Inhibition of autophagy significantly enhances combination therapy with sorafenib and HDAC inhibitors for human hepatoma cells

AIM: To clarify whether histone deacetylase inhibitors histone deacetylase inhibitors (HDACIs) can sensitize hepatocellular carcinoma (HCC) cells to sorafenib treatment. METHODS: Bax, Bcl-2, ATG5-ATG12, p21, and p27 protein levels in Hep3B, HepG2, and PLC/PRF/5 cells were examined by Western blot. CCK8 and a fluoro-metric caspase-3 assay were used to examine cellular viability and apoptosis levels. The effect of Beclin-1 on sensitization of HCC cells to sorafenib was examined by transfecting Beclin-1 siRNA into Hep3B, HepG2, and PLC/PRF/5 cells. RESULTS: Autophagy inhibition enhances the inhibitory effects of vorinostat and sorafenib alone or in combination on HCC cell growth. Vorinostat and sorafenib synergistically induced apoptosis and cell cycle alterations. Western blot data indicated that HDACIs and Beclin- 1 knockdown increased the p53 acetylation level. The knockdown of Beclin-1 enhanced the synergistic effect of the combination of vorinostat with sorafenib. CONCLUSION: HDACIs can sensitize HCC cells to sorafenib treatment by regulating the acetylation level of Beclin-1. (C) 2014 Baishideng Publishing Group Co., Limited. All rights reserved.

巨噬细胞移动抑制因子、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白及循环肿瘤细胞在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)及外周血循环肿瘤细胞(CTC)在骨肉瘤中的表达及临床意义。方法 将132例骨肉瘤患者设为观察组,另选取同期的129例软骨瘤患者设为对照组。对比两组患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;对观察组患者随访2年,分析不同预后骨肉瘤患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;采用Cox多元回归分析对骨肉瘤患者预后影响因素进行分析。结果 观察组患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于对照组,RECK阳性表达率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访2年,132例骨肉瘤患者中,死亡58例,生存74例。死亡患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于生存患者,RECK阳性表达率明显低于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均为骨肉瘤患者预后死亡的危险因素(P﹤0.05)。结论 MIF、CTC、RECK可用于骨肉瘤患者早期诊断及预后评价中,能作为评估骨肉瘤患者预后的标志物。

金属离子对蒜氨酸酶活性的影响

旨在对大蒜中的蒜氨酸酶和蒜氨酸进行提取的基础上,研究不同金属离子对蒜氨酸酶活性的影响。研究表明,大多数金属离子对蒜氨酸酶活性有影响,其中Mg2+、Fe3+、Ca2+、Fe2+、Mn2+对蒜氨酸酶有明显的激活作用,且这种激活作用在有甘油、葡萄糖、蔗糖等多羟基化合物存在的条件下激活效果更好;Cu2+对蒜氨酸酶有抑制作用。

双向电渗对钢筋混凝土修复效果的试验研究--保护层阻锈剂、氯离子和总碱度的变化规律

为提高氯盐侵蚀环境下钢筋混凝土结构的无损修复效果,对受氯盐侵蚀的钢筋混凝土试件采用双向电渗技术,在排出氯离子的同时向混凝土保护层内引入阻锈剂.为考察该技术的修复效果,采用有机元素分析法和自动电位滴定法,结合电流密度、通电时间、水灰比、初始氯盐掺量4个影响因素,研究混凝土保护层内阻锈剂、氯离子分布的变化情况,并对保护层的总碱度进行测量;同时设置电化学除氯组作为对照.结果表明:双向电渗处理后试件保护层内氯离子含量降低,总碱度提高;通过对各参数的合理控制,阻锈剂迁移至钢筋表面的浓度足以起到较好的阻锈效果.双向电渗的效果随电流密度、通电时间、试件水灰比的增加而提高,而受初始氯盐掺量的影响较小.双向电渗在对混凝土氯离子迁出和总碱度提高的效果方面与电化学除氯有所差异.在双向电渗后,Cl-质量摩尔浓度沿着保护层厚度方向由内向外成增高趋势;而电化学除氯后整个保护层内Cl-质量摩尔浓度分布相对均匀.对保护层碱度变化来说,两种处理方式效果接近.

