Harmonization of SARS-CoV-2 antigen immunoassays:are they measuring the same“thing”?

Background:This study was planned to assess the accuracy and comparability of two commercially available,laboratory-based SARS-CoV-2(severe acute respiratory syndrome)antigen(Ag)immunoassays.Methods:We studied a cohort of subjects with acute SARS-CoV-2 infection,from whom a nasopharyngeal swab was taken and tested with a molecular assay(Altona Diagnostics RealStar SARS-CoV-2 RT-PCR Kit)and two laboratory-based,fully automated SARS-CoV-2 Ag immunoassays(Fujirebio Lumipulse G SARS-CoV-2 Ag and Roche Elecsys SARS-CoV-2 Ag).Results:The final population consisted in 93 subjects testing positive for SARS-CoV-2 RNA,34 with cycle threshold(Ct)values<29.5.The results of the two SARS-CoV-2 Ag immunoassays were significantly intercorrelated(r=0.77;P<0.001)in the entire cohort,though such correlation considerably improved in patients with high viral load(cycle threshold values<29.5:r=0.96;P<0.001).The accuracy for identifying samples with high viral load was excellent for both Lumipulse G SARS-CoV-2 Ag(AUC,0.99;P<0.001)and Elecsys SARS-CoV-2 Ag(AUC,0.99;P<0.001),with best cut-offs of 2.03 ng/mL for Lumipulse G SARS-CoV-2 Ag(1.00 sensitivity and 0.88 specificity)and 0.70 COI for Elecsys SARS-CoV-2 Ag(1.00 sensitivity and 0.80 specificity),respectively.Conclusion:The results of this study provide valuable support to usability of fully-automated,rapid,high throughput and accurate SARS-CoV-2 Ag immunoassays for complementing molecular assays.

β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法研究进展

开展动物性食品中β-受体激动剂监测,对保障食品安全具有重要意义。免疫分析技术操作快速、灵敏度高、检测成本低,被广泛用于大批量畜禽产品的快速筛查。抗体特性是免疫检测的核心,而人工抗原合成的质量直接影响特异性抗体性能。本文主要综述了碳二亚胺法、活泼酯法、混合酸酐法、重氮化法、戊二醛法等β-受体激动剂类药物人工抗原合成方法,以及紫外光谱法、核磁共振法等人工抗原鉴定方法,以期为免疫分析等相关工作研究提供参考。

高灵敏化学发光法特异性检测人血清促甲状腺激素方法的建立

目的 通过双位点夹心化学发光免疫分析原理,建立一种高灵敏度测定人血清促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)的化学发光免疫分析方法。方法 将样本与预包被有抗促甲状腺激素(TSH)抗体的超顺磁珠,以及抗TSH-碱性磷酸结合物添加到反应管中共孵育,待测样本中的TSH通过夹心法与磁珠和抗TSH-碱性磷酸结合物与形成双位点复合物。与磁珠结合的复合物吸附到磁场上,用缓冲液洗去未结合的物质。加入发光底物3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐[3-(2-spiroadamantane)-4-methoxy-4-(3-phosphoryloxy)-phenyl-1,2-dioxetane, AMPPD],测定相对光子强度(RLU),通过标准曲线计算待测样本中TSH的浓度。结果 本研究建立的TSH检测方法,最低检测限为0.003μIU/mL,批内CV小于1%,总CV小于3%,正确度样本实测值与靶值之间相对偏差均在±12.5%范围内,线性范围为0.005~100μIU/mL且相关系数(r)高于0.9900。开封稳定性试验的相对偏差<10%。结论 该方法检测血清TSH浓度具有灵敏度高、准确性好、线性范围广、稳定性强的优点,各项指标均达到临床检测要求,可以推广使用。

基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。

动物源食品中孕酮激素残留的时间分辨荧光免疫分析法的建立

该研究以孕酮为研究对象,设计并制备了新抗原,通过动物免疫得到特异性兔抗体,基于所得抗原和抗体,进一步优化了抗原抗体浓度、反应缓冲液种类及其pH值等关键参数,最终在国内首次建立了用于动物性食品中性激素孕酮残留快速检测时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)。该研究确定最优实验条件为:抗原0.30μg/mL、铕标抗体0.40μg/mL、pH值7.2的TBST工作缓冲液,并建立标准曲线,方法的线性范围为0.46~6.94μg/L,IC_(50)达1.79μg/L,与睾酮交叉反应率为1.25%,与雌二醇、雌三醇等激素无交叉反应。实际样品的平均添加回收率为82.0%~113.0%,批内批间变异系数<5%,与高效液相色谱法(HPLC)检测结果的相关性良好(r2=0.988)。结果表明该研究所建立的TRFIA检测方法准确可靠、特异性好、灵敏度高,完全可用于动物源食品中孕酮残留的快速检测。

