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重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中的表达
被引量:
1
1
作者
袁辉
刘笑迪
+3 位作者
谭毅
林绍强
杨树林
李校
《温州医学院学报》
CAS
2007年第4期303-308,共6页
目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平。方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从...
目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平。方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度。结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%~28%。LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3mmol/L、氨苄青霉素添加量50μg/ml时,表达效率提高了25%。结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义。
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关键词
重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体
质粒稳定性
大肠杆菌
诱导
酶切图谱
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职称材料
题名
重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中的表达
被引量:
1
1
作者
袁辉
刘笑迪
谭毅
林绍强
杨树林
李校
机构
温州医学院生物与天然药物研究院
吉林农业大学生物工程技术研究院
南京理工大学生物工程研究所
出处
《温州医学院学报》
CAS
2007年第4期303-308,共6页
基金
国家十五重大生物医药专题滚动立项项目"重组人成纤维细胞生长因子改构体新药研究"(2004AA2Z3C60)
2005年度温州市科技局"重组生长因子的中试研究"立项资助项目(Y2005B025)
温州医学院引进人才启动基金资助项目(2005-170)。
文摘
目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平。方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度。结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%~28%。LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3mmol/L、氨苄青霉素添加量50μg/ml时,表达效率提高了25%。结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义。
关键词
重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体
质粒稳定性
大肠杆菌
诱导
酶切图谱
Keywords
recombinant human aFGF mutant
plasmid stability
Escherichia coli
induction
,
restriction digestion graph
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中的表达
袁辉
刘笑迪
谭毅
林绍强
杨树林
李校
《温州医学院学报》
CAS
2007
1
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