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:研究HD02在大鼠慢性前脑缺血过程中对神经细胞凋亡的作用。方法:16～18个月SD大鼠64只,雄性,体质量300～350g。利用末端标记法和流式细胞仪,测定HD02干预前后脑缺血大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况,并检测Caspase-3免疫阳性细胞、Calcineurin和钙激活中性蛋白酶(Calpain)活性。结果:HD02有减少阳性凋亡细胞出现率犤(5.40±1.38)%与模型对照组(12.72±3.45)%比较,t=4.84,P<0.01犦及减少Caspase-3免疫阳性细胞表达(HD02组比模型对照组:缺血15d:7.10±1.90比12.55±3.30,t=3.86,P<0.01;缺血30d:4.60±1.15比9.50±4.20,t=4.67,P<0.01),降低CalcineurinD02组比模型对照组:大脑皮质每克蛋白中含犤(38.24±5.58)比(48.98±5.04)nmol/s,t=3.64,P<0.01犦;海马每克蛋白中含犤(37.87±3.38)比(52.58±4.92)nmol/s,t=3.75,P<0.01犦和Calpain活性犤大脑皮质每毫克蛋白中含(2.96±0.77)比(4.56±0.85)A/h,t=3.84,P<0.05犦;海马每毫克蛋白中含犤(2.90±0.28)比(4.91±0.94)A/h,t=3.97,P<0.01犦的作用。结论:HD02有一定的抗神经细胞凋亡的作用。

植物防卫基因PvPGIP2和TaLTP4的克隆及其对小麦的转化

多聚半乳糖酸醛酶抑制蛋白和脂质转移酶蛋白是植物产生的防卫蛋白,对植物病原真菌具有防御作用。本研究利用同源基因克隆策略和RT-PCR技术,成功克隆了1个菜豆的多聚半乳糖酸醛酶抑制蛋白(PvPGIP2)编码基因和1个小麦的脂质转移蛋白(TaLTP4)编码基因;由于它们在功能上具有协同作用,我们以pAHC25为骨架构建了PvPGIP2和TaLTP4基因双价表达载体,对该双价表达载体进行菌落PCR筛选、限制酶消化鉴定和测序分析,结果表明构建的PvPGIP2和TaLTP4双价基因表达载体是成功的,该载体包含PvPGIP2表达盒和TaLTP4表达盒,分别受玉米泛素基因(Ubiqiutin)启动子的驱动,选用来源于Ti质粒中胭脂碱合成酶基因的终止序列作为终止子(Tnos)。采用基因枪法轰击小麦品种扬麦18成熟胚愈伤组织2000枚,经过2次Bialaphos筛选,最终获得扬麦18再生植株112株,利用表达载体基因的特异引物对上述成活的转化植株进行PCR检测,获得PvPGIP2和TaLTP4均为阳性的植株12株,转化率为0.6%。

钢筋阻锈剂的发展与应用

钢筋腐蚀为影响混凝土耐久性的主要因素,为此世界各国已经采取了一系列防止钢筋腐蚀的技术措施,钢筋阻锈剂是重要措施之一。介绍了国内外钢筋阻锈剂的发展情况及其不断扩大的应用现状。

鳖保宁对中华鳖气单胞菌病的药效学研究

采用常规方法对中华鳖 (Trionyxsinensis)常见病害进行细菌学检查 ,测定了鳖保宁及相关单味药对中华鳖主要病原菌温和气单胞菌 (Aeromonassobria)和豚鼠气单胞菌 (A .caviae)的最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度 (MBC) ,并观察鳖保宁预防鳖病害的效果。结果表明 :2 0例患病鳖中共分离到 2 8株细菌 ,其中温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌分别占 32 14%和 2 1 43% ;鳖保宁及相关单味药对温和气单胞菌和豚鼠气单胞菌均有不同程度的抑制和杀灭作用 ,其中鳖保宁的作用最强 ;鳖保宁预防鳖病害的效果优于对照组。

金荞麦超微粉对小鼠体内抑菌作用的研究

为研究金荞麦超微粉对于感染沙门菌动物的保护效果,将60只昆明小鼠随机等分为4组,1组～3组分别灌胃不同剂量金荞麦超微粉悬液,剂量依次为1.75、1.25、0.75g/kg,第4组灌胃生理盐水,给药7d后以3倍小鼠半数致死剂量的沙门菌(2.3×108cfu)皮下注射感染小鼠,计算小鼠生存期与死亡率。结果表明,在攻毒后各药物对照组对小鼠治疗效果明显,其中高剂量组使小鼠死亡率下降50%左右。各药物组均显著延长细菌感染小鼠模型的存活时间,其中金荞麦高、中剂量组与空白对照组差异极显著(P<0.01)。结果表明,金荞麦超微粉对感染革兰阴菌的小鼠具有很好的保护效果,并具有一定量效关系。

