瓦尼木层孔菌发酵液提取物对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响

桑黄(Phellinus spp.)是一种珍贵的多年生大型药用真菌,具有独特的抗癌功效,是目前国际公认的生物治癌药剂中效率最高的一种药用真菌。该文从区域特种食(药)用真菌的开发利用角度出发,以采自黑龙江完达山的杨树桑黄即瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)为研究对象,采用MTT方法比较了水提和酯提方法菌丝发酵液4个提取物对人结肠癌Lo Vo细胞增殖的抑制效果,计算高效提取物最佳作用浓度和IC50,绘制加药时间与抑制Lo Vo细胞增殖效果的曲线。研究结果表明,不同处理方法获得的提取物对人结肠癌Lo Vo细胞增殖的抑制效果差异显著,其中酯提效果好于水提,在1 000μg·m L-1浓度条件下,加药48 h后,正丁醇提取样品对人结肠癌Lo Vo细胞抑制率最高为86.8%,乙酸乙酯提取样品抑制率为87.5%,超声波提取样品对人结肠癌Lo Vo细胞抑制率为58.3%,直接水提效果最差,只有57.8%;桑黄菌丝体发酵液乙酸乙酯提取物IC50为53.459μg·m L-1,在此浓度下,加药后96 h抑制率达到90%以上,加药120 h抑制率达95%,抑制率也随着加药时间的增加而提高。这为探求瓦尼木层孔菌资源价值的科学评价与有效开发奠定了基础,具有重要的学术和现实意义。

葛根总黄酮对不同急性髓系白血病细胞株增殖抑制的影响

为了探讨葛根总黄酮对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的作用及其可能的机制,观察不同浓度葛根总黄酮体外对4种AML细胞株Kasumi-1、HL-60、NB4和U937的增殖抑制影响和细胞周期的变化。应用MTT法检测细胞株细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果表明:一定浓度葛根总黄酮对4种AML细胞株增殖抑制作用差异显著,抑制强度依次为NB4细胞>Kasumi-1细胞>U937细胞>HL-60细胞;葛根总黄酮不同程度地改变NB4、Kasumi-1、U937及HL-60细胞周期进程,使G1期细胞比例下降,S期细胞比例增高,出现亚二倍体峰,呈现浓度依赖性。结论:葛根总黄酮体外对不同AML细胞株具有选择性增殖抑制作用,以对NB4细胞株的影响最为显著。

柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞增殖的抑制作用

目的研究从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d对K562细胞生长的影响.方法分别用不同质量浓度的SSd作用于K562细胞株,于不同时间段分别计数其平均细胞数,并绘制相应生长曲线,计算平均抑制率.药物作用后24,36,48 h,计算分裂指数.结果用药后K562细胞的细胞数、分裂指数均下降,下降幅度与剂量呈正相关.结论 SSd能抑制K562细胞增殖,这种抑制作用呈时间和剂量依赖关系(P<0.05).

胃癌患者免疫抑制因子和淋巴细胞亚群变化的临床实验研究

本文通过T细胞增殖抑制实验发现胃癌患者血清存在免疫抑制因子,可抑制正常人或胃癌患者PBMC对PHA的增殖效应;首次发现不同癌瘤来源的抑制因子有非特异性交叉抑制作用。实验表明胃癌血清抑制因子可诱导/活化正常人Ts(CD_8^+)细胞,使其发挥免疫抑制效应。观察到术后1年以上恢复期患者血清免疫抑制效应明显下降(P<0.001)。本文同时检测了胃癌、胃或十二指肠溃疡患者及正常人群的淋巴细胞亚群,证明进展期胃癌CD_4^+下降,CD_8^+升高明显,CD_4^+/CD_8^+比值显著下降(P<0.001);胃癌术后1月内淋巴细胞亚群与术前无明显差异,而术后半年以上恢复期患者该三项指标趋于正常。

