鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对增殖细胞核抗原表达的影响

目的研究鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制探讨。方法建立H22荷瘤小鼠动物模型,随机分成4组:鳖甲煎丸高剂量组、鳖甲煎丸低剂量组、阴性对照组、环磷酰胺组。连续用药15d。第15天处死小鼠,计算胸腺指数、脾指数;剥离瘤块称重并计算抑瘤率;用免疫组织化学方法检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织的增殖细胞核抗原的表达强度。结果鳖甲煎丸有较好的抑瘤作用;鳖甲煎丸对H22荷瘤小鼠肿瘤组织的增殖细胞核抗原有显著的抑制作用。结论鳖甲煎丸抑瘤作用机制之一可能是通过抑制肿瘤组织的增殖细胞核抗原来实现的。

白毛夏枯草提取液抗肝癌体内外实验研究

目的 :观察白毛夏枯草提取物对肝癌细胞株HepG2的体外增殖抑制作用及对小鼠移植性肝癌H22实体瘤的体内抑制作用的影响。方法 (:1)肝癌细胞增殖抑制观察:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物,观察不同浓度的白毛夏枯草水提液对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用;(2)小鼠腹水瘤抑制作用观察:小鼠接种H22腹水瘤后,造成移植性小鼠肝癌模型。随机分为阴性对照组(NS组)、阳性对照组(5-FU组)、白毛夏枯草水提物大剂量组、白毛夏枯草水提物小剂量组,分别观察荷瘤小鼠的抑瘤率。结果 (:1)白毛夏枯草水提物对HepG2细胞有较强的抑制增殖作用,并呈一定的浓度依赖性。(2)白毛夏枯草水提物大剂量组、小剂量组对小鼠腹水瘤抑制率分别为37.84%、34.82%。结论 :白毛夏枯草对肝癌细胞和小鼠腹水瘤有较好的抑制作用。

十全大补汤总多糖的体外抗肿瘤作用

目的探讨十全大补汤总多糖(以下简称总多糖)的体外抗肿瘤作用,为其临床应用及抗肿瘤药物的研发提供依据。方法以200、100、50μg/ml浓度总多糖干预体外培养的人肺癌A549细胞株、人肝癌Bel-7402细胞株、人结肠癌HCT-8细胞株和人宫颈癌Hela细胞株。作用24、48、72 h时采用MTT法测定细胞增殖抑制率(IR)。结果 200μg/ml总多糖作用48 h时A549细胞的IR最高;总多糖对另3种细胞的作用均为随浓度及作用时间延长IR逐渐升高,以200μg/ml、作用72 h时IR最高,呈剂量及时间依赖性。结论总多糖可在体外抑制肿瘤细胞生长;其有望作为抗肿瘤药物用于临床。

芝麻素对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的观察芝麻提取物芝麻素对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨其作用机制。方法将移植H22肝癌瘤株的64只昆明种小鼠随机分成4组:模型组、环磷酰胺组、芝麻素高浓度组及芝麻素低浓度组,连续用药10d。比较各组抑瘤率、胸腺指数、脾指数及增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平。结果低浓度的芝麻素在体内对H22肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,使动物的免疫器官重量增加,并对肿瘤组织PCNA的表达有显著的抑制作用。结论芝麻素抑制H22细胞的机制可能是通过促进宿主免疫功能、抑制肿瘤细胞内PCNA表达来实现的。

重组犊牛前胸腺素-α对小鼠脾细胞增殖的影响

目的为评价重组犊牛前胸腺素α(prothymosinα,ProTα)的活性。方法用MTT法检测了ProTα对BALB/c鼠脾细胞的增殖作用。结果与结论无论加或不加ConA,20μg·ml-1以上浓度药品组均能对脾细胞产生增殖作用,且随着浓度增加,增殖率呈上升趋势,至40μg·ml-1时,增殖率达到76.0%。当浓度低于20μg·ml-1时,重组ProTα无明显的增殖作用。重组ProT a与进口的阳性对照品增殖活性间没有显著差异,而且略高于后者,该项研究为今后药理药效研究及开发应用提供了有力的支撑。

DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原(PCNA)、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。

不同浓度补肾健脾方对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。

人巨细胞病毒特异性转移因子对小鼠脾细胞分化增殖的作用

①目的检测人巨细胞病毒特异性转移因子（ＨＣＭＶ－ＳＴＦ）对小鼠脾细胞分化增殖作用。②方法采用微量细胞培养法培养小鼠脾细胞，共分５组，分别加入１６４０培养液（空白对照），ＰＨＡ，ＨＣＭＶ－Ａｇ，ＨＣＭＶ－ＳＴＦ，ＨＣＭＶ－Ａｇ＋ＨＣＭＶ－ＳＴＦ．培养４８ｈ后加入氚－胸腺嘧啶（３Ｈ－ＴＤＲ），再培养２４ｈ，收集细胞，用液体闪烁计数器计数（ｃｐｍ），计算促进率。③结果ＨＣＭＶ－Ａｇ＋ＨＣＭＶ－ＳＴＦ组与ＨＣＭＶ－Ａｇ，ＨＣＭＶ－ＳＴＦ组比较具有明显的促进小鼠脾细胞分化增殖的作用（ｑ＝３．３５，４．７５，Ｐ＜０．０５）。④结论ＨＣＭＶ－ＳＴＦ具有相应抗原的依赖活性；同时也证明３Ｈ－ＴＤＲ掺入法检测小鼠脾细胞分化增殖效应，是特异性转移因子质控的一种较为理想的测试方法。

蜂毒肽对受照射小鼠脾细胞增殖的影响

研究目的:探索蜂毒肽对受照射小鼠的脾细胞转化率的影响。方法:照射前24小时对各实验组小鼠注射不同剂量蜂毒肽,照射后24小时取小鼠的脾细胞进行体外培养48小时,用MTT法测定各实验组小鼠脾细胞转化率。结果:在小鼠受照射前注射不同剂量的蜂毒肽均可提高小鼠脾细胞转化率,其中注射中等剂量蜂毒肽的小鼠脾细胞转化率比空白对照组提高了13.2%,高剂量组比空白对照组提高了17.5%。结论:蜂毒肽可以增强小鼠脾细胞的增殖能力,这可能是蜂毒肽抗辐射的作用机制之一。

血根碱对雄性小鼠的生殖毒性研究

研究血根碱对雄性小鼠的生殖毒性。采用MTS法检测血根碱对猪肾上皮细胞(PK-15)和猪睾九细胞(ST)的增殖抑制作用。将120只3周龄普通级ICR雄性小鼠随机分为5组:空白对照组(蒸馏水)、溶媒对照组(蒸馏水:丙二醇为2:1)、低剂量组(5mg/kg)、中剂量组(10mg/kg)和高剂量组(20mg/kg),血根碱用量为0.1 mL/10g,连续灌胃37d,并于开始灌胃后的第24、31和37天分别采集样品并检测。结果表明,微量的血根碱对猪肾上皮细胞(PK-15)和猪睾九细胞(ST)可产生显著的增殖抑制作用(对ST的MIC为0.25μmol/L,对PK-15的MIC为0.5μmol/L);在体试验结果显示,试验组小鼠各项指标与对照组无显著差异,说明血根碱对雄性小鼠无显著生殖毒性。

