免疫球蛋白kappa轻链基因在鼻咽癌中表达的初步研究

目的：为了探讨Ｉｇκ是否参与了鼻咽癌的癌变过程及可能机制，对Ｉｇκ在鼻咽癌中的表达进行了研究，并初步探讨Ｉｇκ与ＥＢ病毒潜伏膜蛋白基因ＬＭＰ－１在鼻咽癌中的相关性。方法：分别运用原位杂交技术和免疫组化技术检测鼻咽癌活检组织中Ｉｇκ的ＲＮＡ和蛋白质水平的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析两株鼻咽癌细胞系（ＣＮＥ１和ＣＮＥ－ＬＭＰ）ｋａｐｐａ蛋白的表达及强度差异。结果：原位杂交技术显示１００％（４２例／４２例）标本均有ｋａｐｐａ的表达：免疫组化和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹提示，ｋａｐｐａ蛋白表达在所有的鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系里，且表达的可能是游离型的ｋａｐｐａ轻链。在整合表达有ＬＭＰ的ＣＮＥ１－ＬＭＰ鼻咽癌细胞株，游离型ｋａｐｐａ的表达明显增强。结论：这些结果提示Ｉｇκ基因可能与鼻咽癌癌变过程相关。其致癌机制可能与它和ＥＢ病毒的ＬＭＰ有联系，这为阐明鼻咽癌癌变的分子机理提供了又一条有益的思路。

军曹鱼Igκ轻链cDNA克隆及组织表达分析

应用同源克隆和RACE技术克隆了军曹鱼(Rachycentron canadium Linnaeus)Igκ轻链的cDNA全序列,并分析其在组织中的表达。军曹鱼Igκ的cDNA全长969 bp,3′端的非编码区域(UTR)为188 bp,5′UTR为52 bp,开放阅读框为729 bp,编码242个氨基酸,分子量约为26.255 kD,理论等电点7.52。推测的军曹鱼Igκ恒定区氨基酸序列同(Seriola quinqueradiata)、大西洋鲑(Salmo salar)的Ig轻链同源性最高,达77%以上,可变区氨基酸序列与的相应序列同源性最高,达87%。通过构建系统进化树可以看出,军曹鱼Igκ恒定区氨基酸序列同、大西洋鲑的L3、斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的G等鱼的轻链均为κ型的聚为一支,同大西洋鲑的L2、斑马鱼(Danio rerios)的L2、鲤(Cyprinus carpio)的L2等均为λ型的明显不同,由此可推断此序列属于Igκ型。利用半定量PCR技术,发现在健康鱼体中κ链基因在肝脏和鳃中的表达量较高,在肠和脑组织中几乎没有表达。经鲨鱼弧菌(Vibrio carchariae)JT2刺激192 h后,κ链基因在采样的各个组织中均有表达,尤其在头肾、肠、鳃和脾中的表达量较正常水平明显升高,而肝的表达量有所下降,脑组织有κ链基因的少量表达。说明经刺激后头肾、脾脏、肠、鳃是免疫球蛋白的主要表达场所,在抵御病原感染过程中发挥着重要作用。

鼻咽癌恶性转化基因Tx核苷酸序列分析

从人类鼻咽癌细胞系CNE2基因组DNA文库中克隆一个恶性转化基因Tx转染小鼠JB6 + 细胞 ,使细胞恶性转化 ,宿主细胞具有停泊非依赖生长的特性 .已经报道的Tx中一个 3 0kb片段(Tx3 0 )的序列分析结果表明 ,Tx包含人类免疫球蛋白κ轻链完整的J区 .进一步对Tx全长进行亚克隆和测序 ,并采用生物信息学方法进行分析表明 ,Tx包含人类Igκ完整的J区、C区基因片段、还有 5个重组信号序列 ,1个核基质结合序列和 1个N segment的插入 .Tx与正常人IgκJ、C区比较只是在某些位点存在碱基的缺失、插入或置换 ,二者同源性高达 98% ,其电子定位于 2p11 2 ,这与人Igκ的染色体定位是一致的 .可以认为 。