青果多糖组分对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用研究

目的探讨青果多糖不同组分对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用。方法以乙醇除脂、水提、醇沉法制备青果粗多糖,经DEAE-琼脂糖凝胶FF离子交换色谱分离,得CFW(蒸馏水溶液洗脱部位)、CF1(0. 5 mol/L氯化钠溶液洗脱部位)、CF2(1. 0 mol/L氯化钠溶液洗脱部位)和CF3(2. 0 mol/L氯化钠溶液洗脱部位),测定总多糖和总蛋白含量;将不同浓度的上述组分作用于人宫颈癌Hela细胞,以细胞培养液作空白对照,采用四氮唑盐(MTT)法检测Hela细胞增殖程度。结果 4组分总糖含量均大于70%,总蛋白含量均大于0. 87%;与空白对照比较,62. 5,125,250,500,1 000μg/m L CFW,500,1 000μg/m L CF1,1 000μg/m L CF2和CF3的吸光度值显著降低(P <0. 05或P <0. 01)。结论青果CFW组分可显著抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖。

蝙蝠葛碱对大鼠血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究蝙蝠葛碱(Dau)对球囊损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及其对细胞周期调控因子p27蛋白表达的影响。方法将25只♂SD大鼠随机均分为假手术组、单纯损伤组和Dau低、中、高剂量组,后4组行球囊内皮剥脱术,Dau组于术前3d开始,igDau25、50、100mg·kg-1·d-1,假手术组和单纯损伤组同期ig等量生理盐水。术后第14天处死所有大鼠,取胸主动脉进行HE染色,光镜下观察内膜损伤后形态学的变化,并进行图像分析。采用免疫组织化学技术检测球囊内皮损伤后血管平滑肌细胞p27蛋白表达的变化。结果球囊损伤后血管壁增生,Dau可剂量依赖性地减少新生内膜面积,增加管腔面积,降低球囊损伤后内膜及中膜厚度(P<0.05),抑制平滑肌细胞的增殖,促进p27蛋白的表达。结论p27参与了球囊损伤内皮后血管平滑肌细胞增殖的调节。Dau对损伤内皮所致平滑肌的增殖具有抑制作用,可防止血管再狭窄,其机理可能是通过调节p27的表达实现的。

儿茶素EGCG对口腔癌细胞体外增殖的抑制作用及相关机制研究

目的:对儿茶素EGCG抑制口腔癌细胞体外增殖的作用及相关机制进行分析探讨。方法:将人CAL-27、SCC-25以及KB细胞株进行体外培养,应用MTT法检测EGCG对细胞增殖的影响,人口腔上皮癌移植瘤模型的建立选取裸鼠以KB细胞接种,将选取的裸鼠随机分两组,即癌移植瘤模型不做任何处理的对照组和癌移植瘤模型作EGCG处理的实验组,两组裸鼠均连续给药4周,测量移植瘤体积及质量,测量EGCG对裸鼠肿瘤抑制率。结果:不同浓度的EGCG对体外培养的人CAL-27、SCC-25以及KB细胞株均有抑制作用,且EGCG浓度越高,对CAL-27、SCC-25以及KB细胞株的抑制作用越强。实验组癌移植瘤体积(1.48±0.32)cm3明显小于对照组癌移植瘤体积(5.76±0.46)cm3,瘤体积抑制率为71.82%;实验组癌移植瘤重(0.76±0.21)g明显小于对照组癌移植瘤重(2.99±0.24)g,质量抑制率为74.58%;对比两组癌移植瘤体积和质量有统计学差异(P<0.05)。结论:儿茶素EGCG可以抑制不同类型口腔癌细胞的增殖,能够提高口腔癌患者的生活质量及生存周期,动物实验也表明EGCG能明显抑制人类口腔上皮癌移植瘤细胞的增长。

UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响

目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPK)信号通路前后的表达情况。结果:MTT结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强。RT-PCR及West-ern blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P<0.05)。结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游。

