非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊对斑秃小鼠IL-7/IL-7Rα信号通路和Tregs细胞亚群的影响

目的:研究1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊(Platycladus orientalis tincture,POT)对斑秃(Alopecia areata,AA)小鼠治疗作用以及对白细胞介素7(Interleukin 7,IL-7)/白细胞介素7受体α(Interleukin-7 receptorα,IL-7Rα)信号通路和调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)亚群的影响。方法:将50只成年雄性C3H/HeJ小鼠随机分为对照组(C组),模型组[M组,环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导AA模型],M+1565 nm组(1565 nm非剥脱点阵激光治疗AA),M+POT组(POT治疗AA)、M+1565 nm+POT组(1565 nm非剥脱点阵激光联合POT治疗AA),每组10只。流式细胞术检测C组和M组皮损组织中Tregs细胞亚群的比例和所有组血液中单个核细胞中Tregs细胞亚群的比例。Western blot法检测各组小鼠皮损组织中IL-7和IL-7Rα的表达。结果:与C组比,M组皮肤组织IL-7和IL-7Rα的表达均明显增加,而且Tregs细胞比例明显减少(P<0.05)。与M组比,M+1565 nm组和M+POT组IL-7的表达均降低(P<0.05)。与M组比,M+1565 nm+POT组IL-7和IL-7Rα的表达均降低,且Tregs细胞比例都显著增加(P<0.05)。结论:1565 nm非剥脱点阵激光联合POT治疗可以抑制斑秃小鼠IL-7/IL-7Rα信号并减少Tregs细胞的比例。

慢性肝病患者血清白介素-7的检测及其临床意义

目的 检测白介素-7(IL-7)在慢性肝病患者不同阶段血清及尿液中的水平及,探讨其临床意义,为肝病患者的治疗提供参考。方法 收集30例健康受试者(A1组)、56例慢性肝炎患者(A2组)、37例肝硬化患者(A3组)血清和尿液样本,共计147份,其中A1组血清样本13份、尿液样本17份,A2组血清样本24份、尿液样本40份,A3组血清样本24份、尿液样本29份。采用ELISA法检测各组样本IL-7水平,采用全自动生化仪检测各组血清样本白蛋白(ALB)水平,采用肝脏弹性测量和肝脏脂肪变性定量检测设备检测各组受试者肝脏弹性硬度值(kPa值),并分析IL-7水平与ALB、kPa值的相关性。结果 血清IL-7水平A1组>A2组>A3组,A1组与A3组比较差异有统计学意义(P<0.05),A2组与A1组、A3组比较差异无统计学意义(P>0.05);尿液IL-7水平A1组>A2组>A3组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。血清IL-7水平与ALB呈显著正相关(r=0.226,P=0.041),与肝弹性硬度kPa值呈显著负相关(r=-0.258,P=0.045);尿液IL-7水平与血清ALB呈显著正相关(r=0.221,P=0.046)。结论 随着慢性肝病的进展,血清IL-7水平呈下降趋势;IL-7水平与肝纤维化密切相关,可能具有延缓或抑制肝纤维化的潜力。