尿κ轻链早期诊断糖尿病肾病的价值初探

目的 探讨尿κ轻链 (KLC)在早期糖尿病肾病 (DN)中的变化及其临床诊断价值。方法 分别以散射比浊法和放射免疫法测定 12 3例 2型糖尿病患者尿KLC和尿白蛋白排泄率 (UAER)。结果 2型糖尿病组尿KLC高于对照组 (P <0 .0 0 1)。糖尿病微量白蛋白尿组尿KLC高于糖尿病正常白蛋白尿组及对照组 (P <0 .0 1)。早期糖尿病肾病患者大部分同时存在尿KLC和UAER的升高。尿KLC和UAER两种方法诊断早期糖尿病肾病有非常显著关联性 ,且诊断结果无差别。在 9.91mg dl水平 ,尿KLC诊断早期DN有较高的特异性。结论 尿KLC为诊断早期糖尿病肾病肾小管病变指标 ,因与UAER存在分离现象 ,和UAER联检可更好地早期诊断和监测糖尿病肾病 ,建议尿KLC≥ 9.91mg dl为诊断早期糖尿病肾病的界限值。

植物抗体基因工程：Ⅲ．马铃薯Y病毒小鼠中和抗体链基因的序列分析及其植物表达载体的构建

序列分析表明，马铃薯Ｙ病毒小鼠中和抗体轻链基因（Ｋ６）全长为９５６个核苷酸碱基（不包括ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴），其中包括５＇端非编码区３１个核苷酸碱基，编码轻链信号肽的５７个核苷酸碱基，编码成熟蛋白的６５７个核苷酸基和３＇端非编码区的２１１个核苷酸碱基。与已知的其它Ｋ轻链基因（ＭＲＫ１６）相比，核苷酸的序列同源性为９８．７％，由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为９７．０％，其变异主要发生在三个抗原识别位点内（ＣＯＲ）。将完整的抗体轻链基因正向插入植物表达载体ｐＢ１２１中的原ＧＵＳ基因位置上，置于花椰菜花叶病毒３５Ｇ启动子控制之下，获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Ｙ病毒中和抗体轻链基因的植物表达载体ｐＹＬ。

血清轻链κ/λ比值在诊断多发性骨髓瘤和原发性肾病中的临床价值

目的 探讨血清轻链κ/λ比值在鉴别诊断多发性骨髓瘤（MM）和原发性肾病的临床价值以及κ/λ比值与MM其他实验室指标的关系.方法 依据血清免疫固定电泳进行分型,选取MM组患者88例,并根据免疫固定电泳时“M”蛋白成分的不同将88例MM患者分为IgGκ组、IgGλ组、IgAκ组、IgAλ组;原发性肾病组109例;选取同期45例健康体检者作为对照组.采用速率散射免疫比浊法测定各组研究对象血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、轻链κ及轻链λ含量并计算κ/λ比值,同步检测血清β2-微球蛋白（β2-MG）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）水平及M蛋白百分比,并比较其差异.结果 （1）MM组中,各型间性别及国际分期系统（ISS）临床分期差异无统计学意义（P＞0.05）,而年龄分布差异有统计学意义（P =0.011）.（2）与对照组比较,MM组各类κ型骨髓瘤患者血清κ轻链、κ/λ比值及相应的免疫球蛋白显著升高,而血清λ轻链及其他免疫球蛋白含量则显著降低（P＜0.01）,各类λ型骨髓瘤患者血清λ轻链显著升高而κ轻链及κ/λ比值显著降低（P＜0.01）;原发性肾病组患者轻链κ、轻链λ及血IgG含量均降低,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,但κ/λ比值与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）.同时各型MM患者与原发性肾病组比较,除轻链及血免疫球蛋白差异有统计学意义外,BUN、CRE差异亦有统计学意义（P＜0.05）.（3）MM组患者血清κ/λ比值与肿瘤负荷指标血清ALB呈负相关（r=-0.264,P=0.013）,与β2-MG呈正相关（r=0.235,P=0.040）.结论 血清κ轻链、λ轻链及κ/λ比值分析对于鉴别诊断MM和原发性肾病具有重要的临床参考价值.κ/λ比值在MM患者疾病进程中与一些肿瘤负荷指标有一定的相关性,可为临床MM患者诊疗、预后监测提供更为有效简便的检测手段.