改良的RIHA方法定量检测PCV2 Cap抗原的研究

为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4、3、2、1、0分,将几个稀释度的被检样品全部检测孔的分数加和;3)同法检测参照品并将参照品分数加和;4)被检样品与参照品总分数对比计算,获得被检样品抗原含量。改良的RIHA方法进行稳定性评价并与ELISA方法做比较。结果显示,改良RIHA方法的批内差异为6.8%~19.4%、批间差异为11.4%~23.6%、检测同一个样品差异系数为8.5%,均优于常规RIHA方法。改良RIHA方法检测纯化前和纯化后的PCV2 Cap抗原共30份,与ELISA方法检测结果比较相关系数为0.9568。研究结果表明,改良的PCV2 Cap抗原RIHA定量检测方法稳定性良好,且与ELISA方法检测结果有相关性,可在PCV2 Cap抗原生产中做定量检测,也可在毒种筛选、生产工艺优化中快速定量检测PCV2 Cap抗原含量。

采用间接血凝试验(IHA)确定湖区血吸虫病中度流行区化疗对象的可靠性分析

目的分析ＩＨＡ法在湖区血吸虫病中度流行区确定化疗对象的可靠性。方法选择洞庭湖沿岸疫情基本一致的流行村６个，居民感染率均在１０％～１５％之间。每年对其一半人群采用ＩＨＡ法过筛，抗体滴度在１： １０及以上者作为化疗对象，同时用Ｋａｔｏ－Ｋａｔｚ粪检法考核化疗效果。结果ＩＨＡ法阳性者包括了９０．７％～９６．１％的Ｋａｔｏ－Ｋａｔｚ粪检阳性者在内。１９９７、１９９８年ＩＨＡ和粪检都为阳性的人群，１９９９年粪检阴转率为８０．５％和７７．７％。ＩＨＡ和粪检均为阴性的人群，粪检考核阴性率仍保持９６．４％到 ９８． ３％。单就１９９７年粪检阳性者而言，１９０９年粪检阴转率为 ７４． ４％。结论在湖区血吸虫病中度流行区，采用ＩＨＡ确定化疗对象，可将９０％以上的粪检阳性对象和粪检查不出的大量血吸虫病人包括在内，其阳性和阴性结果是可靠的。

应用间接血凝试验(IHA)诊断猪蛔虫病

以猪蛔虫抗原致敏绵羊红细胞制备检测猪蛔虫特异性抗体的间接血凝诊断试剂,与猪蛔虫抗体发生特异性凝集反应。结果表明,用间接血凝诊断试剂对3 000份猪血清进行现场检测,阳性率为30.00%;而琼脂扩散试验(AGP)的阳性率为13.00%,表明,间接血凝试验(IHA)比GAP敏感,间接血凝诊断试剂可用于猪蛔虫病的快速诊断。

IHA与ELISA检测猪瘟病毒抗体的比较

应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟病毒抗体,IHA试验以1∶16为判定孔,抗体效价大于或等于1∶16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40%为判定标准,阻断率大于或等于40%为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段免疫猪血清。结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92份,相关性为75.4%,不同抗体水平分布的血清数也不同,个别血清出现较大差异,卡方检验P值为0.13(>0.05),两种检测方法统计上无差异,研究结果为选择猪瘟病毒抗体检测方法提供参考。

IHA筛查结果作为血吸虫病疫情判定指标应用价值探讨

目的探讨IHA筛查结果作为血吸虫病疫情判定指标应用价值。方法收集安徽省自2007年以来19个县(市、区)的疫情控制达标考核资料、32个县(市、区)的传播控制达标考核资料以及9个县(市、区)的传播阻断达标考核资料,分析疫情控制地区IHA筛查阳性率与人群感染率之间相关性、比较不同疫情状况地区人群IHA阳性率差别及不同疫情状况地区IHA阳性率95%置信区间。结果疫情控制地区IHA筛查阳性率与人群感染率之间存在正相关(rs=0.687,P=0.001);疫情控制、传播控制和传播阻断3个不同疫情状况地区IHA检查结果差别具有统计学意义(χ~2=3 373.28,P=0.000);以1∶10为IHA阳性阈值,人群IHA阳性率95%置信区间疫情控制地区为9.48%~9.94%,传播控制地区为2.71%~3.03%,传播阻断地区为0.78%~1.02%。结论随着疫情逐步下降,人群IHA阳性率也随之逐步下降,IHA检查结果在一定程度上可以反映群体疫情状况。