流行性出血热病毒特异性转移因子的研究

对流行性出血热病毒(EHFV)特异性转移因子(EHFV-TF)的制备、特性及在小鼠体内的活性作用进行了研究。其理化性状与普通 TF 非常相似,能激活淋巴细胞的 E 受体(激活率为65.54%),明显提高 Et-RFC 的形成率。E-HFV-TF 还具有特异性抗原依赖活性:①促进 BALB/C 小鼠和 NIH 裸鼠特异性抗体的产生;②促进 LACA 小鼠脾细胞对 EHFV 反应的特异性应答;③促进脾细胞在 EHVF 存在时对 PHA 诱导下的增殖反应(促时率为151.3%)。EHFV—TF可推迟动物感染 HEFV 后的发病期,延长病程和推迟死亡时间;减轻发病动物脑肺充血、出血、水肿现象和肝肾病理损害程度。结果表明 EHFV-TF 不仅具有提高细胞免疫的非特异活性,而且具有对 EHFV 抗原的依赖活性。本研究提示,E-HFV-TF 可用于 EHFV 感染病人的治疗。

叶下珠复方Ⅱ号对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用及机制

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝癌HepG_2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法建立BALB/C裸鼠肝癌HepG_2细胞皮下移植瘤模型,随机分为模型组,叶下珠复方Ⅱ号高、中、低剂量组(17.28,8.64,4.32 g·kg^(-1))和氟尿嘧啶(5-Fu)组(0.025 g·kg^(-1)),给药6周后处死裸鼠,剥离瘤组织称质量。体外观察叶下株复方Ⅱ号对HepG_2细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞凋亡的影响,观察药物作用后Wnt1和β-catenin基因mRNA表达的改变。结果叶下珠复方Ⅱ高、中、低剂量组对裸鼠HepG_2肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用明显,与模型组比较,肿瘤质量均明显减轻(P<0.01),但与5-Fu组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。叶下珠复方Ⅱ号体外在10 mg·mL^(-1)以上浓度能明显抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,呈明显的量-效关系和时-效关系;叶下珠复方Ⅱ号在2 mg·mL^(-1)以上浓度,对HepG_2细胞集落形成呈明显的抑制作用;叶下珠复方Ⅱ号以15,20 mg·mL^(-1)浓度作用HepG_2细胞48 h后,G0/G1期细胞比例明显降低,S期细胞比例显著增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01);叶下珠复方Ⅱ号在10,15,20 mg·mL^(-1)浓度,作用于HepG_2细胞48 h,细胞早期凋亡率和总凋亡率明显增加,与细胞对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组(20,10 mg·mL^(-1))作用于HepG_2细胞48 h后,Wnt1和β-catenin基因m RNA的表达量均明显低于细胞对照组(P<0.01,P<0.05)。结论叶下珠复方Ⅱ号对BALB/C裸鼠肝癌HepG_2细胞皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,作用机制与抑制Wnt1/β-catenin基因表达和信号通路活化,从而阻滞细胞周期、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡有关。

人胎肝提取物对动物淋巴细胞增殖反应和肿瘤细胞体外生长的抑制作用

将人胎肝脏经过超速离心和硫酸铵沉淀而得到部分纯化的人胎肝提取物(HFLE),能抑制C_(57)BL/6小鼠和Wistar大鼠脾和胸腺细胞的增殖反应;并能抑制二株小鼠肿瘤细胞的体外生长;但对人三株肿瘤细胞无抑制作用。此种抑制作用没有种的特异性。HFLE对脾细胞增殖反应的抑制作用不是由于它在细胞外与ConA结合或除去ConA的作用,而可能是HFLE与脾细胞共同孵育时培养液中的精氨酸被HFLE所含精氨酸酶耗尽之故。HFLE对L929细胞生长的抑制作用可在RPMI 1640培养液中加入适量的L—精氨酸而被解除。