宣肺汤对小鼠B16黑素瘤细胞代谢的影响

目的:观察宣肺汤对B16黑素瘤细胞的作用,探讨其美白作用的机理及安全性。方法:测定宣肺汤对体外培养的B16黑素瘤细胞细胞活力、酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响,并与熊果苷作对照比较。结果:25、50、100μg/ml宣肺汤对黑素瘤细胞的细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的抑制作用,并呈剂量依赖性,且优于同浓度熊果苷,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:宣肺汤有较强的抑制黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素生成的作用,同时对黑素瘤细胞的细胞毒性较低,是较为安全有效的美白药物。

大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应(英文)

IL 6受体 (IL 6R) β链是分子量为 130kD的膜结合糖蛋白 (gp130 ) ,它是介导IL 6生物效应的信号转导子。我们的实验已经证实了重组人IL 6 (rhIL 6 )可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2 ,rhIL 6与R2细胞表达的hIL 6R结合并与大鼠 gp130缔合而转导IL 6的信号 ,产生其生物效应。本文在体外液体培养中试验观察到 ,大鼠 gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后 ,对rhIL 6生物效应产生明显的影响。我们的研究结果表明 ,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL 6对R2细胞的增殖抑制效应 ,在最适的终浓度 ,其阻断率可达 (45± 7) %。

禽流感病毒NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1的凋亡

目的研究禽流感病毒NS1A蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响。方法将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin VFITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;对转染细胞的表达产物进行Western blot分析。结果NS1A蛋白能抑制人肺癌细胞SPC-A1增殖且呈时间依赖性。随着作用时间延长,重组质粒转染组细胞凋亡率可达38.17%,细胞周期中G0/G1比例升高,G1期阻滞。Western blot分析显示,重组质粒转染组细胞在相对分子质量约30000处可见特异性反应条带,与NS1A蛋白产物大小相符。结论禽流感病毒NS1A蛋白能够抑制SPC-A1细胞增殖,并诱导SPC-A1细胞凋亡。

外源性三磷酸腺苷对人胃腺癌SGC-7901细胞的生物学效应

本文报道外源性三磷酸腺苷(ATP)对人胃腺癌SGC-7901细胞系增殖的抑制效应。在SGC-7901细胞的培养基质内加入ATP后,细胞生长明显受阻抑,4天以后,抑制率可达80%以上;癌细胞质膜上的3′,5′环腺苷酸磷酸二酯酶(cAMP-PDEase)活性明显下降,而细胞内的cAMP和纤维粘连蛋白的免疫荧光强度却明显增强。癌细胞多呈梭形,微绒毛减少,表面较光滑,呈现癌细胞向正常方向逆转的表型特征。本文还就ATP作用的机理进行了讨论。

氧化苦参碱对结肠癌LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4 mRNA表达的影响

目的:探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OM)抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡的分子作用机制。方法:采用流式细胞仪检测LoVo细胞凋亡率以及细胞周期分布;采用荧光定量PCR法检测0.25,0.5 g.L-1 OM对LoVo细胞增殖相关基因c-myc,蛋白酶调解因子9(PSMD9),CDK4的基因表达的影响。结果:0.5 g.L-1以下浓度的OM作用结肠癌LoVo细胞48 h,对细胞凋亡无明显影响。0.25 g.L-1 OM作用48 h时可明显抑制人结肠癌LoVo细胞c-myc基因表达(P<0.05)。0.5g.L-1 OM作用48 h时可明显抑制LoVo细胞c-myc,CDK4的基因表达(P<0.01,P<0.01,)。药物作用时间为96 h时,0.5g.L-1 OM可明显抑制c-myc,PSMD9,CDK4基因表达(P<0.05,或P<0.01)。结论:较低剂量OM显著抑制人结肠癌LoVo细胞增殖的作用机制,可能与下调LoVo细胞c-myc,PSMD9,CDK4表达有关。

