PCR-SBT 与 IMS-ELISA 法在强直性脊柱炎患者 HLA-B27检测中的比较

目的：比较聚合酶链反应-直接测序法（polymerase chain reaction sequence-based typing，PCR-SBT）和磁珠酶联免疫法（immunomagnetic separation and enzyme-linked immunosorbent assay，IMS-ELISA）检测人类白细胞抗原 B27（human leukocyte antigen B27，HLA-B27）在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）临床诊断中的价值。方法应用 PCR-SBT法和 IMS-ELISA 法对120例疑似 AS 患者外周血进行 HLA-B27检测。以 SPSS17.0软件的配对χ^2检验和受试者工作特征曲线下面积对两种方法检测 HLA-B27在 AS 诊断中的价值进行评价。结果120例疑似 AS 患者中，PCR-SBT 和 IMS-ELISA 法 HLA-B27检测阳性率分别为45.83％（55／120）和37.50％（45／120）。两种方法检测 HLA-B27差异有统计学意义（χ2＝59.455，P ＝0.000）。PCR-SBT 法敏感度和特异度分别为96.36％和96.92％；IMS-ELISA 法的敏感度和特异度分别为69.09％和89.23％。两者的 AUC 分别为0.966和0.792。结论与 IMS-ELISA 法相比，在 AS 的临床诊断中PCR-SBT 法检测 HLA-B27的敏感度和特异度更高，方法更优。

IMS-PCR对食品中单增李斯特菌快速检测

为了建立一种快速检测食品中单增李斯特菌的方法,试验设计了Listeriolysin O、23SrRNA和hly、iap四对引物分别做双重PCR引物,并与免疫磁珠法分离LMO相结合对LMO进行快速鉴定。结果显示,这四对引物分别扩增条带为700bp,240bp,308bp,505bp,可分辨不同种属的李斯特菌和其它不同菌株。建立的IMS-PCR方法最低检测限可达到1CFU/25g(mL)食品,通过检测食品样本188份,结果与常规检测方法所得的结果一致率为100%。所以,建立的IMS-PCR方法具有极好的特异性、敏感性和稳定性,在24h内可得到准确的检测结果,具有广阔的发展和市场应用前景。

ATP生物发光技术在微生物检测中的应用

ATP(三磷酸腺苷)生物发光法作为一种不断完善成熟的微生物快速检测方法,具有简便、快速、高灵敏度等优点。对该方法的历史发展、检测原理、目标物提取方法、应用领域和最新研究成果等做重点介绍,并对ATP生物发光法的应用现状和发展方向进行总结和展望。

水中肠贾第氏鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊的检测

详细介绍了检测水中肠贾第氏鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊的仪器设备、试剂及方法 ,并对长江原水 ;黄浦江原水及相关出厂水进行了检测 ;在长江原水和所有出厂水中均未检出隐孢子虫卵囊 ,在黄浦江上游原水中检出极少量肠贾第氏鞭毛虫孢囊 ,而在下游水中检出的孢囊较多。

郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染监测

[目的]2005年监测郑州市肠出血性大肠杆菌O157:H7感染状况及病原分布特点,为各级卫生行政部门制订新发传染病防治措施,提供基础疫情资料。[方法]监测标本用免疫磁珠集菌方法(IMS)做病原学分离培养、毒力基因检测用多重PCR方法、药敏试验用(K-B)常规方法。[结果]腹泻病人标本185份,大肠杆菌O157:H7检出阳性4份。外环境标本588份,检出大肠杆菌O157:H7阳性20份。用多重PCR方法做毒力基因检测,有6份家畜家禽阳性标本中检出O157:H7毒力基因(Stx2、eaeA、HIyA)为阳性。药敏试验24株肠出血性大肠杆菌O157:H7对8种抗菌药物敏感率为95%以上,对新生霉素100%耐药,其余7种对抗菌药物敏感程度各有差异。[结论]郑州市有散在的大肠杆菌O157:H7感染的病人及动物疫点。奶牛和波尔山羊是大肠杆菌O157:H7动物宿主。