CJ016对肺癌细胞增殖抑制作用的实验研究

目的考察CJ016对肺癌细胞增殖的抑制作用。方法采用MTT法检测CJ016对肺癌细胞(H292、H1975、H1299、H520、H460、HCC827)的半抑制率(IC50);建立H1975细胞裸鼠移植瘤模型,考察不同剂量CJ016(5、10、20mg/kg)尾静脉给药对移植瘤生长的影响,同时观察其毒性作用。结果CJ016对肺癌细胞生长有明显抑制作用,能有效抑制H1975荷瘤裸鼠肿瘤的生长,且呈现出一定的量效关系。在20mg/kg剂量时其抑瘤率达85.2%,优于阳性对照紫杉醇24mg/kg剂量组(75.5%),同时未见明显不良反应。结论CJ016对肺癌细胞生长有明显抑制作用,能有效抑制H1975细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长,且毒性小,安全性良好。

白藜芦醇降低缺氧诱导因子1α蛋白SUMO化抑制皮肤鳞状细胞癌新生血管形成

目的从蛋白质泛素/类泛素化修饰平衡角度探讨白藜芦醇抑制皮肤鳞状细胞癌新生血管形成的内在机制。方法以人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株为研究对象,分别给予培养基中加入50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇处理对数生长期A431细胞作为实验组,以不加白藜芦醇培养基处理为对照组。按照上述实验分组,培养48 h采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测各组细胞增殖活性;采用血管模拟形成实验检测白藜芦醇处理12 h对A431细胞血管拟态形成能力的影响;采用Western印迹检测白藜芦醇处理48 h各组细胞泛素(ubiquitin)、小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)相对表达水平。将24只8周龄BALB/c雄性去胸腺小鼠随机均分3组,于腹股沟皮下接种A431细胞,治疗组予1 mg/kg或2 mg/kg白藜芦醇腹腔注射给药,对照组注射相同体积的生理NaCl溶液,每3天注射1次,第21天处死小鼠,解剖肿瘤称重;采用免疫组化检测各组肿瘤组织中CD31的表达。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果对照组、50μmol/L组、100μmol/L组A431细胞增殖率差异有统计学意义(F=17.75,P=0.017),50μmol/L组、100μmol/L组低于对照组(66.53%±5.09%、35.88%±4.28%比100%,LSD-t=21.17、29.04,P=0.011、0.004);3组A431细胞血管管壁样细胞嵴的总长度差异有统计学意义(F=21.37,P=0.004),50μmol/L组、100μmol/L组低于对照组[(102.73±11.36)μm、(37.83±4.19)μm比(185.26±8.02)μm,均P<0.05];3组细胞泛素、SUMO1、HIF-1α、VEGFR相对表达差异均有统计学意义,50μmol/L组、100μmol/L组泛素相对表达均高于对照组(2.09±0.13、3.53±0.16比0.68±0.11,均P<0.05),SUMO1、HIF-1α、VEGFR的相对表达均低于对照组(SUMO1:1.87±0.13、1.02±0.11比3.10±0.11,HIF-1α:0.81±0.06、0.45±0.06比0.97±0.08,VEGFR:0.73±0.09、0.39±0.05比0.98±0.07,均P<0.05)。动物试验中,对照组、1 mg/kg组、2 mg/kg组小鼠皮下肿瘤质量[(3.29±0.57)g、(2.91±0.49)g、(2.55±0.52)g]、肿瘤组织CD31细胞阳性率(76.24%±5.51%、39.45%±5.48%、12.07%±3.54%)差异均有统计学意义(F=14.33、15.34,P=0.019、0.021),1 mg/kg组、2 mg/kg组均低于对照组(均P<0.05)。结论白藜芦醇能够抑制肿瘤生长与肿瘤组织新生血管形成,可能与通过降低HIF-1α蛋白泛素/类泛素化修饰途径抑制皮肤鳞癌新生血管形成有关。

激光照射对荷瘤小鼠淋巴细胞活性的影响

采用MTT还原分析法研究氦氖激光照射对SP2 /O骨髓瘤小鼠脾细胞、胸腺细胞的增殖活性的影响。结果表明激光具有增强荷瘤小鼠免疫细胞活性的功能。激光组与对照组相比P <0 0 1,差异明显。由此证明氦氖激光照射免疫器官区 (脾区 )具有活化淋巴细胞 ,促进淋巴细胞DNA合成 ,提高机体免疫力的作用。

