ILK在肺鳞状细胞癌和肺腺癌的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨ILK在肺鳞状细胞癌和肺腺癌组织中的表达情况,及其与病理分型、肿瘤分化、分期、淋巴结转移及预后的关系。方法采用S-P免疫组织化学方法和Western Blot法,检测肺鳞状细胞癌和肺腺癌组织及相应癌旁肺组织中整合连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的表达情况,并结合临床和病理资料进行分析。结果免疫组化结果显示:ILK在53/76(70%)的肺癌组织中阳性表达。其中鳞状细胞癌阳性率75%(33/44),腺癌阳性率62.5%(20/32),其表达与肺鳞状细胞癌的分化呈负相关(P<0.01),与临床分期(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.01)呈正相关;与肺腺癌的临床分期(P<0.01)和淋巴结转移(P<0.01)正相关,与分化程度无相关性(P>0.05)。同时,其表达与患者的生存时间呈负相关(P<0.01),与年龄、性别、肿瘤大小和组织类型等因素无关。Western Blot法进一步证实ILK在肺癌组织中的表达显著高于癌旁正常肺组织(P<0.01),其表达与肺癌的分化(P<0.01)显著负相关。结论肺鳞状细胞癌和肺腺癌中,ILK与肺癌的侵袭和转移有关。ILK可作为判断肺鳞状细胞癌和肺腺癌预后的参考指标。

涎腺腺样囊性癌组织中ILK和E-cadherin的表达及意义

目的:探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测ILK和E-cadherin在SACC及正常涎腺组织中的表达。结果:ILK在SACC中表达,ILK的表达与SACC临床病理分型不相关(P>0.05),与TNM分期有关,在发生神经侵犯及远处转移的病例中,ILK的表达明显增加(P<0.05);与正常涎腺组织相比,E-cadherin在SACC中表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),E-cadherin表达与不同组织病理学类型有关,且在实体型、发生神经侵犯及远处转移的病例中,E-cadherin表达下降更明显(P<0.05);ILK与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.768,P<0.001)。结论:SACC组织中ILK表达上调而E-cadherin表达降低,有望成为临床判断涎腺腺样囊性癌恶性程度、评估预后的潜在指标。

ILK、Cyclin D1及MMP-9在膀胱癌中的表达及意义

目的通过研究膀胱癌中ILK、Cyclin D1及MMP-9的表达,探讨它们在膀胱癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测ILK、Cyclin D1及MMP-9在58例膀胱癌和20例癌旁正常组织中的表达,并对检测结果进行分析。结果 ILK、Cyclin D1及MMP-9在膀胱癌及正常组织中的表达分别为62.1%和15.0%,70.7%和20.0%,65.5%和15.0%(P<0.05)。同时,其阳性表达随着肿瘤分化程度的降低呈上升趋势(P<0.05)。ILK与Cyclin D1和MMP-9的表达均呈正相关(P<0.05)。结论 ILK、Cyclin D1及MMP-9蛋白在膀胱癌中均呈过表达,且与病理分化程度密切相关,提示其参与膀胱癌的发生及转移,是肿瘤病理学分期分级的有效参考指标,联合检测有助于膀胱癌的临床诊断与预后。

ILK、E-cadherin及Twist在膀胱癌中的表达及意义

目的通过研究膀胱癌中ILK、E-cadherin及Twist的表达,探讨其在膀胱癌发生、发展中的作用。方法运用免疫组织化学SP法检测ILK、E-cadherin及Twist在62例膀胱癌和25例癌旁正常组织中的表达,并分析其相关性。结果在膀胱癌和癌旁组织中,ILK的表达率分别为54. 8%(34/62)和16. 0%(4/25),两组相比差异具有统计学意义(χ~2=10. 9,P<0.05); E-cadherin的阳性表达分别为32. 3%(20/62)和72. 0%(18/25),两组相比差异具有统计学意义(χ~2=11. 4,P<0.05);Twist的阳性表达分别为64. 5%(40/62)和4. 0%(1/25),两组相比差异具有统计学意义(χ~2=26. 2,P<0.05)。同时,ILK和Twist在高分化膀胱癌中的表达明显低于低分化癌,两组相比差异具有统计学意义(均P<0.05),而E-cadherin在高分化膀胱癌中的表达明显高于低分化癌(P<0.05)。膀胱癌中E-cadherin与ILK和Twist的表达均呈负相关;而Twist与ILK表达呈正相关。结论 ILK、E-cadherin及Twist蛋白在膀胱癌中均有异常表达,并与膀胱癌的分化程度密切相关,ILK、E-cadherin及Twist可能参与膀胱癌的发生、发展。

ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究整合素连接激酶(itegrin-linkedkinase,ILK)在眼睑结膜鳞状细胞癌中的表达及其与眼睑结膜鳞状细胞癌的分化程度的关系和相关性,探讨其在眼睑结膜鳞状细胞癌发生发展中的作用和临床意义。方法采用免疫组化Eli Vision法染色对34例眼睑结膜鳞状细胞癌和10例癌旁正常组织标本进行ILK标记观察并分析表达情况。结果 ILK蛋白在眼睑结膜鳞状细胞癌组织、癌旁正常眼睑结膜组织中的表达阳性率分别为73.53%(25/34),0.00%(0/10),蛋白在眼睑结膜鳞状细胞癌组织的表达明显高于癌旁正常眼睑结膜组织,差别有显著性(P=0.000,P<0.01)。ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌23例高-中分化组中,有14例表达阳性,在11例低分化组中全部表达阳性,两者间有显著性差别(P=0.017,P<0.05)。结论检测ILK在眼睑结膜鳞状细胞癌组织中的表达明显高于癌旁正常眼睑结膜组织,提示ILK蛋白的表达可能与眼睑结膜鳞状细胞癌的发生有关;表达与肿瘤分化程度密切相关,提示可能与眼睑结膜鳞状细胞癌的发展及恶性潜能有关。

ILK、ER在子宫内膜癌组织中的表达及相关性分析

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)、雌激素受体(ER)在子宫内膜癌组织中的表达及相关性。方法:应用免疫组化SP法,检测60例子宫内膜癌、34例癌旁组织和20例正常子宫内膜标本中ILK、ER蛋白的表达情况。结果:①ILK蛋白在子宫内膜癌组织的阳性表达率为65.0%,显著高于正常内膜组织(5.0%)及癌旁组织(8.8%)(P<0.001)。②ER在正常子宫内膜及癌旁组织中的阳性表达率分别为100.0%、94.1%,均高于其在子宫内膜癌组织中的表达(50.0%)(P<0.001)。③ILK随着晚临床分期、组织低分化、深肌层浸润及发生淋巴结转移表达增高(P<0.05),ER表达与组织学分级、肌层浸润程度有关(P<0.05)。④ILK与ER在子宫内膜癌组织中的表达呈负相关(r=0.314,P=0.014)。结论:ILK在子宫内膜癌的发生、发展过程中发挥着重要作用,ER随细胞恶变而发生改变。对ILK、ER表达水平的联合检测在子宫内膜癌的诊断、治疗及判断预后方面有一定的指导意义。

ILK在宫颈癌组织中的表达及宫颈癌细胞侵袭能力的影响

目的探讨整合素链接激酶(ILK)在宫颈癌组织中的表达情况及其与宫颈癌细胞的侵袭能力的相关性。方法采用免疫组化法对湖南省益阳医专附属医院妇产科收集的59例宫颈上皮瘤变(CIN)标本、44例术后病例确诊的宫颈癌标本及30例病理检查为正常宫颈组织的标本进行检测,分析ILK在上述几种组织标本中的表达水平,并分析ILK表达与宫颈癌患者的临床病理特征的关系。结果宫颈癌组织中的ILK表达阳性率(86.36%)显著的高于CINⅠ级标本的(62.5%)、CINⅡ~Ⅲ级标本的(65.71%)及正常言颈组织标本的(23.33%)(X^2值分别为5.144、4.725、29.737,均P<0.05)。CINⅠ级标本患者的ILK表达阳性率(62.5%)、CINⅡ~Ⅲ级标本的(75.71%)均显著的高于正常宫颈组织标本(23.33%)(X^2值分别为8.472、11.675,均P<0.05)。ILK在宫颈癌组织中的表达与宫颈癌的低分化程度、发生淋巴结转移、深度的肌层浸润具有相关性(X^2值分别为5.173、4.810、4.020,均P<0.05),与年龄、FIGO分期、组织学类型无显著相关性(X^2值分别为0.275、1.991、0.129,均P>0.05)。结论 ILK在宫颈癌组织中显著的高表达,同时与宫颈癌的分化程度、发生淋巴结转移、深度的肌层浸润具有相关性。

