昆虫细胞表达兔出血症VP60蛋白间接ELISA方法建立及评价

采用Bac-to-Bac系统表达的兔出血症病毒（RHDV）结构蛋白VP60作为包被抗原,建立抗体检测间接ELISA方法,并对方法性能进行测定。试验以整合有VP60基因的重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,感染细胞经裂解、离心初步纯化,作为包被抗原建立了检测RHD抗体的间接ELISA方法。经过对反应条件和试剂的优化选择,初步组装成间接ELISA试剂盒,并对其整体性能进行了评价。结果表明,含重组VP60蛋白的Sf9细胞裂解液最适包被稀释度为1：2000,换算为纯化VP60蛋白含量约为1.7μg·mL^-1;待检血清最适稀释度为1：100;羊抗兔IgGHRP标记抗体最适使用浓度为1：30000。初步组装的ELISA试剂盒检测RHD阴性血清无假阳性反应,与其他常见兔病阳性血清无交叉反应,特异性良好;敏感性高于RHDV全病毒间接ELISA和血凝抑制试验,低于进口间接ELISA试剂盒;试剂盒批内和批间变异率在10%以内。37℃加速破坏试验和4℃保存期试验结果表明试剂盒保存期可以稳定在6个月。该方法可应用于兔出血症抗体水平监测及实验兔等级检测中。

用抗人IgM(μ链)单克隆抗体早期诊断风疹病毒感染

An indirect ELISA by using monoclonal antibody (McAb) against hutnan IgM (μ chain)as the antibody labeled with horseradish peroxidase (second antibody) is used in detecion Rubela virus - specific IgM for early diagnosis of Rubella virus infection. Through the detection and verifition of a large number of sera from normal population, the population closely contacted with Rubella virus and IgM - positive sera samples of Measles virus, cycoegaforirm and Toxplasma Gondii, it is indicated that this method is specific, seusiuive, simple, rapid and no cross - reaction with the positive sera of the pathogens menticned above, It can be used for early diagnosis of Rubella virus infection and epidemiological survey.

消化系统肿瘤新标志抗survivin抗体的临床应用

目的:建立生存素(survivin)抗体的检测方法,并进行临床标本检测.方法:用镍离子亲和层析纯化的survivin融合蛋白包被酶标板,建立基于重组融合蛋白的抗survivin抗体检测方法,并对434份血清标本进行检测,其中包括204例消化系统肿瘤,186例癌前病变和44例正常对照.结果:在204例消化系统肿瘤中,甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的阳性率分别为14.2%和16.7%,抗survivin抗体阳性率为30.9%,本方法的特异度为93.6%;在肠癌中CEA阳性率为11.1%(6/54),抗survivin抗体阳性率为44.4%(24/54,P<0.05);在胃癌中CEA阳性率为20%,抗survivin抗体阳性率为33.3%(P>0.05);在食管癌中,抗survivin抗体阳性率高达40%,CEA阳性率仅为6.7%(P<0.05).在186例癌前病变中,抗survivin抗体阳性率31.7%,AFP和CEA阳性率分别为10.8%和16.7%;在消化性溃疡患者中,抗survivin抗体和CEA阳性率均为33.3%;在直肠息肉中抗survivin抗体阳性率33.3%,CEA的阳性率仅为5.6%(P<0.05);在慢性结肠炎患者,抗survivin抗体阳性率40%,CEA阳性率20%(P<0.05).结论:建立的抗survivin抗体检测方法和对消化系统肿瘤抗survivin抗体检测的基础资料,可为抗survivin抗体作为消化系统肿瘤新标志分子研究奠定基础.

魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及其间接ELISA方法的建立

对GenBank上发表的魏氏梭菌α毒素基因的氨基酸序列进行了二级结构、疏水性、抗原决定簇、跨膜区以及抗原性分析,在此基础上,对α毒素基因130～966nt位的837bp长的适合原核表达的区域进行PCR扩增、克隆、核酸序列测定和生物信息学分析。同时,建立了检测魏氏梭菌α毒素抗体的间接ELISA方法。

重组牛朊蛋白特异性抗体的制备及鉴定

以原核表达后经纯化的重组牛朊蛋白为免疫原,免疫prnp-/-基因敲除鼠。4次免疫后,利用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。间接ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞,采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行3次克隆,用间接ELISA筛选出了稳定分泌针对牛重组朊蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为5C9D6。Western blotting鉴定结果表明,5C9D6均能特异性识别重组牛朊蛋白、健康牛、BALB/c脑组织匀浆中的PrPc,不识别prnp-/-基因敲除鼠脑组织匀浆液。本试验制备了可与牛、BALB/c鼠反应的单克隆抗体,同时也为牛海绵状脑病的研究及其诊断方法的建立奠定了基础。