IgY抗体用于弓形虫感染小鼠病原学检测的研究

[目的 ]将抗弓形虫鸡卵黄抗体 (Ig Y)应用于免疫酶染色 ,探索弓形虫感染的病原学诊断途径。 [方法 ]取急性感染弓形虫小鼠的肝、脾和肾组织切片 ,用 Ig Y作为第 1抗体 ,间接酶免疫染色 ,检查细胞内弓形虫速殖子。 [结果 ]在细胞内可见呈弧形、半月形紫红色半透明的弓形虫速殖子 ,虫体完整 ,一般 1～ 4个虫体 /细胞 ,以 2～ 3个多见。 [结论 ]Ig Y抗体的间接酶免疫染色试验用于诊断急性感染弓形虫的小鼠 。

抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究

目的探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用。结果初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P<0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍。结论抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠。

基于表面等离子体共振技术用鸡蛋黄抗体IgY测定人血清中转铁蛋白

采用表面等离子体共振(SPR)方法,用鸡蛋黄抗体(IgY)取代传统免疫检测中哺乳动物抗体IgG作为识别分子偶联于CM5传感芯片上,对人血清中的转铁蛋白进行了检测.考察了IgY在传感芯片上的偶联条件及芯片的再生条件.结果表明,在pH=4.0,IgY浓度为100μg/mL,流速为5μL/min的最佳偶联条件下,SPR响应信号和转铁蛋白浓度在50～500 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检出限为39.56 ng/mL,对人血清样品检测的日间变异系数<8%,日内变异系数<5%,平均回收率为86.22%～94.51%.

抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体的制备和初步鉴定

以纯化的鸡蛋黄ＩｇＧ（ＩｇＹ）为免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取其脾细胞与小鼠Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ筛选，３次克隆化后，获得２株能稳定分泌抗ＩｇＹ单克隆抗体的杂交瘤细胞ＩＧ１１和３Ａ６。用琼脂双扩散法鉴定，两者均为ＩｇＧ１亚类。特异性鉴定表明，１Ｇ１１和３Ａ６。两株单克隆抗体均与鸡血清ＩｇＧ和鸡蛋黄ＩｇＧ起强反应，而不与鸭蛋黄、鹌鹑蛋黄、小鼠血清、大鼠血清、兔血清、羊血清、马血清，以及人血清的ＩｇＧ起反应。１Ｇ１１与３Ａ６的腹水效价分别为３．１×１０－６和６．４×１０－６。

鸡卵黄免疫球蛋白Y的性质

用ＥＬＩＳＡ技术研究了鸡卵黄免疫球蛋白Ｙ（ＩｇＹ）对温度、酸碱度、胃蛋白酶、胰蛋白酶及反复冻融的稳定性。结果表明：ＩｇＹ具有良好的热稳定性，对酸碱具有一定的耐受力，对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力（ｐＨ＞４）。对胰蛋白酶非常敏感，经１ｈ酶解处理，ＩｇＹ的结合活性完全丧失。ＩｇＹ具有很好的耐反复冻融的特性，即使经过５次反复冻融，其抗原结合活性也几乎未受损失。

离子交换色谱法分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白

建立了高效、经济、大规模获得鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的生产方法。在对传统的水稀释法改良的基础上,结合聚乙二醇沉淀与离子交换色谱进行IgY的分离纯化。结果显示,用8倍无菌水稀释蛋黄液,用0.1 mol/L HCl调节pH为5.2,在4℃下静置8 h,于5 000×g力离心可得上清粗IgY液,经测定回收率可达93.47%。然后用6%聚乙二醇沉淀后经DEAE-Toyopearl 650 M离子交换纯化,最佳的纯化条件:0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7)平衡上样,0.075 mol/L PBS(pH 7)洗脱。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果显示所得的IgY的纯度为95.02%,活性保持率高达73.77%。本研究弥补了传统分离方法不能同时达到高纯度和高回收率的缺点,且可用于大规模生产。