蟾毒灵联合吉非替尼对肺癌细胞H1975的影响及机制研究

目的观察蟾毒灵联合吉非替尼对肺癌细胞H1975生长的影响,探讨蟾毒灵增强吉非替尼抗肿瘤作用的可能机制。方法应用MTT法检测蟾毒灵(1～100nmol/L)、吉非替尼(0.1～20μmol/L)及两药联合干预对H1975细胞增殖的抑制作用;流式细胞术观察蟾毒灵(10nmol/L)、吉非替尼(1μmol/L)及联合用药对H1975细胞凋亡的影响;Westernblot检测单独用药或联合用药对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Met信号通路相关蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,吉非替尼浓度超过5μmol/L时才见到其对H1975细胞生长的抑制作用;蟾毒灵与吉非替尼联合后,可明显抑制肿瘤细胞的生长。流式细胞术结果显示,蟾毒灵联合吉非替尼干预后肿瘤细胞凋亡率为(61.64±5.61)%,明显高于单用蟾毒灵的(18.34±3.42)%和单用吉非替尼的(7.32±1.08)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Westernblot结果显示,蟾毒灵联合吉非替尼能明显下调H1975细胞p-EGFR、p-Met、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白表达。结论蟾毒灵联合吉非替尼可显著抑制H1975细胞的增殖,促使肿瘤细胞凋亡;其抗肿瘤活性的机制可能与阻断EGFR-磷酯酰肌醇-3激酶(PI3k)/Akt信号通路有关。

植物的向光性

植物的向光性是一个古老的研究课题 ,但是向光性反应的机理至今仍未完全揭示和证实 .本文论述了植物向光性的光受体 ,介绍了植物根的向光性 ,着重探讨了植物向光性的机制 .提出 ,在单向光刺激下 ,植物向光侧很可能会大量合成生长抑制物质 ,使得向光侧和背光侧生长抑制物质的含量分布不均匀 ,而生长素则不一定出现分布不均匀的现象 .但是向光侧的生长素可能因为受到生长抑制物质的拮抗作用而难以发挥其促进生长的生理作用 。

脑梗死患者血浆炎症因子、纤溶活性的变化及对神经功能的影响

目的通过观察急性脑梗死患者血浆中的Ⅷ因子相关抗原(vWF)、P-选择素(P-Selectin)、白细胞介素-6(IL-6)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及快速抑制物(PAI-1)的变化规律,探讨炎症因子及纤溶活性在脑梗死发生、发展、转归过程中的作用。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)及发色底物法对40例急性脑梗死患者发病后6,12,24及72h血浆vWF,P-selectin,IL-6,t-PA及PAI-1活性进行动态测查。并与32例自愿者健康对照组进行比较。结果在急性脑梗死患者发病24h内,vWF(147.4±26.2)μg/ml、P-selectin(21±4)ng/ml、IL-6(114.5±1.5)μg/ml、PAI-1(0.79±0.24)au/ml活性明显增高,t-PA活性(0.24±0.15)iu/ml明显降低,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);随时间推移vWF(118.6±24.4)μg/ml、P-selectin(14±3)ng/ml、IL-6(108.7±4.4)μg/ml、PAI-1(0.56±0.20)au/ml活性有所降低,而t-PA活性(0.43±0.11)iu/ml升高,但与正常对照组相比仍有差异(P<0.05)。结论(1)急性脑梗死患者早期存在内皮细胞损伤;(2)炎症因子参与脑部缺血性损害;(3)纤溶活性下降,说明t-PA及PAI-1参与了血栓形成的病理过程。

两种益微菌对枯萎病菌抑制能力的离体和活体测定

本文采用平板测定与生测法相结合，针对棉花枯萎病菌，将益微菌ＡＢ３０４－２、ＡＢ２７２与病原菌导入植物体中，测定益微菌的抑制能力。结果表明，在平板培养基中，对枯萎病菌具有较强抑菌能力，被抑制枯萎病菌的分生孢子数减少；在植物体中，两种益微菌对棉花枯萎病菌具有较强抗扩展能力；在盆钵试验中，两种益微菌的初步防效为９１．４９％和８８．６１％。

甲基转移酶抑制剂对Raji细胞系增殖抑制的实验研究

目的 探索不同浓度甲基转移酶抑制剂 (5 Aza CdR)对甲基化细胞系Raji细胞的生长抑制效应 ,为临床应用提供实验依据。方法 对 5 Aza CdR体外处理高甲基化致P15基因失活的淋巴肉瘤白血病细胞株Raji细胞 ,经流式细胞术、细胞生物学特征观察细胞的生长抑制效应。结果 在 (10 7～ 10 6)mol/L的范围内 ,随着药物浓度的升高 ,Raji细胞生长受到抑制 ,并表现出剂量时间依赖关系。 5 Aza CdR诱导细胞分化 ,阻滞于G0 /G1期。结论 甲基转移酶抑制剂抗DNA甲基化的白血病是可行的 ,值得进一步探索。