姜黄素与5-FU联用对人结肠癌LoVo细胞生长抑制与凋亡诱导作用研究

目的体外观察5-氟尿嘧啶(5-FU)与姜黄素联用对人结肠癌LoVo细胞的生长抑制和凋亡诱导的作用。方法采用MTT方法、流式细胞检测技术和荧光染料AO/EB双染法观察不同浓度姜黄素和5-氟尿嘧啶单独或联合应用对Lovo细胞生长和凋亡的影响。结果 MTT法检测结果显示,各药物组LoVo细胞的生长均受到了显著抑制,各剂量5-FU以及分别联合姜黄素对LoVo细胞的抑制率呈剂量-时间依赖关系;FCM检测结果表明,姜黄素联合低剂量5-FU组的早期、晚期凋亡率显著高于中剂量和高剂量5-FU单用组,姜黄素联合中剂量5-FU组的细胞凋亡率最高;荧光显微镜观察发现各实验组细胞同对照组相比呈现典型凋亡形态,且联合用药组细胞凋亡率最高。结论姜黄素与低剂量5-FU联用对体外培养的结肠癌LoVo细胞的的生长抑制和促凋亡作用能够达到高剂量5-FU单用的效果。

十八烯酸对人肾癌A498细胞毒性作用的实验研究

目的探讨十八烯酸对人肾癌细胞A498细胞的毒性作用。方法从甘肃地产猫儿眼(Euphorbia kansui L)提取并制备十八烯酸。给予人A498细胞0.3、0.6、3.0 mg/L十八烯酸培养,分别采用MTT法、克隆形成和流式细胞技术对十八烯酸对人A498细胞的毒性作用进行检测。结果给予人A498细胞0.3、0.6、3.0 mg/L十八烯酸,细胞增殖抑制率随给药浓度增加而增加(分别为53.20%、66.26%、87.42%),半数抑制浓度(IC50)为0.29 mg/L;克隆形成抑制率随给药浓度增加而增加(分别为46.43%、61.31%、71.42%),IC50为0.31 mg/L;人A498细胞凋亡率别为11.16%、17.31%、26.22%。结论十八烯酸对人A498细胞具有明显的增殖抑制作用,能促进人A498细胞凋亡。

紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用研究

目的:研究紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用。方法:以紫苏醇溶液为对照,采用MTT比色法检测不同浓度(0、50、100、200、400、800μmol·L-1)紫苏醇亚微乳剂处理不同时间(24、48、72h)后对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率及半数抑制量(IC50)值,并设立空白组进行比较。结果:与空白组比较,试验组与对照组在作用24h、浓度高于400μmol·L-1,48h、浓度高于100μmol·L-1,72h、浓度高于50μmol·L-1时均表现出明显抑制作用(P<0.05);后2组抑制作用比较无显著性差异;试验组与对照组对MCF-7细胞株的IC50值分别为353.9、377.9μmol·L-1。结论:紫苏醇制成亚微乳剂后与其溶液比较,对人乳腺癌细胞MCF-7具有相同的抑制作用。

改进的甲基化特异PCR法及在抑癌基因p16检测中的应用

目的 介绍一种 Ｃｐ Ｇ 岛甲基化分析方法，即甲基化特异的 Ｐ Ｃ Ｒ（ ｍ ｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ， Ｍ Ｓ Ｐ） 法以及对该法的改进。方法 用亚硫酸氢盐修饰被测 Ｄ Ｎ Ａ 后，再进行甲基化与非甲基化特异的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增，并对 Ｍ Ｓ Ｐ 法进行改进。应用该法分析了颌面部鳞癌中ｐ１６ 基因５′ Ｃｐ Ｇ 岛甲基化状态。结果 发现一些颌面部鳞癌组织中有ｐ１６ 基因５′ Ｃｐ Ｇ 岛的甲基化。采用加热变性代替强碱变性，用透析法脱盐，以及用限制酶 Ｔａｑ Ⅰ取代 Ｂｓｔ Ｕ Ｉ来判断甲基化与非甲基化的扩增片段等均取得了良好的效果。结论 Ｍ Ｓ Ｐ 法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法，改进后该方法更加简便可行。