真武汤加地龙联合顺铂对恶性胸腔积液模型小鼠血清白细胞介素7、血管内皮生长因子水平的影响

目的观察真武汤加地龙联合顺铂给药对恶性胸腔积液模型小鼠血清白细胞介素7(IL-7)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法选取8周龄的雌性C57BL/6小鼠40只,适应性喂养1周后随机均分为空白对照组、模型对照组、顺铂组、真武汤加地龙组、真武汤加地龙+顺铂组,每组8只。除空白对照组外,其余4组的32只均采用LLC小鼠肺癌细胞建立小鼠恶性胸腔积液模型。建模成功3天后,顺铂组予顺铂溶液6 mg/kg腹腔注射,隔3日1次,共3次;真武汤加地龙组予33.78 g/kg的真武汤加地龙溶液灌胃,每日1次,连续10天;真武汤加地龙+顺铂组予顺铂溶液6 mg/kg腹腔注射,隔3日1次,共3次,联合33.78 g/kg的真武汤加地龙溶液灌胃,每日1次,连续10天;空白对照组和模型对照组分别予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,每日1次,连续10天。给药结束后,常规麻醉小鼠,暴露胸腔,用注射器抽取胸水,精确到0.1 mL,记录胸水量。采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中IL-7、VEGF含量。结果与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组胸水量均升高(P<0.05);与模型对照组比较,各药物治疗组胸水量均下降(P<0.05)。真武汤加地龙+顺铂组效果最佳,优于真武汤加地龙组和顺铂组(P<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组血清VEGF水平均升高(P<0.05);与模型对照组比较,各药物治疗组血清VEGF水平均降低(P<0.05);真武汤加地龙+顺铂组血清VEGF水平低于真武汤加地龙组和顺铂组(P<0.05)。与空白对照组比较,模型对照组和各药物治疗组血清IL-7水平均降低(P<0.05);与模型对照组比较,真武汤加地龙组和真武汤加地龙+顺铂组血清IL-7水平均升高(P<0.05),顺铂组血清IL-7水平降低(P<0.05);真武汤加地龙组和真武汤加地龙+顺铂组血清IL-7水平高于顺铂组(P<0.05);真武汤加地龙组血清IL-7水平高于真武汤加地龙+顺铂组(P<0.05)。结论真武汤加地龙联合顺铂对小鼠恶性胸腔积液疗效良好,可以显著降低小鼠胸水量,这可能与下调血清VEGF、上调IL-7表达有关,且真武汤加地龙可以逆转顺铂引起的IL-7下降。

真菌感染对寻常性银屑病患者TLR7、IL⁃23、IL⁃17信号通路的影响

目的探讨分析真菌感染对寻常性银屑病(PV)患者Toll样受体7(TLR7)、白细胞介素⁃23(IL⁃23)、白细胞介素⁃17(IL⁃17)信号通路的影响。方法选取黑龙江中医药大学皮肤病科2022年6月至2023年6月收治的100例PV患者进行分析,根据是否并发真菌感染分为感染组41例及正常组59例。比较两组患者皮损面积及严重程度指数(PASI)、免疫功能[T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+))、免疫球蛋白(Ig)A、IgG]及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)、干扰素⁃γ(IFN⁃γ)、IL⁃23、IL⁃17]水平,比较两组TLR7 mRNA表达量和蛋白表达量,通过Spearman分析TLR7、IL⁃23、IL⁃17与PASI的相关性。结果感染组PASI评分及CD4^(+)、CD8^(+)、IgA、IgG均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);感染组TNF⁃α、IFN⁃γ、IL⁃23、IL⁃17、TLR7 mRNA表达量和蛋白表达量高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析显示,PASI及CD4^(+)、CD8^(+)、IgG、IgA与TLR7蛋白表达量呈正相关(P<0.05),与TLR7 mRNA表达量呈正相关(P<0.05),与IL⁃23呈正相关(P<0.05)、与IL⁃17呈正相关(P<0.05)。结论真菌感染后PV患者单个核细胞TLR7表达量及血清IL⁃23、IL⁃17水平升高,且与机体免疫炎症状态及病情密切相关。

MRI联合MMP-9、IL-7R对膝关节骨性关节炎发生发展的诊断价值研究

目的分析磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)联合基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)、白介素7受体(Interleukin 7 receptor,IL-7R)对膝关节骨性关节炎发生发展的诊断价值。方法选取2020年1月—2021年1月重庆市沙坝区人民医院收治的膝关节骨性关节炎患者60例为研究组,另选体检者40例为对照组。两组均行MRI检查及MMP-9、IL-7R水平检测。结果研究组ADC值、MMP-9、IL-7R水平高于对照组(P<0.05)。与研究组轻度患者相比,中度、重度患者ADC值、MMP-9、IL-7R水平逐渐升高(P<0.05)。预后不良患者ADC值、MMP-9、IL-7R水平高于预后良好患者(P<0.05)。相比于ADC值、MMP-9、IL-7R的单项诊断,联合诊断对膝关节骨性关节炎诊断及预后不良预测的敏感度、准确性均较高(P<0.05)。结论MRI联合MMP-9、IL-7R对膝关节骨性关节炎诊断价值及预后不良预测价值较高,可为膝关节骨性关节炎诊治提供借鉴。