阳性表达表皮钙粘蛋白增加G0/G1期人乳腺癌细胞比例及其分子机制

表皮钙粘蛋白 (E cadherin)阴性的乳腺癌细胞株MDA MB 2 3 1和MDA MB 43 5转染野生型表皮钙粘蛋白基因 ,通过流式细胞仪测量细胞周期发现表皮钙粘蛋白阳性细胞生长变慢 ,更多细胞停滞在G0 /G1期 ,蛋白质印迹证实由G0 /G1期进入S期的重要调控分子细胞周期蛋白 D1(cyclinD1)下降了 ,并发现表皮钙粘蛋白还能降低直接激活细胞周期蛋白 D1基因转录的 β 连环蛋白的蛋白质浓度 .蛋白激酶B (PKB)能通过抑制糖原合成激酶 3 β(GSK 3 β)的活性来抑制β 连环蛋白降解 ,并在乳腺癌高转移细胞株中普遍过表达 ,其表达同样受到了表皮钙粘蛋白的抑制 .并且在表皮钙粘蛋白阳性细胞中 ,作为PKB上游信号分子并能激活PKB的粘着斑激酶 (FAK)和整联蛋白相关激酶 (ILK)蛋白量也发生下降 ,能抑制PKB激活的PTEN蛋白量却增加了 .结果显示 ,表皮钙粘蛋白能通过降低乳腺癌细胞中的PKB蛋白浓度 ,并通过上游信号分子抑制PKB的激活 ,进而降低PKB对β 连环蛋白降解的抑制作用 ,导致 β 连环蛋白直接调控的靶基因细胞周期蛋白D1的表达量下降 ,引起更多的细胞停止在G0

整合素连接激酶和α-平滑肌肌动蛋白的表达与肾间质纤维化关系的研究

目的探讨整合素连接激酶(ILK)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与肾间质纤维化(RIF)的关系。方法选取原发性肾小球肾炎患者肾活检标本88例,根据光镜下肾小管间质的病变程度分组。采用免疫组化方法检测各组标本ILK、α-SMA的表达,并将ILK、α-SMA的表达与肾间质纤维化程度进行相关性分析。结果ILK主要表达于病变肾小管上皮细胞,并且随肾间质病变的加重表达量增加,范围增大。肾小管间质中ILK表达量与RIF病变程度呈正相关;α-SMA表达主要见于纤维化间质,其表达与RIF程度呈正相关。结论随着肾小管间质病变程度的加重,ILK、α-SMA的表达逐渐增加,ILK可能参与了RIF的进程。

整合素连接激酶在C57小鼠Lewis肺癌中的表达及肺岩宁方对其的调控作用

目的探讨肺岩宁方对整合素连接激酶(integrin-linked kinase.ILK)mRNA及蛋白表达的影响。方法建立C57小鼠Lewis肺癌模型。将C57BL-6纯系10周龄雄性小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂(DDP)组、肺岩宁方组,每组10只。正常组正常饲养;模型组以0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;顺铂组在造模后第5天开始给药,在开始给药的第1、3、5天,DDP溶液1ml(含DDP0.1mg)腹腔注射,0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;肺岩宁方组在造模后第5天开始给予肺岩宁方药液0.4ml(生药含量36.1g/kg)灌胃。采用Real time PCR和Western blot方法分别检测ILK在移植瘤组织和转移灶发生的肺组织中mRNA、蛋白水平的表达。结果与正常组比较,模型组肿瘤肺转移率、转移灶及Ilk基因表达差异均有统计学意义(P<0.01),说明模型成功。与模型组比较,肺岩宁方组可以显著降低肺转移灶的发生的作用(P<0.01)。各组移植肿瘤组织中,肺岩宁方组ILK基因表达与模型组比较显著降低(P<0.01);各组肺组织中,与模型组比较,肺岩宁方组ILK基因表达显著下降(P<0.01),而化疗组ILK基因表达反而升高(P<0.01)。与模型组比较,肺岩宁方组ILK蛋白的表达明显降低(P<0.01)。结论肺岩宁具有显著降低ILK基因表达的作用,调控Snail信号途径的关键信号分子ILK基因有可能是肺岩宁方抗肿瘤转移的有效作用靶点所在。