女性雄性激素质谱多指标检测在多囊卵巢综合征诊断中的应用

目的探讨液相色谱串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者中高雄激素血症(hyperandrogenemia,HA)检出率,探讨不同种类雄激素在PCOS中的诊断价值。方法纳入2023年1月至2023年12月于首都医科大学附属北京妇产医院妇科内分泌门诊就诊合并雄激素过多临床表现的PCOS患者100例为试验组,同期就诊的健康备孕人群100例为对照组。LC-MS/MS法检测总睾酮(total testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)、生物活性睾酮(bioavailable testosterone,BIO-T)、雄烯二酮(androstenedione,A2)、17羟孕酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮、性激素结合球蛋白指标,绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积(area under curve,AUC),评价各雄激素水平对PCOS的诊断效能,化学发光免疫法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)和LC-MS/MS 2种方法比较TT检测水平的诊断价值以及对HA的检出率。结果与对照组相比,试验组TT、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、LH/卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、抗苗勒管激素、空腹胰岛素、稳态模型的胰岛素抵抗指数均明显升高(P<0.05),FT的AUC诊断灵敏度最高为86.4%(P<0.05,95%CI:0.815~0.912),其次为TT的AUC为84.4%(P<0.05,95%CI:0.812~0.909)、BIO-T的AUC为82.2%(P<0.05,95%CI:0.792~0.896)、A2的AUC为84.2%(P<0.05,95%CI:0.790~0.895)。与CILA法相比,利用LC-MS/MS法检测TT诊断PCOS的灵敏度更高(AUC 0.891 vs 0.841),且对于合并雄激素过多临床征象的PCOS患者HA检出率明显高于CLIA法(P<0.05)。结论LC-MS/MS法对多种雄激素指标检测灵敏度高、准确性好,FT对于高雄激素临床表现的PCOS诊断价值最高,且该法可提高PCOS的检出率,实现HA的早期筛查,更适合临床推广应用。

罗氏cobas e801免疫分析仪检测血清抗缪勒管激素的性能验证

目的:对罗氏cobas e801免疫分析仪检测血清抗缪勒管激素(AMH)进行性能验证,评估其是否能够满足临床需求。方法:参照美国临床和实验室标准协会文件,对罗氏cobas e801免疫分析仪检测血清AMH的精密度、准确度、线性范围、携带污染率进行性能验证。结果:罗氏cobas e801免疫分析仪检测低值、高值AMH的批内精密度变异系数分别为4.8%、3.7%,批间精密度变异系数分别为3.5%、5.1%,符合厂家要求临床应用批内精密度、批间精密度<10%的标准。室间质评5个样品检测结果与靶值进行比对,相对偏倚分别为0.81%、-0.22%、0.85%、-2.73%、1.77%,符合厂家准确性相对偏倚的要求范围±10%。AMH的携带污染率为0.39%,符合厂家≤2.0%的要求。AMH的线性回归方程为Y=0.980 9X+0.658 8,斜率a为0.980 9,R2为0.996,结果符合厂家要求,a值1±0.05,R2值≥0.95。结论:罗氏cobas e801免疫分析仪检测AMH的精密度、准确度、携带污染率、线性范围均通过验证,检测结果准确可靠,可以满足临床的需求。

甲状腺患者生化免疫检验中化学发光免疫测定技术应用的价值分析

目的探讨化学发光免疫测定技术在甲状腺肿瘤疾病诊断中应用的价值。方法选取2021年2月—2023年5月连云港市妇幼保健院收治的158例疑似甲状腺肿瘤患者为研究对象,分别应用免疫放射分析法和化学发光免疫测定法进行检测。以病理诊断结果为金标准,比较两种检验方式对甲状腺癌的诊断结果及诊断效能(特异度、灵敏度和准确度)。结果在甲状腺肿瘤诊断中,化学发光免疫测定法的结果更接近金标准,其灵敏度(93.02%)高于免疫放射分析法(78.29%),差异有统计学意义(χ^(2)=11.390,P<0.05)。化学发光免疫测定法的特异度和准确度为86.21%、91.77%,高于免疫放射分析法,差异有统计学意义(χ^(2)=9.471、19.533,P均<0.05)。结论化学发光免疫测定法在甲状腺患者生化免疫检测中的应用更接近金标准,该检测方式的灵敏度、特异度和准确度较高,在疾病诊断中应用的价值较高。