应用间接血凝(IHA)诊断绵羊肉孢子虫病

选用自然感染严重的绵羊肉孢子虫病病羊肌肉和从食道挑出的虫体制备诊断抗原,用微量间接血凝法对326只绵羊血清进行诊断。结果表明,34只(份)带虫绵羊血清检出阳性反应32只(份),阳性符合率达94%,血凝效价达1∶64—1∶1024。9只(份)健康羊血清均为阴性反应,血凝效价仅达1∶4—1∶16。240只(份)被检0.5岁羔羊血清中有166只(份)血清呈阳性反应,阳性率达69.2%。被检成年羊血清43只(份),41只(份)血清呈阳性反应,阳性率达95.33%。试验表明,用绵羊肉孢子虫滋养体制作的可溶性蛋白抗原(蛋白含量为200—300μg/ml),致敏健康绵羊红细胞作为诊断液,敏感性高,重复性稳定,特异性强,不与弓形虫和棘球蚴发生交叉反应。是一种较为理想的诊断方法。

抗犬瘟热高免卵黄抗体IHA检测方法的建立

目前检测卵黄抗体的方法很多,但IHA方法具有简便快速的优点,本研究的目的是为了建立抗犬瘟热高免卵黄抗体检测方法。采用犬瘟热病毒和犬细小病毒二联疫苗处理作为疫苗抗原,用犬瘟热病死犬的肝脏部分处理后作为组织抗原,制备敏化绵羊红细胞,用IHA方法确定了犬二联疫苗抗原和犬瘟热病毒组织抗原的最适含量。二联疫苗提取抗原的含量为0.7 mg/mL致敏红细胞时,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶256;而患犬瘟热松狮犬的肝脏组织抗原蛋白浓度为0.5mg/mL,与犬瘟热单克隆抗体反应显著,抗体效价为1∶128。经过IHA验证,制备的松狮犬瘟热肝组织抗原,蛋白含量0.5 mg/mL 1%致敏红细胞,对应的单抗、鸡血清均出现了凝集,阳性对照也出现凝集,阴性对照未出现凝集。建立的IHA抗体检测方法,为准确检测制备抗犬瘟热高免卵黄抗体的效价奠定了基础。

日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)早期诊断效果的初步评估

目的初步评估日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)的早期诊断效果。方法建立日本血吸虫感染家兔模型,日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)及基于该试剂盒所使用的血吸虫天然蛋白抗原X的ELISA法(抗原X-ELISA法)检测感染前及感染后第1、2、3、4、5、6周兔血清,并比较两种方法的早期诊断效果。结果日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)检测感染前及感染后第1、2周兔血清的阳性率均为0,从感染后第3w开始阳性率均达到100%;抗原X-ELISA法检测日本血吸虫感染前正常兔血清的假阳性率为30.77%,检测感染后第1、2周兔血清的阳性率分别为0和16.67%,从感染第3周开始阳性率也达到100%。两种方法检测同一时间点兔血清的阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)在早期诊断日本血吸虫病方面具有一定的潜在价值。

基于可溶性童虫抗原(SSA)的IHA法早期诊断日本血吸虫病的初步研究

目的建立基于可溶性童虫抗原(SSA)早期诊断日本血吸虫病的IHA法。方法收集日本血吸虫感染后第13d童虫,制备SSA;探索SSA致敏红细胞的最佳体积比例以及灭活补体阴性兔血清的最佳封闭浓度,制备基于SSA的IHA法诊断试剂(以下简称"SSA-IHA法"),并检测日本血吸虫感染前及感染后第1、2、3、4、5、6周兔血清。结果 SSA致敏红细胞的最佳体积比例为1:1,灭活补体阴性兔血清的最佳封闭浓度(V/V)为3%。SSA-IHA法检测日本血吸虫感染前及感染后第1、2、3、4、5、6周兔血清的阳性率依次为0%、0%、0%、90.91%、100%、100%和100%。结论基于可溶性童虫抗原(SSA)的IHA法在早期诊断日本血吸虫病方面具有一定的价值。

应用间接血球凝集(IHA)试验诊断猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)病

本文用猪囊尾蚴的全囊虫、囊液、头节的粗提抗原(CW_1,CF_1,CS_1),和其超速离心上清液抗原(CW_2,CF_2,CS_2)以及其经葡聚糖凝胶柱(Sephadex G—150)层析提纯的抗原(CW_3,CF_3,CS_3)分别对人工感染的猪囊尾蚴、细颈囊尾蚴猪和不感染的对照组猪,以间接血球凝集试验(IHA)进行定期的检测。结果表明,CW_2,CW_3,CF_2和 CS_2抗原的敏感性较高。进而用此4种抗原对自然感染的猪囊尾蚴猪进行了扩大诊断试验。试验结果:CF_2的敏感性高于其它抗原,但特异性较差,其检出率为76.87%,假阳性率为16.07%;而 CW_3抗原的敏感性虽较 CF_2抗原差,但特并性较强,检出率为64.88%,假阳性率为2.5%。两种抗原的重复性均良好。