来自腹泻合并急性肾衰病人疫区的99株E.coli O157∶H7的鉴定结果分析

目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌。方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增等方法进行病原菌的检测。结果分离出99份E.coli O157∶H7菌株,其中rfbO157、志贺氏样毒素2(stx2)、溶血素(hlyA)、肠上皮细胞纤毛消除素(eaeA)基因和vero细胞毒性试验均阳性的有56株,其它基因组合7株,36株无毒力基因。结论99株E.coli O157∶H7在CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基生长形态、颜色,生化反应及毒力基因表现等方面出现多样化,对于今后在制定对该菌的诊断标准、传染源的控制及细菌毒力学等方面的研究提供了依据。

河南豫东地区产志贺样毒素Ecoli O157∶H7感染病例的流行病学调查研究

[目的 ]探讨河南省局部地区腹泻病人感染及携带大肠杆菌O15 7∶H7的情况 ,观察带菌时间及预后。[方法 ]采用流行病学监测方法发现病人 ,通过病人粪便mEC肉汤增菌 14h、胶体金免疫卡筛选、免疫磁珠法集菌、CHROMAGAR O15 7∶H7显色培养基分离、rfbO15 7、rfbO111、hlyA、stx1、stx2、eaeA引物PCR扩增方法进行毒力因子测定等方法 ,观察、研究感染病人的发病和预后。[结果 ]从 130 3份腹泻病人中共分离出的 38株O15 7∶H7菌株 ,检出率 2 9% ,PCRrfbO15 7扩增均为阳性。其中 2株具有stx2、hlyA和eaeA毒力基因 ,36株为O15 7∶H7不产毒株。[结论 ]我省首次从病人中分离出O15 7∶H7产毒株 ,病人发病后可于第 3～

应用免疫磁性分离技术检测小细胞肺癌循环癌细胞的实验研究

目的 在免疫磁性细胞分离技术的基础上探索一种能检测小细胞肺癌循环癌细胞敏感而有效的方法。方法 将微量小细胞肺癌细胞按比例加入到外周血单个核细胞悬液中混匀 ,再通过特异性单抗包被的免疫磁性微珠吸附、富集 ,免疫细胞化学鉴定 ,计算癌细胞的回收率和检测敏感性。结果 免疫磁性微珠与小细胞肺癌能敏感而特异地结合。与免疫细胞化学方法结合可检出 45 .6%混入外周血单个核细胞中的微量癌细胞 ,未有假阳性。应用此种方法 ,每 5ml外周血单个核细胞悬液中含有 5个癌细胞阳性率可达 4/5。结论 免疫磁性细胞分离技术是一项检测外周血中循环癌细胞的有效技术 。

免疫磁性捕获ELISA法检测甘草中甘草蛋白的研究

目的 制备甘草蛋白免疫磁性微球,并建立快速、精确的免疫磁性捕获ELISA法检测甘草蛋白。方法 采用种子聚合法合成聚苯乙烯磁性微球,并以兔抗甘草蛋白IgG抗体致敏,制备特异性捕获甘草特征蛋白的免疫磁性微球。以生物素标记抗体为示踪抗体,结合辣根过氧化物酶标亲和素建立ELISA检测系统,用于甘草药材和含甘草中成药中甘草蛋白的分析。结果 利用该方法对甘草药材和中成药中甘草蛋白抗原检测,检测灵敏度达到10ng/mL。结论 免疫磁性捕获ELISA检测技术方便、快速、准确,为生药的品种鉴定及中成药的质量控制提供一种新方法。

免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞及初步鉴定

目的：应用免疫磁珠法分选人骨髓多能成体祖细胞,观察其分选效果,建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞（hMAPCs）的方法.方法：取健康成人志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,在自制培养基下贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A（GlyA）免疫微磁珠（miniMACS）负分选,锥虫蓝拒染实验计数MACS分选前后细胞活力.流式细胞仪鉴定分选后细胞纯度;流式细胞仪分析培养细胞CD29、CD44、CD34和HLA-DR表达情况.结果：通过MACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约（5～10）×104/ml hMAPCs,分选后的hMAPCs细胞生长良好,最长传代到第20代.分选前后细胞活力分别为（96.7±1.7）%和（96.0±2.4）%,无明显差异;流式细胞仪分析获取的CD45-、GlyA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪检测hMAPCs中CD29阳性表达细胞比率为99.2%,CD44阳性细胞比率为98.3%,CD34阳性细胞比率为1.2%,HLA-DR阳性细胞比率为5.3%.结论：CD45、GlyA免疫微磁珠负分选可从骨髓中分离高纯度的hMAPCs;分选后hMAPCs在自行研制的培养基中有较强的增殖能力.