虫草多糖对单侧输尿管梗阻小鼠肾小管上皮-间充质转化的影响

目的:观察虫草多糖对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:建立小鼠UUO模型,虫草多糖干预7 d。观察模型及治疗组在第7天时肾间质纤维化程度及肾小管α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肾小管上皮表型标记物(E-cadherin)、整合素连接激酶(integrin-linked protein kinase,ILK)的表达分布。结果:治疗组的肾间质纤维化程度明显改善,同时α-SMA、ILK蛋白的表达显著低于对照组(P<0.01)。而E-cadherin的表达显著高于对照组(P<0.01)。结论:虫草多糖可显著减轻E-cadherin的丢失和α-SMA的表达,并明显抑制ILK的表达,提示其可能通过下调ILK,抑制EMT,从而减轻肾小管间质纤维化。

缬沙坦对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶表达的影响

目的:观察缬沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶(ILK)表达的影响,探讨缬沙坦肾脏保护作用的可能机制。方法:30只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(n=10)、模型组(n=10)和干预组(缬沙坦30mg.kg-1.d-1,n=10)。第8、16周每组各处死5只大鼠,观察大鼠肾脏病理改变以及免疫组化方法检测其肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、ILK的表达并作半定量分析。结果:(1)DN大鼠肾小管上皮细胞ILK与TGF-β1同向表达增高,随病程进展递增;(2)缬沙坦干预后大鼠肾小管上皮细胞ILK表达较模型组显著降低。结论:(1)DN大鼠肾小管上皮细胞ILK与TGF-β1同向表达增高,提示ILK是肾间质纤维化发展的一个重要因素;(2)缬沙坦可能通过下调ILK来改善肾间质纤维化病变而发挥肾脏保护作用。

整合素连接激酶在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对KYSE-150细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤生长的影响

目的:分析整合素连接激酶(ILK)基因在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及其与患者临床病理特征之间的关系,探讨其对KYSE-150细胞增殖、凋亡和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:选取2012年1月至2014年12月手术切除并经病理证实的75例ESCC患者的癌组织和其配对的癌旁组织标本,用组织芯片技术及免疫组织化学染色法检测ESCC组织和癌旁组织中ILK的表达情况;qPCR法检测ESCC细胞ECA109、TE-1、EC9706、KYSE-150中ILK mRNA的表达,选用ILK表达最高的KYSE-150细胞进行后续细胞功能学研究。使用ILK干扰慢病毒感染KYSE-150细胞下调ILK的表达,qPCR和WB法检测ILK基因敲降效率;MTT实验、克隆形成实验和FACS检测干扰ILK表达对KYSE-150细胞增殖能力和凋亡水平的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测干扰ILK对KYSE-150细胞移植瘤生长的影响。结果:ESCC组织中ILK蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),且ILK高表达与淋巴结转移有关联(P<0.05)。ILK干扰慢病毒感染的KYSE-150细胞中ILK mRNA表达明显受到抑制(P<0.05),ILK蛋白水平表达下调,以上结果提示ILK敲降成功。与感染阴性对照病毒的KYSE-150细胞相比,ILK干扰慢病毒感染的KYSE-150细胞的增殖能力、克隆形成数均显著降低(均P<0.05),但细胞凋亡率升高(P<0.05)。与对照组相比,干预组裸鼠移植瘤生长缓慢,移植瘤的质量及体积均较小(均P<0.05)。结论:ESCC组织中ILK的表达高于癌旁组织,且ILK高表达与患者发生淋巴结转移有关联;抑制ILK基因可导致KYSE-150细胞增殖能力降低,促进细胞凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。

MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶(ILK)表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/mlTGF-β1处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1(0.1、1.0、10、100ng/ml)处理细胞,或以同一浓度的MCP-1(1ng/ml)在不同时间点(0h、12h、24h、36h、48h、72h)处理细胞。用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α-SMAmRNA的表达,Westernblot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达。在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂(PD98059,10μmol/L),p38MAPK抑制剂(SB203580,5μmol/L)和ROCK抑制剂(Y27632,500μmol/L)对HKC细胞ILK表达的影响。结果MCP-1(0.1、1.0ng/ml)作用后HKC细胞α-SMAmRNA和α-SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组(P<0.01),但低于阳性对照组(P<0.01);其中以1.0ng/mlMCP-1组作用后α-SMAmRNA和α-SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著(P<0.001)。1.0ng/mlMCP-1作用后细胞α-SMAmR-NA和α-SMA、ILK蛋白表达在0～48h内逐渐增加,48h达最高峰(P<0.01),72h时呈下降趋势。分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异(P>0.05)。结论MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38MAPK、ROCK途径有关。

过表达整合素连接激酶肺癌A549细胞的建立及生物学活性

目的:建立稳定过表达整合素连接激酶(ILK)的肺癌A549细胞模型,探讨ILK过表达对肺癌A549细胞生物学活性的影响。方法:以RT-PCR法扩增人ILK基因,构建pEGFP-ILK重组质粒。经酶切及测序鉴定后,将pEGFP-ILK质粒用脂质体转染肺癌A549细胞,G418压力筛选出稳定转染细胞克隆并扩大培养(A549/pEGFP-ILK组),设pEGFP-C1空质粒转染A549细胞(A549/pEGFP-C1组)及空白A549细胞对照组。用荧光显微镜观察EGFP-ILK融合蛋白的表达及细胞内定位,RT-PCR法检测各组细胞中ILK mRNA的转录水平,Western blot法检测各组细胞中ILK蛋白表达水平,MTT比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况,HE染色观察细胞形态变化。结果:酶切及测序证实,pEGFP-ILK重组质粒构建成功。该质粒转染A549细胞、并经G418压力筛选后,获得了表达绿色荧光蛋白的稳定转染株,ILK基因表达产物主要定位于细胞质内。与对照组相比,A549/pEGFP-ILK细胞ILK的mRNA及蛋白表达水平明显升高,其过表达率分别为218.18%和245.45%(P<0.05);过表达ILK的A549细胞增殖活力显著增强(P<0.05);凋亡水平被显著抑制(P<0.05);过表达ILK的A549细胞的核分裂相增多。结论:成功建立过表达ILK肺癌细胞模型,ILK过表达可促进癌细胞增殖、抗凋亡及核分裂相增多。

RNAi沉默整合素连接激酶基因表达对结肠癌细胞HT-29增殖的影响

目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,阻断结肠癌细胞系HT-29中整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,研究ILK基因沉默后对HT-29细胞系增殖产生的影响。方法:构建针对ILK基因的真核表达质粒pSUPER-neo-EGFP-ILK(pSNE-ILK),在脂质体介导下稳定转染人结肠癌细胞系HT-29细胞(HT-29/pSNE-ILK组),同时以无关质粒pSUPER-neo-EGFP-C(pSNE-C)转染HT-29细胞(HT-29/pSNE-C组)和未转染细胞(HT-29组)作为对照,分别应用RT-PCR技术及蛋白印迹法检测ILK mRNA及蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖状况。结果:稳定转染后,HT-29/pSNE-ILK组ILK mRNA及蛋白表达水平分别为0.16±0.11和0.24±0.07,HT-29/pSNE-C组分别为0.53±0.10和0.56±0.08,HT-29组分别为0.64±0.11和0.77±0.02,前组ILK mRNA及蛋白表达水平分别与后两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);稳定转染pSNE-ILK质粒后HT-29细胞中ILK mRNA及蛋白表达抑制率分别为69.8%和57.1%。MTT比色法检测显示,HT-29/pSNE-ILK组细胞增殖率明显下降(P<0.05)。结论:RNA干扰技术能有效抑制靶基因ILK的表达,进而可抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖。