电化学发光免疫测定技术对桥本氏甲状腺炎的灵敏性、特异性分析

目的 探讨桥本氏甲状腺炎(HT)患者应用电化学发光免疫测定技术(ECLIA)的灵敏性、特异性。方法 选取2020年8月至2022年8月在河南新乡医学院第二附属医院检查的疑似HT患者共计68例,所有患者均接受ECLIA、放射免疫法(RIA)测定,以症状、病理检查及随访结果作为金标准,比较不同测定技术的测定结果、阳性率、诊断价值及测定时间。结果 ECLIA测定游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素(TSH)、抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平较RIA更高,差异均有统计学意义(P <0.05);ECLIA测定FT3、FT4、TSH、TPOAb、TgAb、TRAb阳性率较RIA更高,差异均有统计学意义(P <0.05);ECLIA诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确性、曲线下面积(AUC)分别为95.83%、95.00%、97.87%、90.48%、95.59%、0.861,RIA分别为79.17%、60.00%、82.61%、54.54%、73.53%、0.753,ECLIA较RIA更高,差异具有统计学意义(P <0.05);ECLIA平均测定时间时间较RIA更短,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论 ECLIA用于HT患者灵敏性、特异性均较高,且可缩短测定时间。

化学发光免疫测定甲状腺功能在生化检验中的准确度分析

目的系统分析化学发光免疫测定甲状腺功能在生化检验中的准确度。方法选取2021年2月—2022年2月湖北省公安县人民医院收治的45例疑似甲状腺疾病患者作为研究对象,以最终的病理诊断结果作为金标准,分别对45例疑似甲状腺疾病患者开展放射免疫分析法与化学发光免疫法进行检测,对比两种检查方法准确度、敏感度、特异度。结果化学发光免疫法的敏感度、准确度分别为97.50%、95.56%,高于放射免疫分析法的75.00%、73.33%,差异有统计学意义(χ^(2)=8.538、8.459,P均<0.05);化学发光免疫法的特异度为80%,高于放射免疫分析法的60.00%,差异无统计学意义(χ^(2)=0.476,P>0.05)。结论化学发光免疫法检测甲状腺疾病患者的敏感度、特异度、准确度均较高,可为临床医生诊断与治疗甲状腺疾病提供良好的新思路。

MEIA法测定乙肝病毒表面抗原的评价及临床应用

目的 对微粒子酶免疫测定法(MEIA法)检测乙肝病毒表面抗原进行方法学评价并研究低含量乙肝表面抗原人群阳性检出率。方法 采用美国雅培公司的AXSYM型化学发光仪对乙肝病毒表面抗原卫生部质控物、高浓度乙肝病毒表面抗原标本进行稀释测定,同时与ELISA法检测乙肝表面抗原进行比较;对低浓度(HBsAg≤1μg/L)的标本进行中和确证试验与采用PCR-ELISA法定量测定HBV DNA。结果 微粒子化学发光法检测乙肝病毒表面抗原具有较高灵敏度,达0.1μg/L;有较好的重复性和特异性;低浓度(HBsAg≤1μg/L)在人群中分布率为0.53％。结论 微粒子酶免疫法对提高低含量乙肝表面抗原阳性检出率具有重要意义。

ELISA法和MEIA法测定HBV血清标志物的比较研究

目的比较酶联免疫吸附法(ELISA)和微粒子酶免疫分析法(MEIA)对HBV血清标志物的检测性能。方法用ELISA法和MEIA法对HBV的血清标志物(HBsAg,HBeAg,Anti-HBc和Anti-HBe)分别进行检测。结果对1140例病人的血清进行乙肝标志物的检测,MEIA法阳性率高于ELISA法。与MEIA法相比较,ELISA法检测HBsAg的相对灵敏度达97.5%,Anti-HBc(94.9%)和HBeAg(73.4%)次之,Anti-HBe最低,为41.7%。对一些低滴度的HBeAg/Anti-HBe的HBV感染者,ELISA法可以引起假阴性。结论对于血清乙肝标志物的检测,MEIA法和ELISA法均有较高的特异性,但MEIA法敏感性优于ELISA法。