共表达IL-7和CCL19的VSVΔ51溶瘤病毒在肝癌中的抗肿瘤活性研究

目的:构建共表达白细胞介素7(interleukin-7,IL-7)和趋化因子配体19[chemokine(C-C motif) ligand 19,CCL19]的溶瘤病毒VSVΔ51(7×19 VSVΔ51),并探索其在肝癌中的抗肿瘤活性。方法:细胞的活力测定(MTS法)检测溶瘤病毒对肿瘤细胞的细胞毒性;ELISA法检测病毒感染上清及肿瘤组织匀浆中的IL-7和CCL19的含量;皮下移植瘤模型检测溶瘤病毒的肿瘤抑制能力;流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞的表型;免疫组化法检测肿瘤浸润T细胞及IFN-γ的含量。结果:VSVΔ51和7×19 VSVΔ51病毒均可以在小鼠肝癌细胞H22和Hepa1-6中复制,在2 PFU时裂解细胞的效率接近100%;VSVΔ51和7×19 VSVΔ51病毒均对小鼠肝癌移植瘤的生长产生抑制作用,且7×19 VSVΔ51病毒较VSVΔ51病毒抑制能力更强[瘤质量(232.7±13.72) mg vs.(603.8±20.3) mg,P<0.000 1];7×19 VSVΔ51病毒组治疗后肿瘤组织中IL-7[(673.5±62.6)pg·ml^(-1)vs.(383.1±108.3) pg·ml^(-1),P<0.01]和CCL19[(756.2±41.6)pg·ml^(-1)vs.(356.2±50.2) pg·ml^(-1),P<0.001]的含量较VSVΔ51病毒组显著升高,肿瘤浸润T细胞的数目增多(805±133 vs. 392±21,P<0.05),干细胞样记忆T细胞的比例显著提升[(72.5±9.8)%vs.(49.3±8.5)%,P<0.001)],肿瘤组织中IFN-γ的含量也明显升高[(817±52) pg·ml^(-1)vs.(227±63) pg·ml^(-1),P<0.001)]。结论:7×19 VSVΔ51病毒可在肝癌小鼠模型中激发出强大的抗肿瘤免疫反应并发挥显著的抗肿瘤作用。

基于嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7的资生肾气丸镇痛机制研究

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用。方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1 h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型。观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E 2(PGE 2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况。结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE_(2)、NGF的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P<0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近。结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关。

7-脱氢胆固醇对白细胞介素-4诱导RAW264.7巨噬细胞M1/M2型极化的影响

目的研究7-脱氢胆固醇(7-DHC)对白细胞介素-4(IL-4)诱导的RAW264.7巨噬细胞M1/M2型极化的影响。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,分为M0组(RAW264.7巨噬细胞)、M2组(巨噬细胞M2型)。M2组以IL-4诱导极化,在诱导极化的同时分别予以0、5、10、20μg/mL 7-DHC处理(即M2组、M2+5μg/mL 7-DHC组、M2+10μg/mL 7-DHC组、M2+20μg/mL 7-DHC组)。CCK-8法检测7-DHC对M2组巨噬细胞的增殖情况。荧光定量PCR分别检测巨噬细胞M1型标志分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞分化抗原86(CD86)及M2型标志分子甘露糖受体(MR)、Ⅰ型精氨酸酶(ArgⅠ)的mRNA表达情况。酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的水平。结果7-DHC浓度分别为0、5、10、20μg/mL时,对巨噬细胞M2型均无增殖或抑制作用(P>0.05)。与M0组比较,M2组iNOS及CD86的mRNA表达明显降低,MR、ArgⅠ的mRNA及IL-10的表达明显增加(P<0.05);与M2组比较,7-DHC其他浓度干预组iNOS、CD86的mRNA及IL-6的表达明显增加,MR、ArgⅠ的mRNA及IL-10的表达明显降低(P<0.05),且5、10、20μg/mL 7-DHC处理组呈剂量依赖性。结论7-DHC能够调节IL-4诱导的RAW264.7巨噬细胞M2型极化,并促进巨噬细胞M2型向巨噬细胞M1型转化。