肺岩宁方对ILK基因沉默后转染人肺癌A549细胞相关基因表达的影响

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因表达的影响。方法:构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,随机分为阴性对照病毒感染细胞(NC)组、RNAi靶点病毒感染细胞(KD)组、10%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组、20%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组,以及阳性对照10%DDP干预的KD组,应用Real time-PCR及Western Blot方法检测下游靶基因蛋白激酶B(Akt/PKB)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、转录因子-1(AP-1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、β-链蛋白(β-catenin)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与NC组比较,KD组GSK-3β、VEGF mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),cyclinD1、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Akt表达无变化,AP-1与β-catenin在mRNA水平表达升高(P<0.01)、蛋白水平表达则下降;与KD组比较,KD+10%肺岩宁含药血清和KD+10%DDP组具有下调VEGF、cyclinD1、MMP-9和β-catenin蛋白表达、上调GSK-3β蛋白表达,以及下调AP-1、cyclinD1 mRNA表达的作用(P<0.01);与KD组相比,KD+20%肺岩宁含药血清具有下调AP-1、cyclinD1和MMP-9蛋白表达的作用。结论:沉默ILK基因后可以明显降低GSK-3β、VEGF的表达,10%的中药肺岩宁方含药血清可能通过下调靶基因AP-1、cyclinD1、MMP-9、VEGF和β-catenin蛋白表达的作用而发挥其抗肿瘤的作用。

扶正化瘀方对肾纤维化大鼠EMT及TGF-β1/ILK信号途径的干预作用

目的:观察扶正化瘀方对肾纤维化大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)及TGF-β1/整合素连接激酶(ILK)信号途径关键因子表达的影响,探索其治疗肾纤维化的可能机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方组,每组10只。以单侧输尿管结扎术诱导单侧输尿管梗阻(UUO)肾纤维化大鼠模型。盐酸水解法检测大鼠肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量,天狼猩红染色观察肾组织胶原沉积,免疫组织化学、Western blot和Real-time PCR方法对大鼠肾组织EMT相关指标及TGF-β1/ILK信号途径关键因子蛋白及基因水平进行检测。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾组织Hyp含量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,扶正化瘀方组大鼠肾组织Hyp含量显著下降(P<0.01);与正常组比较,模型组肾小管上皮E-cadherin表达显著减少(P<0.01),而肾小管及间质区α-SMA蛋白表达显著增加(P<0.01)。扶正化瘀方组上调模型组肾小管上皮E-cadherin蛋白表达(P<0.01),抑制α-SMA蛋白表达(P<0.01)。与正常组比较,模型组TGF-β1、ILK蛋白及其基因水平显著升高(P<0.01),与模型组比较,扶正化瘀方组TGF-β1、ILK蛋白及其基因水平显著下降(P<0.01)。模型组肾组织p-Akt、p-GSK-3β、β-catenin蛋白水平较正常组显著升高(P<0.01),扶正化瘀方组显著下调模型组肾组织p-Akt、p-GSK-3β、β-catenin蛋白水平(P<0.01)。模型组肾组织AP-1 mRNA、Cyclin D1 mRNA水平显著高于正常组(P<0.01),扶正化瘀方组大鼠肾组织AP-1 mRNA水平较模型组显著下调(P<0.05)。结论:扶正化瘀方可通过TGF-β1/ILK信号途径发挥抑制EMT、减轻肾纤维化的作用。

整合素连接激酶基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力的影响及其机制

目的构建整合素连接激酶(Integrin linked kinase,ILK)基因siRNA干扰质粒,探讨ILK基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力及糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,GSK3)、β-环连蛋白(β-catenin)表达的影响。方法构建针对人ILK基因的2个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在脂质体介导下转染膀胱癌BIU-87细胞,通过RT-PCR及Western blot检测ILK基因mRNA和蛋白的表达水平,筛选出1个干扰效果较强的质粒用于后续试验,Western blot检测细胞GSK3和β-catenin蛋白的表达,Am-blue法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期的分布。结果经酶切和测序证明重组干扰质粒构建正确;稳定转染pGenesil-1 siRNA1和pGenesil-1 siRNA2质粒的BIU-87细胞ILK基因mRNA和蛋白表达水平较BIU-87细胞组(未转染组)分别下降了69%、52%和70%、55%,选择pGenesil-1 siRNA1为最有效干扰序列;BIU-87siRNA1组GSK3的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别升高了41.87%和30.12%,β-catenin的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别降低了38.67%和48.05%;BIU-87 siRNA1组细胞增殖活力明显下降;BIU-87 siRNA1组G0-G1期细胞比例明显增加,S期减少。结论已成功构建ILK基因siRNA表达质粒,其可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,机制可能为ILK基因通过介导GSK3、β-catenin信号分子促进膀胱癌BIU-87细胞的增殖。