爪哇黄芩二氢黄酮对HepG-2细胞增殖的影响

为研究爪哇黄芩二氢黄酮活性成分的抗肿瘤作用,筛选了爪哇黄芩活性部位和敏感细胞株,并研究了爪哇黄芩活性二氢黄酮对敏感细胞株HepG-2细胞增殖的影响,为开发天然药物奠定了实验基础.选取体外培养的人肝癌细胞HepG-2、胃癌细胞SGC-7901、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7及神经胶质瘤细胞C6为模型,以半数抑制浓度(IC50)为指标,采用MTT法测定爪哇黄芩石油醚、二氯甲烷、正丁醇提取部位对5种肿瘤细胞的增殖抑制作用,结果表明,爪哇黄芩二氯甲烷部位为其活性部位,人肝癌细胞HepG-2为其敏感细胞株.然后,采用MTT法测定活性部位分离的二氢黄酮单体对HepG-2的抑制作用,进行活性单体的筛选.结果显示,爪哇黄芩5,6,2'-三羟基-7-甲氧基二氢黄酮IC_(50)为110.3μmol/L,爪哇黄芩5-羟基-6,7,2',6'-四甲氧基二氢黄酮IC_(50)为747.21μmol/L.实验数据表明,爪哇黄芩5,6,2'-三羟基-7-甲氧基二氢黄酮为爪哇黄芩活性二氢黄酮单体成分.

NaCl对吸胀后小麦种子发芽和幼苗生长的影响

用不同浓度的Nacl处理 4个品种小麦吸胀后的种子 ,2 0 0 - 2 5 0mmol/LNacl胁迫下 ,4个品种的发芽率明显降低 ,但品种间的耐盐能力有异 ,低盐浓度下 ,根比地上部对盐害更为敏感 ,高盐浓度下 。

电针对脑血栓急性期纤溶功能的影响

目的 :观察电针治疗对脑血栓形成急性期纤溶功能的影响及其与临床转归之间的关系。方法 :采用头、体针结合电针进行治疗。用发色底物法测定治疗前、后患者血浆组织型纤溶酶原激活物 (t- PA)及其快速抑制物 (PAI- 1)的活性。于治疗前、后进行神经功能缺损评分 ,并与一般治疗方法作对照。结果 :急性脑血栓形成患者电针治疗后血浆 t- PA活性明显高于对照组 ,P<0 .0 1;PAI- 1活性明显低于对照组 ,P<0 .0 1;神经功能缺损评分明显低于对照组 ,P<0 .0 1。结论 :脑血栓形成急性期头、体穴位结合电针治疗能明显提高血浆 t- PA活性 ,降低 PAI- 1水平 ,促进纤溶功能 。

脑梗塞患者甘油三脂与纤溶活性异常的研究

目的 :探讨脑梗塞患者血高甘油三酯与纤溶系统异常的危险因素。方法 :采用酶联免疫吸附双抗体夹心法、酶法 ,对 5 1例脑梗塞患者及 5 0例健康对照组血组织型纤溶酶原激活物 (t PA) ,纤溶酶原激活物抑制物 1(PAI 1)和甘油三酯 (TG)水平进行了对比分析。结果 :血高TG、高PAI 1,与低t PA含量变化为脑梗塞患者异常变化特征 ,与正常组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :高甘油三酯通过改变纤溶活性是诱发脑梗塞疾病发生。

HW703水平井钻井完井液技术

针对克拉玛依油田七中区佳木河组裂缝性油藏特点，ＨＷ７０３水平并选用了ＰＡＣ系列、两性离子聚合物（ＸＹ２７、ＪＴ８８８）钻井完井液体系。室内试验及现场实践表明，该体系抑制地层造浆能力强，防塌润滑性能好，有良好的流变性、滤失性和揭岩能力，完全能满足水平井各井段钻井工程要求。此外，采用屏蔽暂堵技术能有效地封堵裂缝，保护油层。

某电厂灰场灰水回用工程试验研究

利用动态、静态等系列模拟试验,研究分析了水灰比、循环水补水等因素对某火电厂除灰系统灰水回用后对整个除灰系统结垢的影响。