水体中隐孢子虫卵囊的检出及其活力分析(英文)

从水中检测隐孢子虫卵囊是评价水源传播人类隐孢子虫病风险的第一步 .从水中检出的卵囊的活力需要进行测定才能估计水源爆发的真正风险 .应用聚丙烯盒式过滤器和美国环保局 (USEPA) 16 2 2过滤方法的囊式过滤器(Gelman ,Michigan ,USA) ,分别过滤了当地 (法国鲁昂 )的环境水和供给水 ,并用免疫磁分离技术 (IMS)进行分离 .用免疫荧光检测法 (IFA)从浓缩的水样中检测到了隐孢子虫卵囊 .环境水中的卵囊浓度是每升水中 0 .12～ 2 .7个卵囊 ;供给水中的卵囊浓度是每升水中 0 .0 3～ 0 .0 6个卵囊 .用新生小鼠模型初步评价了检出卵囊的感染力 .结果证明了隐孢子虫卵囊在环境中尤其是水中的广泛分布 ;同时表明 ,评估水源传播的隐孢子虫病的风险时 ,不仅要从水中检出卵囊 ,而且要测定检出的卵囊的活力 .表 1参 2

应用磁免疫技术快速检测食源性沙门氏菌方法研究

目的应用磁免疫分离技术建立快速检测食源性沙门氏菌应用方法。方法食品样品在含有免疫磁珠的循环体系中筛选,如有目标菌则被固化的免疫磁珠捕获,浓缩富集的免疫磁珠在显色培养基中直接培养,可疑菌落通过全自动细菌分析鉴定仪及荧光定量PCR方法确认。结果食品沙门氏菌免疫磁珠检测方法能快速有效富集食品基质中的目标菌,检测限达到<10cfu/25g,检测周期约为40小时。结论成功建立了可应用于日常食品微生物检测的食源性沙门氏菌磁免疫分离检测技术。

水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测

该文对Filta-Max Xpress压力淘洗装置过滤、淘洗水样、免疫磁分离及免疫荧光检验的两虫检测技术进行了研究,同时对上海市自来水市北公司下属制水企业的水源水、出厂水和龙头水进行了检测。结果表明源水中均有贾第鞭毛虫和隐孢子虫存在,范围为0-9个/20 L,出厂水和龙头水中均未检出。

免疫学方法在食源性副溶血性弧菌检测中的应用研究进展

副溶血性弧菌可污染以海产品为主的各类食品,其引发的食品安全事件数量已经跃升至我国食品中毒事件数首位。相对于传统培养法及现代分子检测技术,基于抗原-抗体特异性识别反应的免疫鉴定及分型策略在检测效率、特异性、现场适用性、前处理简便性等诸多方面显现突出优势。本文在解析当前副溶血性弧菌抗体种类及制备方法的基础上,就免疫磁珠分离、酶联免疫吸附测定、免疫层析测试、免疫传感器、免疫荧光显微术等方法在食源性副溶血性弧菌检测中的应用现状进行综述,以期为该病原菌的快速检测提供借鉴和参考。

Improvement of detection method of Cryptosporidium and Giardia in reclaimed water

Cryptosporidium and Giardia are two typical species of pathogenic protozoans that seriously endanger water quality.Previous works indicated that detection of Cryptosporidium and Giardia with modified United States Environmental Protection Agency(USEPA)method-1623 using a membrane filtration-elution for sample concentration attained better recovery and lower cost compared to the USEPA method-1623.Several improvements of membrane filtration-elution step as well as immunomagnetic separation(IMS)steps were investigated and an optimized method for detection of Cryptosporidium and Giardia in wastewater reclamation system was recommended in this paper.The experimental results show that an overnight soak of the membrane after scraping and vortex agitation before elution could enhance and stabilize the recovery.Increasing turbidity to 4 NTU by adding kaolin clay before filtration could effectively improve the recovery of low-turbidity water.Washing the concentrate after centrifugation and twice acid dissociation both reduced the impact of water quality to protozoan recovery.Protozoans in different water samples were determined by this optimized method,and the recovery of Cryptosporidium and Giardia were above 70% and 80%respectively,much higher than the acceptance of method-1623.