苗药吉祥草在COPD治疗中的抗炎作用及对TLR7/IL-17通路的抑制作用

目的苗药吉祥草在慢性阻塞性肺疾病(COPD)治疗中的抗炎作用及对Toll样受体(TLR)7/白细胞介素(IL)-17通路的抑制作用。方法118例COPD患者采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组各59例。患者均给予常规监护治疗,对照组口服吸入给予噻托溴铵粉雾剂,观察组给予苗药吉祥草联合噻托溴铵粉雾剂,对比两组治疗两个月前后肺功能指标与运动耐量指标、TLR7表达分析、炎性因子和炎性因子水平。结果治疗前两组肺功能指标及运动耐量指标水平均无明显差异(P>0.05),治疗后两组第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC和6 min步行实验(6MWT)水平均明显改善,且观察组FEV1、FVC、FEV1/FVC和6MWT水平均明显高于对照组(P<0.05)。治疗后观察组TLR7水平明显降低,且观察组TLR7水平明显低于对照组(P<0.05)。治疗前两组肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-2、IL-17、IL-6、IL-23和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平均无明显差异(P>0.05),治疗后两组IL-2水平明显升高,且观察组IL-2水平明显高于对照组(P<0.05),治疗后两组TNF-α、IL-17、IL-6、IL-23和hs-CRP水平均明显降低,且观察组TNF-α、IL-17、IL-6、IL-23和hs-CRP水平均明显低于对照组(P<0.05)。治疗后两组免疫球蛋白(免疫球蛋白A、免疫球蛋白M和免疫球蛋白G)水平均明显升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05)。结论噻托溴铵和苗药吉祥草可通过不同机制改善COPD患者的肺功能、生活质量及免疫球蛋白水平。苗药吉祥草中多种有效成分存在协同作用,可显著抑制机体TLR7通道,并传递式阻滞IL-17等一系列炎症信号通路,从而改善机体呼吸道和肺部的异常炎症反应。

外周血TLR7/IL-23/IL-17信号通路相关因子对慢性阻塞性肺疾病患者急性加重风险的预测效能

目的 探讨外周血Toll样受体7(TLR7)/白细胞介素-23(IL-23)/白细胞介素-17(IL-17)信号通路相关因子对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者急性加重风险的预测效能。方法 选取2019年6月—2022年6月收治的COPD 115例,根据随访6个月内是否发生急性加重分为急性加重组(28例)与稳定组(87例)。比较2组及不同病情COPD患者外周血TLR7和IL-23、IL-17,分析各外周血指标与COPD患者病情相关性、对COPD患者急性加重风险预测价值,并以最佳截断值分析各外周血指标对COPD患者急性加重风险的影响。结果 急性加重组外周血TLR7和IL-23、IL-17高于稳定组;COPD生活质量评估问卷(CAT)评分>20分患者外周血TLR7和IL-23、IL-17高于≤20分患者;肺功能COPD全球倡议(GOLD)分级3或4级患者外周血TLR7和IL-23、IL-17>2级患者>1级患者(P<0.01)。COPD患者外周血TLR7和IL-23、IL-17与CAT评分和肺功能GOLD分级呈正相关(P<0.01)。外周血TLR7和IL-23、IL-17预测COPD患者急性加重风险的曲线下面积分别为0.801、0.710、0.801,最佳截断值分别为58.79、35.95和47.66 ng/mL,敏感度分别为78.57%、57.14%、60.71%,特异度分别为72.41%、83.91%、83.91%;三者联合预测COPD急性加重风险的曲线下面积为0.915,敏感度为85.71%,特异度为86.21%,优于各指标单独预测(P<0.05)。以外周血TLR7和IL-23、IL-17最佳截断值将其分为阳性与阴性表达,将CAT评分和肺功能GOLD分级剔除后,外周血TLR7和IL-23、IL-17阳性表达是COPD急性加重风险的独立危险因素(P<0.01)。结论 外周血TLR7/IL-23/IL-17信号通路相关因子是COPD急性加重风险的独立预测因子,三者联合检测对COPD急性加重有可靠预测效能。