IHA和ELISA试剂盒在血吸虫病临床检验中特异性的评价

目的评价间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种试剂盒在血吸虫病临床诊断中价值。方法采集非血吸虫病流行区的肝吸虫病人、肺吸虫病人、姜片虫病人、正常人群和乙肝病人血清,按照单盲试验的原则进行IHA和ELISA检测,对比分析两法特异性。结果 IHA和ELISA两种试剂盒,检测567份健康人员(献血员和中小学生)的特异性分别为97.88%和98.41%,检测65份肺吸虫病人血清的交叉阳性率为21.54%和18.46%.检测52份肝吸虫病人血清的交叉阳性率为5.77%和3.85%,检测56份姜片虫病人血清的交叉阳性率为3.57%和5.36%,检测195份乙肝病人假阳性率分别为2.56%和6.67%;两种试剂盒在检测其它三种吸虫病人的交叉反应均无显著意义(χ~2=0.19～0.21,P=0.661 0～0.646 7),但两法与肺血吸虫交叉反应均较高(χ~2=8.76～11.87,P=0.000 6～0.0031),而与肝吸虫和姜片虫交叉略高于正常人群(χ~2=2.33～4.13,P=0.126 6～0.0420)。IHA试剂盒在检测乙肝病人和健康正常人群的阳性率无显著差异(χ~2=0.04,P=0.841 1),ELISA试剂盒在检测乙肝病人的阳性率显著高于健康正常人群(χ~2=7.90,P=0.0050),其阳性率是健康正常人群的4.20倍。结论在血吸虫病现场筛查和医院门诊检查血吸虫病时.IHA试剂盒优于ELISA试剂盒。

间接血凝试验(IHA)诊断猪细颈囊尾蚴病的研究

作者将IHA用于诊断猪细颈囊尾蚴病,并在某些环节进行了改进,筛选出较为理想的浓缩提纯囊液抗原。检测147头份阳性猪血清,符合率为95.2％,检测53头份阴性猪血清,符合率为91％。试验表明,用IHA诊断猪细颈囊尾蚴病具有特异性,并有敏感、准确及快速的优点,为早期诊断猪细颈囊尾蚴病提供了一种新的手段。

血吸虫病不同流行程度地区IHA与Kato-Katz法检出率的相关性研究

目的了解不同流行程度疫区IHA和Kato-Katz法血吸虫感染检出率之间在的相关性。方法随机选择湖沼型的高度流行村(感染率>10%)、中度流行村(感染率5%～10%之间)、低度流行村(感染率1～5%之间)各2个自然村,每村整群抽样300～500人,在感染季节后,对每人同时采用Kato-Katz法和IHA法检测。结果在受检的1831人中Kato阳性率16.66%、IHA阳性率28.18%、双阳性率6.28%。结论IHA的阳性率与血吸虫卵粪便检出率不相关,而IHA的阳性预测值与其成正相关关系,即随着地区疫情程度的加重,IHA法的筛查阳性率也随之升高。

副猪格拉瑟菌的荚膜分型方法及原理研究进展

副猪格拉瑟菌(GPS)是猪的重要病原菌之一,自1910年被确认为猪格拉瑟病的病原以来,血清型鉴定是GPS研究领域长期以来的“卡脖子”环节。1992年,基于GPS热稳定抗原的凝胶免疫扩散试验(GID)分型方法首次将GPS分为1-15型,但有约25%的菌株不可分型,当时对于其分型抗原的成分也不明确。2003年,基于GPS的“盐水提取物”抗原建立了GPS的间接血凝试验(IHA)分型方法,其敏感性和分型率均高于GID,但仍有约15%的菌株不可分型。IHA和GID方法的分型结果基本一致,因此能够确定两者的分型抗原是基于相同的GPS表面多糖成分,但仍不能确定是荚膜多糖,或是LPS,甚或是其他多糖物质。2013年,1-15型GPS荚膜多糖的合成基因簇得到成功解析,证实其血清型抗原形成的本质是荚膜多糖。2015年,Howell等基于GPS荚膜的特异性靶基因设计引物,建立了GPS的PCR分型方法(H-PCR),但不能对血清5型和12型进行鉴别;2017年,Jia等基于GPS荚膜的特异性靶基因也建立了一套PCR分型方法(J-PCR),能对血清5型和12型进行了鉴别。两种PCR分型方法配合使用可对几乎所有GPS菌株分型,并从分子生物学基础上验证了其与GID和IHA方法的一致性,最终确认三种分型方法的抗原基础均为GPS荚膜。PCR分型方法具有操作简单、速度快、成本低等优点,成功解决了GID和IHA血清分型方法中的诸多问题,得到了广泛应用。本文系统回顾了GPS GID、IHA和PCR分型方法的建立与应用历史,及其相同抗原基础的发现历程,以期为GPS三种分型方法的免疫学物质基础及原理提供系统的理论知识,为副猪格拉瑟菌病防控技术的研发提供新思路。