鸡卵黄抗体的制备及其不均一性

介绍了免疫期卵黄液中白蛋白（牛）抗体效价和亲合力的变化。研究了ｐＨ对稀释卵黄液去脂效果，以及硫酸铵浓度对ＩｇＹ浓缩、纯化效果的影响。探讨了抗白蛋白ＩｇＹ 的异质性。实验表明稀释卵黄液酸化处理和ＩｇＹ盐析的最适合条件分别是ｐＨ５．１ 和２．２ｍ ｏｌ／Ｌ。经免疫亲和柱层析或金属（Ｆｅ３＋ ）螯合亲和柱层析后，白蛋白抗体样品均出现多个不同层析行为的抗体峰。实验提示免疫卵黄液中不仅可能存在不同亲合力、特异性的白蛋白抗体，还可能存在反映基本结构、理化性质差异的白蛋白抗体。

鸡卵黄免疫球蛋白的mPEG修饰及其稳定性研究

研究了单甲氧基聚乙二醇(mPEG)对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的化学修饰,并通过傅里叶变换红外光谱、圆二色光谱和荧光光谱分析比较了修饰前后IgY的稳定性。首先用N-羟基琥珀酰亚胺活化的单甲氧基聚乙二醇(NHS-mPEG)对IgY进行化学修饰,确定了mPEG的最佳修饰条件,即IgY与mPEG摩尔比为1∶10、pH值为7、反应时间为1h,所得产物mPEG-IgY修饰率为20.56%,活性保持率为87.62%。其次通过光谱分析法对IgY以及mPEG-IgY的热稳定性和酸碱稳定性进行了研究。结果表明,70℃温育120min后,IgY的α-Helix,β-sheet,β-Turn,Random各二级结构含量由14.5%,42.1%,6.2%,37.2%变为1.6%,55.25%,5.8%,37.5%;mPEG-IgY的各二级结构含量由12.9%,42.7%,6.3%,38.1%变为3.1%,50.5%,7.2%,39.2%。同样酸碱处理后,mPEG-IgY比修饰前IgY所引起的二级结构变化更小。因此可以推断出IgY经过mPEG修饰后对温度、酸碱处理所引起的变性有着更强的稳定性。

抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白耐酸碱性的研究

在pH2～12不同酸碱度环境中37℃保温0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h后对抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的中和效价、分子结构变化及其耐酸耐碱性进行了测定。结果显示,在pH2～9范围内,37℃保温至4h,抗轮状病毒IgY的中和效价无明显变化,SDS-PAGE非还原性电泳图中未出现降解带;pH≥10时,37℃保温至1h,中和抗体效价即开始下降,电泳图中出现降解带,pH达11、12时处理1h以上样品则全部降解,生物活性丢失。提示抗轮状病毒IgY的耐酸性较耐碱性强,能耐受正常人体消化道内酸碱度。为制备成口服制剂提供试验依据。

鸡卵黄抗体研究进展

当用某种抗原免疫产蛋母鸡时,可产生相应的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)储存于卵黄中。母鸡经免疫应答后,可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量的、均一的、高效的IgY。IgY类似哺乳动物的IgG,但又有其独特的优点。本文对IgY的性质、免疫程序、分离提纯方法及其在检测诊断上和疾病防治方面的应用作了较详细的论述。可以预见,随着研究的进一步深入,IgY的应用将不断扩大。

鸡传染性法氏囊病卵黄抗体制备——免疫、效价检测和沉降分离

采用 3种不同的方案对蛋鸡进行强化免疫 ,获得抗鸡传染性法氏囊病的高免卵黄抗体原液 .用缓冲液沉降分离提取水溶性抗体成份IgY ,再采用琼脂扩散试验 (AGP)检测卵黄原液、上清液和沉渣的效价 .试验测得卵黄效价最高达 12 8,经缓冲液一次沉降约 5h后得到的上清液效价接近于卵黄效价 ,沉渣效价≤ 4.该工艺比其它高免卵黄抗体提取工艺简单得多 ,具有投资少、操作简便。