血小板反应蛋白1活性片段VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞增生及迁移的影响

目的 观察血小板反应蛋白1（TSP-1）活性片段VR-10合成多肽对恒河猴脉络膜视网膜内皮细胞（RF/6A）增生、迁移的影响.方法 培养RF/6A细胞并将其分为对照组,0.1、1.0、10.0 μg/mlVR-10合成多肽组及1.0 μg/ml TSP-1全肽组.细胞培养后6、12、24、48 h,采用噻唑蓝（MTT）法检测各组RF/6A细胞存活率.细胞培养后24 h,Transwell小室实验检测各组RF/6A细胞迁移抑制率.采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测10.0 μg/mlVR-10合成多肽对细胞中半胱天冬酶（caspase）-3、凋亡相关因子（FAS）蛋白表达的影响.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测10.0 μg/ml VR-10合成多肽对RF/6A细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、FAS配体（FASL） mRNA表达的影响.结果 MTT法检测结果显示,随作用时间延长,干预组RF/6A细胞存活率越低;随VR-10合成多肽浓度增加,RF/6A细胞存活率也越低.以作用48 h时10.0 μg/ml VR-10合成多肽组RF/6A细胞存活率最低,为78％.细胞培养24 h后,10.0 μg/ml VR-10合成多肽组RF/6A细胞迁移抑制率最高,1.0 μg/ml TSP-1全肽组次之.与对照组比较,不同浓度VR-10合成多肽组及1.0 μg/ml TSP-1全肽组RF/6A细胞迁移抑制率均明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测结果显示,在相对分子质量32＆#215;103、20＆#215;103处可见caspase-3蛋白条带,在相对分子质量48＆#215;103处可见FAS蛋白条带.10.0 μg/ml VR-10合成多肽组与对照组RF/6A细胞中caspase-3（t=-66.240、138.813）、FAS（t=163.114）蛋白表达比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,10.0 μg/ml VR-10合成多肽组bcl-2 mRNA表达明显降低,差异有统计学意义（t=-67.419,P=0.000）;FASL mRNA表达明显增强,差异也有统计学意义（t=39.365,P=0.001）.结论 TSP-1活性片段VR-10合成多肽能抑制RF/6A细胞增生、迁移.

人参皂苷Rh2及细胞因子诱导的杀伤细胞对人胃癌细胞株SGC-7901的体外增殖抑制作用

目的研究人参皂苷Rh2、细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞及二者联合对胃癌细胞株SGC-7901的体外增殖抑制作用。方法本试验采用MTT法检测30、35、40及45μg/ml人参皂苷Rh2以及效靶比分别为5:1、10:1、20:1和40:1的CIK细胞,35μg/ml的人参皂苷Rh2联合效靶比20:1的CIK细胞,分别作用于SGC-7901细胞24 h和48 h的增殖抑制作用。结果不同剂量的人参皂苷Rh2作用于SGC-7901细胞,在相同作用时间内,抑制率随着剂量的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.01);随给药时间的延长,除45μg/ml组外,其他各剂量组作用48 h的抑制率均较24 h有显著上升,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。不同效靶比的CIK细胞作用于SGC-7901细胞后,在相同作用时间内,抑制率随着效靶比的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.01);相同效靶比条件下,抑制率随着作用时间的延长而增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。35μg/ml的人参皂苷Rh2联合20:1的CIK细胞对SGC-7901细胞的增殖抑制作用显著强于人参皂苷Rh2或CIK细胞单用,差异均具有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论人参皂苷Rh2及CIK细胞在体外对胃癌细胞株SGC-7901均具有一定增殖抑制作用,且在一定的条件下二者联合应用具有协同效果,较单用具有更强的抑制SGC-7901细胞增殖的作用。

大豆低聚肽对HepG2细胞增殖抑制作用的研究

目的研究大豆低聚肽(RQRK、HCGAPA)对HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响。方法借助电镜技术、MTS试验、Annexin-PI双染法和流式细胞术研究大豆低聚肽(RQRK、HCGAPA)与诱导HepG2细胞凋亡或抑制作用的关系。结果大豆低聚肽RQRK、HCGAPA可抑制HepG2细胞增殖,诱导其细胞凋亡,且两者联合使用比单独使用凋亡率更高。结论大豆低聚肽(RQRK、HCGAPA)作用于HepG2细胞后,细胞增殖受到抑制。