改善血脑屏障Aβ清除能力有关。

非何杰金恶性淋巴瘤病人血清及瘤组织中β-葡萄糖醛酸酶同步测定及意义

目的 :探索非何杰金恶性淋巴瘤病人体内 β-葡萄糖醛酸酶 (β- glucuronidase,β- G)的变化规律。方法 :采用酶联免疫吸附测定 (enzym e- linked imm unsorbent assay,EL ISA)方法 ,免疫组织化学方法对 13例非何杰金恶性淋巴瘤患者血清及瘤组织中 β- G进行同步测定 ,并对其中 3例进行了免疫电镜研究。结果 :β- G在非何杰金恶性淋巴瘤患者血清及瘤组织中均呈明显表达 ,与对照组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :对 β- G进行机能学与形态学的联合检测 。

对虾白斑综合症病毒核衣壳蛋白WSV308的鉴定

结合SDS-PAGE电泳和质谱分析,发现了一分子量为51kDa的蛋白,它是对虾白斑综合症病毒基因ORFwsv308的表达产物.将wsv308克隆到pET-His表达载体,以E.coliBL21为宿主菌,成功表达并纯化目的蛋白后制备抗体.Western blot实验中蛋白特异抗体只与完整的病毒和核衣壳裂解蛋白中的WSV308反应,而不和膜蛋白反应,证明wsv308所编码的蛋白在完整病毒颗粒上定位于核衣壳.免疫电镜定位中金颗粒只特异地标记在核衣壳表面上,不存在于完整病毒表面上.

实验性自身免疫性脑脊髓炎神经元、胶质细胞及其细胞缝隙连接的超微结构改变

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)豚鼠发病前、后脑内神经元、胶质细胞及其细胞间缝隙连接的超微结构变化。方法采用髓鞘碱性蛋白经豚鼠足底注射制作EAE动物模型。将大鼠随机分为试验组(n=18)和对照组(n=6),采用抗Cx43和Cx32免疫电镜双标记的免疫组化方法观察EAE豚鼠脑白质内神经元、胶质细胞及其细胞之间连接部位超微结构改变。结果胶质细胞之间和/或神经元之间形成大量的缝隙连接和半通道,同时除存在髓鞘破坏外神经元亦受到损伤。结论(1)在EAE发展过程中,不仅存在髓鞘改变而且还存在轴索和突触的改变;(2)缝隙连接的增多提示EAE发生后星形胶质细胞与神经元间信息交流可能加强,缝隙连接很可能在神经元和髓鞘损伤中起关键作用。

葡聚六糖诱导后对黄瓜细胞内钙信使的影响

为明确葡聚六糖诱导黄瓜后对钙信使的影响,以黄瓜叶片为试材,测定葡聚六糖诱导后黄瓜细胞内Ca2+含量及Ca2+-ATPase活性变化,同时用免疫胶体金电镜技术观察了对钙调素(Calmodulim,CaM)分布的影响。结果表明,葡聚六糖诱导后黄瓜可溶性钙含量在12 h即达到高峰值,全钙含量在24 h达到高峰值,144 h不溶性钙达到峰值,Ca2+-ATPase活性在48 h达到最高峰。电镜下观察到在黄瓜的细胞核、叶绿体、液泡、细胞间隙、线粒体、细胞壁都有CaM分布,以叶绿体和细胞壁较多,清水对照在叶绿体和细胞壁有较少分布。葡聚六糖激活钙信使系统,可能参与光合作用,从而提高植物抗病性。

蚕豆保卫细胞中钙调素的免疫电镜定位

以蚕豆横切和平切气孔为材料 ,对钙调素进行了免疫胶体金电镜定位的结果表明 :在蚕豆保卫细胞的细胞核、细胞质、细胞膜、叶绿体、液泡、高尔基体、细胞壁中都有金颗粒分布 。

新生大鼠窦房结组织和培养细胞的心钠素(ANF)表达的定量形态学观察

本实验采用窦房结细胞纯化培养、免疫细胞化学、免疫组化、免疫电镜 （ｐＡｇ 技术） 和图像分析等多种方法，研究了新生ＳＤ大鼠窦房结的ＡＮＦ表达。结果提示： 窦房结原位组织和培养细胞的胞浆内均可见ＡＮＦ阳性反应颗粒。培养细胞的核附近电子致密颗粒有１０ｎｍ ＡＮＦ免疫反应的ｐＡｇ 颗粒。窦房结ＡＮＦ的含量和活性明显低于心房 （Ｐ＜ ００１）。

脊髓胶状质突触结构中的生长抑素

本研究用免疫电镜方法对大白鼠脊髓胶状质内生长抑素的分布进行了观察。超微结构图像表明:含生长抑素的神经纤维末梢参与构成轴体、轴树和轴轴突触的突触前成分。免疫反应产物定位于线粒体外膜、小透亮囊泡周围及大颗粒囊泡内。在免疫反应阳性的终扣内,突触囊泡大多数为圆或卵圆形,少数为扁形。根据超微结构特点结合有关的实验结果,作者认为生长抑素在脊髓胶状质内,很可能是一种神经递质而不是神经调制物。

应用电镜原位杂交技术与免疫标记技术研究膀胱上皮细胞的分化

本文应用电镜原位杂交技术与免疫标记技术相结合，在超微水平上对ＡＵＭ蛋白及其ｍＲＮＡ在细胞中的分布进行定性与定位的研究。结果显示ＡＵＭ蛋白的基因从小鼠膀胱上皮中间层细胞开始表达，从而为膀胱上皮细胞的分化提供了确凿的证据。