MEIA法测定HBV血清标志物的临床应用意义

目的通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)的比较,了解微粒子酶免疫分析法(MEIA)对乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物的检测性能。方法分别用MEIA法和ELISA法对HBV感染者的血清标志物(HBsAg、HBeAg、抗HBc和抗HBe)进行检测。结果1140例患者血清HBV标志物检测,MEIA法阳性率为:HBsAg94.00%,HBeAg46.75%,抗HBc97.96%,抗HBe61.41%;ELISA法阳性率为:HBsAg91.89%,HBeAg36.14%,抗HBc93.26%,抗HBe18.11%;MEIA法阳性率高于ELISA法,其中对HBeAg和抗HBe的检测,两种方法差异有高度显著性(P<0.01)。与MEIA法比较,ELISA法检测HBsAg的相对灵敏度达97.46%,抗HBc为94.93%,HBeAg为73.41%,抗HBe最低,为41.73%。对一些低滴度的HBeAg/抗HBe的HBV感染者,ELISA法检测可出现假阴性。结论对于血清HBV标志物的检测,MEIA法和ELISA法均有较高的特异性,但MEIA法敏感性优于ELISA法。

美国雅培IMX免疫分析仪MEIA2号试剂的配制与应用

目的 :探讨美国雅培 IMX免疫分析仪 MEIA2号试剂国产化问题。方法 :将自配试剂的理化性质、精密度、准确度与原装试剂进行对比分析。结果 :自配试剂与原装试剂理化性质一致 ,采用 ICIA法测定糖化血红蛋白质控液 10次 ,其 CV均小于 5 % ,与原装试剂对比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :自配 MEIA2号试剂完全可以代替美国雅培

ELISA法与MEIA法测定人血清乙肝五项指标结果分析

目的 :比较ELISA法与MEIA法检测乙肝标志物的性能。方法 :用ELISA法与MEIA法分别测定 89例人血清乙肝五项标志物 ,用SPSS 1 0 0统计学软件对结果进行配对X2 检验。结果 :MEIA法检测人血清乙肝e抗体 (anti-HBe)、乙肝核心抗体 (anti-HBc)两个指标的阳性检出率高于ELISA法。两种方法阳性检出率差异有显著性 (P <0 0 0 0 1 )。结论 :MEIA法检测乙肝五项标志物的灵敏度和自动化程度高 ,ELISA法有相当的灵敏度 ,且价廉。

牛乳β-乳球蛋白变异体检测方法研究进展

β-乳球蛋白(β-LG)是牛乳中重要的天然活性营养物质,也是牛乳中主要的过敏原之一。β-乳球蛋白约为乳清蛋白总量的50%,是牛乳中主要的乳清蛋白,具有较强的热敏感性和致敏性,在优质乳品工业中起关键作用。其不仅作为牛奶热处理强度的评估指标,还作为食品中牛乳过敏原的标志蛋白,有效识别和检测牛乳β-乳球蛋白非常重要。已报道的牛乳β-乳球蛋白有13种变异体,其中A和B是牛乳β-LG的常见变异体,且含量最高。根据不同的检测原理,文章简述近年来牛乳β-乳球蛋白变异体的三大类检测方法,总结电泳法、色谱法和免疫法的原理、优缺点及部分应用实例,重点介绍液相色谱法和毛细管电泳法两种定量方法,并展望牛乳β-乳球蛋白未来的发展方向。

ELISA、GICA与MEIA法检测新生儿TORCH-IgM抗体的比较

目的比较ELISA、GICA与MEIA法对新生儿TORCH-IgM抗体的检测效果。方法选择120例疑似TORCH感染的新生儿作为研究对象,分别采用ELISA、GICA与MEIA三种方法检测血清TORCH-IgM抗体,比较三种方法对新生儿TORCH-IgM抗体检测的阳性率、符合率、灵敏度以及特异性。结果以MEIA法为金标准,ELISA法和GICA法检测TORCH-IgM抗体的灵敏度和特异性比较,ELISA法检测中的RV-IgM、HSV-IgM以及CMV-IgM检测的灵敏度均高于GICA法(P<0.01),两组的TOX-IgM检测比较无显著性差异(P>0.05);ELISA法检测中的CMV-IgM检测的特异性高于GICA法(P<0.01);ELISA法和GICA法检测TORCH-IgM抗体阳性预测值和阴性预测值比较,ELISA法中CMV-IgM检测的阳性预测值和阴性预测值均高于GICA法(P<0.05),尤其是阴性预测值(P<0.01);与MEIA法检测总符合率均在90%以上。结论 ELISA法检测新生儿TORCH-IgM抗体,具有特异性强、敏感性高、可信度高、简单易行等优点,是一种比较可靠的新生儿TORCH感染筛查的检测方法。