转铁蛋白修饰紫杉醇脂质体的制备及其抑瘤作用

目的：制备转铁蛋白（TF）修饰紫杉醇（PTX）脂质体（TF-PTX-LP）,并研究其抑瘤作用。方法：采用薄膜分散法制备TF-PTX-LP并观察其形态;定性和定量考察肝癌Hep G2细胞对TF-LP和LP的摄取情况;检测PTX、PTX-LP和TF-PTX-LP分别处理Hep G2细胞24、48、72 h后细胞的增殖抑制率;以Hep G2细胞制备肿瘤球,考察生理盐水、PTX、PTX-LP和TF-PTX-LP分别处理0、1、2、4、5、6、7 d对肿瘤球体积的影响;复制Hep G2荷瘤裸鼠模型,考察生理盐水、PTX、PTX-LP和TF-PTX-LP（以PTX计8.5mg/kg）对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用。结果：TF-PTX-LP均呈均一球形,粒径在100~120 nm。TF-LP处理后细胞的荧光强度强于LP（P〈0.01）。与PTX、PTX-LP比较,TF-PTX-LP处理后细胞的增殖抑制率更高（P〈0.01）。与生理盐水、PTX、PTX-LP比较,TF-PTX-LP处理后肿瘤球体积更小,对荷瘤裸鼠的抑瘤率更高,且6、7 d后抑瘤率差异有统计学意义（P〈0.01）。增殖抑制率和肿瘤球体积变化呈时间依赖性。结论：成功制得具有良好抑瘤作用的TF-PTX-LP。

PPI1在裸鼠体内抑制人宫颈癌细胞HeLa生长的研究

探讨PPI1基因在裸鼠体内对人宫颈癌细胞生长的抑制作用。首先将稳定表达PPI1野生型和突变活化型基因的人宫颈癌细胞HeLa进行裸鼠体内致瘤,观察PPI1对肿瘤生长的影响;其次构建野生型HeLa细胞宫颈癌裸鼠模型,通过在体电脉冲技术,将PPI1野生型和突变活化型基因导入瘤体内进行基因治疗,观察裸鼠的存活情况;FACS分析移植瘤的细胞周期分布;免疫组化法检测移植瘤中的PPI1、cyclin B1、p53和p21的表达水平。在致瘤实验中,稳定表达PPI1突变活化型基因的HeLa细胞组的瘤结节生长缓慢,瘤结节明显小于对照组;在基因治疗实验中,PPI1突变活化型基因治疗组的裸鼠生存期明显延长,瘤组织中的肿瘤细胞呈现G2/M期停滞,cyclin B1和p21的表达水平明显增强,而突变型p53的表达明显减弱。PPI1活化型突变体对裸鼠HeLa移植瘤生长有明显的抑制作用。

罗格列酮对裸鼠移植性人肝癌细胞生长的抑制作用

目的:研究罗格列酮(rosiglitazone,ROZ)对裸鼠体内人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响。方法:建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为罗格列酮治疗组及对照组。观察罗格列酮对移植瘤体积和重量的变化,采用光镜观察移植瘤细胞形态学变化,流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布,免疫组织化学和蛋白印迹检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen,PCNA)蛋白表达变化。结果:罗格列酮在体内能明显抑制移植瘤的生长,抑瘤率为50.81%;组织学显示治疗组瘤细胞异型性降低,核质比下降;流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞处于G2/M期细胞为13.1%,与对照组比较,治疗组处于G2/M期细胞显著增多(29.1%)。免疫组织化学和蛋白印迹检测均显示检测显示,经罗格列酮处理后,裸鼠移植瘤组织PCNA蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:罗格列酮可体内抑制人肝癌SMMC7721细胞增殖,并使癌细胞阻滞于G2/M期。