血凝试验和反向间接血凝试验定量检测PCV2 Cap抗原的研究

为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血凝效价(RIHA效价)。结果显示,用猪、鸡、绵羊红细胞在不同稀释液条件下测得的同一批次PCV2Cap抗原凝集效价为3log2~9log2,说明PCV2Cap抗原可凝集猪、鸡、绵羊红细胞,但红细胞不同、稀释液不同,测得的PCV2Cap抗原凝集效价也不同。使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,测得的PCV2Cap抗原RIHA效价为14log2,且纯化后和未纯化的PCV2Cap抗原的RIHA效价均与ELISA定量检测结果有平行关系;空杆状病毒、CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、TCEV的RIHA效价均小于1log2。说明反向间接血凝方法可定量检测重组杆状病毒表达的PCV2Cap抗原,该方法敏感、特异,适用于疫苗生产中的PCV2Cap抗原的定量检测。

副猪嗜血杆菌抗体间接血凝检测方法的建立及应用

将副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清型4、5型分离菌株经超声波破碎处理后的产物致敏醛化红细胞,建立了检测HPS抗体的间接血凝试验方法。最适反应条件为绵羊红细胞30℃醛化5 h,4、5型菌株浓缩抗原以1∶8稀释致敏红细胞。免疫猪2周后检出率达89%。对15种HPS血清型阳性血清进行检测,结果均为阳性;对猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪链球菌、猪肺疫巴氏杆菌、Ⅰ相支气管败血波氏杆菌及胸膜肺炎放线杆菌阳性血清进行检测,结果均为阴性。敏感性为琼脂扩散试验的16倍。对1 665份猪血清进行检测,阳性率为47.1%。结果表明,该方法敏感性较高,特异性强,重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及副猪嗜血杆菌的流行病学调查。

副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明，两种检测方法的特异性良好，但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍，二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79．7％、55．2％和65．3％。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清，IHA和ELISA的阳性率分别为40％和59％。结果证实，这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。

猪弓形体病的血清学调查

采用间接血凝试验(IHA)对广东省部分地区猪场送检的269份血清进行猪弓形体病的血清学检测,结果表明有61份血清阳性,平均阳性率为22.7%,最高阳性率为71.4%,该地区猪场有猪弓形体病感染。

检测日本血吸虫抗体标准化间接血凝试剂盒的研制

目的研制检测日本血吸虫抗体(IHA)的标准化间接血凝试剂盒。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,致敏人"O"型血红细胞;按医学决定水平确定免疫学质量控制标准及参考,优选原材料质量,规范生产工艺,研究制定反应体系的标准化,生产IHA试剂盒并进行鉴定。结果用生产的IHA试剂盒检测50例急性血吸虫病人血清全部阳性,检测201份慢性血吸虫病患者血清,193份阳性,敏感性96.0%;200份健康人血清均为阴性,特异性100%;肝吸虫、姜片虫、钩虫及乙肝患者血清均为阴性,肺吸虫病的交叉反应率为19.4%(6/31)。IHA试剂盒批内变异和批间变异小,有效诊断率为97.9%。同一批试剂盒在室温、4℃条件下保存3年未见效价明显改变。结论研制的IHA试剂盒具有较高的特异性和敏感性,可标准化生产。该试剂盒具有操作方便、快速、结果判断容易,不需要特殊的仪器设备,价格低廉等优点,可广泛用于现场查病。

我国一些地区羊衣原体血清流行病学调查分析

羊衣原体是由专性细胞内寄生的流产嗜衣原体引起的一种人兽共患传染病,危害严重。为了解近年我国一些地区羊衣原体的流行情况,特以间接血凝试验(IHA)对采自全国8个省(区)的羊血清样本进行检测,阳性率达46.09%(342/742)。其中湖北省、安徽省、山东省、新疆省、吉林省、四川省、宁夏省和甘肃省分别为60%(12/20)、42.86%(51/119)、52.75%(48/91)、40.13%(122/304)、51.91%(68/131)、30.56%(11/36)、67.74%(21/31)和90%(9/10),显示羊衣原体在我国流行严重。与以往资料相比较,感染率在全国呈逐年增加趋势。绵羊、山羊的抗体阳性率分别为47.27%(268/576)和42.28%(74/175),表明前者感染率要高于后者。