MEIA法测定他克莫司全血浓度的问题分析

目的探讨微粒子酶免疫分析(MEIA)法测定他克莫司全血浓度出现的问题。方法对南昌大学第一附属医院开展MEIA法测定他克莫司全血浓度以来出现的问题进行统计分析。结果南昌大学第一附属医院2002-2008年MEIA法测定他克莫司全血浓度共计失败21次,其中光路出问题10次,皮带断裂6次,样本注射器漏液2次,标准品顺序放错1次,试剂盒上机前有气泡1次,试剂盒提前变质1次。结论在日常工作中,不但要严格遵守操作规程,认真仔细,减少每一步的操作误差,避免操作错误,更重要的是要按时进行仪器的保养和维护,确保仪器的正常运行,才能确保结果的准确性。

免疫检测技术在食源性致病菌中的应用研究进展

食品安全已成为一个重要的公共卫生问题,快速、准确地监测和检测食源性致病菌是控制和预防人类食源性疾病的最有效方法之一。由于食品基质的复杂性、细菌的多样性及不同生长和复制特性,给食源性致病菌检测带来了重大挑战。传统微生物检测方法耗时费力,不足以满足不可培养活菌细胞和现场快速食品检测的要求。因此,近年来针对食源性致病菌开发了各种免疫检测技术,比传统方法更加灵敏、简单和高效,具有广阔的应用前景。该文结合食源性致病菌亚致死损伤、活的不可培养(viable but non-culturable,VBNC)和休眠3种代谢状态的生物学特征及抗体的类型和特点,综述了当前用于食源性致病菌常见的免疫技术的检测原理、优缺点和应用,并对现有方法的局限性和未来发展方向进行讨论,以期为食源性致病菌免疫检测技术的开发和利用提供参考。

三种蛋白诊断结核分枝杆菌感染的价值研究

目的:探讨Krüppel样转录因子2(krüppel-like transcription factor 2,KLF2)、鸟苷酸结合蛋白5(guanylate-binding protein 5,GBP5)、双特异性磷酸酶3(dual specificity phosphatase 3,DUSP3)等3种蛋白及其不同组合对于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的诊断价值。方法:选取2023年1—3月首都医科大学附属北京胸科医院就诊患者和同期进行健康体检的人群作为研究对象,根据结核病诊断标准将研究对象分为活动性结核病(ATB)组(145例)、结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)组(145例)、健康对照(HC)组(200名)。使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测研究对象血清中KLF2、GBP5、DUSP3蛋白水平[450 nm波长吸光度值;中位数(四分位数)],采用受试者工作特征曲线分析各蛋白单独或联合诊断MTB感染的价值。结果:KLF2在HC组的蛋白水平为0.317(0.198,0.496),明显高于ATB组的0.234(0.160,0.297)及LTBI组的0.224(0.145,0.320),差异均有统计学意义(P<0.001)。GBP5在ATB组的蛋白水平为0.327(0.259,0.402),明显高于LTBI组的0.196(0.150,0.273)及HC组的0.180(0.125,0.281),差异均有统计学意义(P<0.001)。DUSP3在ATB组的蛋白水平为0.329(0.223,0.458),明显高于LTBI组的0.213(0.160,0.248)及HC组的0.196(0.132,0.297),差异均有统计学意义(P<0.001)。GBP5与DUSP3双蛋白组合区分ATB和LTBI的诊断效能[曲线下面积(AUC)为0.800]优于KLF2(AUC为0.534)、GBP5(AUC为0.761)、DUSP3(AUC为0.720)等单一蛋白及其不同组合的诊断效能,最大约登指数下的敏感度为73.79%,特异度为75.86%;GBP5、DUSP3双蛋白组合区分ATB和HC的诊断效能(AUC为0.781)优于KLF2(AUC为0.629)、GBP5(AUC为0.740)、DUSP3(AUC为0.716)等单一蛋白及其不同组合的诊断效能,最大约登指数下的敏感度为77.93%,特异度为71.50%;三种蛋白及其不同组合区分LTBI与HC的诊断效能较差,其AUC均小于0.700。结论:研发基于蛋白水平的MTB感染免疫检测方法存在可能性,蛋白联和应用可提高诊断效能。