S100A9激活NF-кB促进小胶质细胞TLR7表达和炎症因子释放

目的:S100钙结合蛋白A9(S100A9)激活核因子κB(NF-κB)促进小胶质细胞toll样受体7(TLR7)的表达和炎症因子释放的作用及其机制研究。方法:CCK-8实验检测BV2小胶质细胞的增殖率;转录组测序并结合GO分析、KEGG富集分析和STRING数据库对差异基因(DEGs)进行比对并从差异表达基因中筛选出目标基因;Real time RT-PCR验证TLR7的表达;免疫荧光染色检测CD68、CD206的表达;Western Blot检测CD68、CD206、TLR7、p65、p-p65的表达;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果:中等浓度的S100A9对小胶质细胞无增殖抑制效应;实验组CD68蛋白的表达水平较对照组明显增加,而CD206蛋白的表达水平明显下降,提示S100A9促进BV2小胶质细胞向促炎型激活;Toll样受体4(TLR4)的抑制剂TAK-242明显抑制S100A9刺激BV2小胶质细胞后TNF-α和IL-6的表达水平;TLR4/NF-κB通路激活促进TLR7蛋白表达。结论:中等浓度的S100A9可以促进小胶质细胞向促炎型极化,通过激活TLR4/NF-κB通路促进TLR7表达和包括TNF-α和IL-6在内的多种炎症因子的释放,S100A9具有明显的促炎作用。

急性ITP患儿外周血中CD_4^+CD_(25)^+Foxp^(3+)Tr细胞、IL-7水平变化及意义

目的探讨急性特发性血小板减少性紫癜(AITP)的发病机制。方法选择35例AITP患儿(AITP组)和30例健康查体者(对照组),用流式细胞仪检测外周血CD4+CD2+5Foxp3+调节性T(Tr)细胞数量及占CD4+细胞比例,ELISA法检测血浆中IL-7水平。结果AITP组和对照组外周血CD4+CD2+5Foxp3+Tr细胞/CD4+细胞分别为0.11±0.04、0.15±0.02,IL-7分别为(2.32±0.53)、(0.44±0.80)pg/ml,P均<0.05;AITP组外周血IL-7水平与CD4+CD2+5Foxp3+Tr细胞/CD4+细胞呈负相关(r=0.71,P<0.05)。结论CD4+CD2+5Foxp3+Tr细胞数量减少、IL-7水平升高可能在AITP发病中具有重要作用,机制为降低有效免疫抑制作用,导致自身反应性T细胞激活增多、凋亡减少,促进血小板破坏。

不同临床分期湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平变化及其临床意义

目的:检测不同临床分期湿疹患者外周血中白细胞介素7(IL-7)和白细胞介素10(IL-10)的水平,并阐明其临床意义。方法:选择90例湿疹患者,分为急性期湿疹组、亚急性期湿疹组和慢性期湿疹组,每组各30例;选择同期行健康体检的志愿者30人作为对照组。采用RT-PCR法检测各组研究对象外周血中IL-7和IL-10mRNA的相对表达水平,采用ELISA法测定各组研究对象外周血中IL-7和IL-10水平。计算各组研究对象湿疹面积和严重程度指数(EASI)评分。分析湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平与EASI评分的相关性。结果:与对照组比较,各期湿疹组患者外周血中IL-7和IL-10 mRNA相对表达水平明显升高(F=3.1,P=0.04;F=4.73,P=0.02),外周血中IL-7和IL-10水平也明显升高(F=6.23,P<0.01;F=5.34,P=0.01)。湿疹组患者外周血中IL-7和IL-10水平与其对应mRNA相对表达水平(r=0.95,P<0.01;r=0.94,P<0.01)及EASI评分均呈正相关关系(r=0.88,P<0.01;r=0.89,P<0.01),且均随着患者病情严重程度的加重而升高。结论:湿疹患者外周血中IL-7和IL-10水平明显高于健康体检者,且与病情严重程度呈正相关关系。细胞因子IL-7和IL-10可能参与了湿疹的病理过程,检测其表达水平有助于评估疾病的严重程度。

犬白细胞介素-7基因对犬细小病毒DNA疫苗的免疫增强作用

【目的】白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,在促进B细胞、T细胞的形成和发育,在协同其它细胞因子提高机体免疫能力等方面发挥重要作用。本试验利用犬细小病毒VP2 DNA疫苗,在小鼠体内分析了犬白介素-7(cIL-7)基因的免疫增强作用。【方法】采用RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中扩增cIL-7基因,然后将cIL-7基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,分别构建成与Myc/His标签融合和非融合的cIL-7真核分泌型表达载体pcDNA-cIL7/MH和pcDNA-cIL7。由磷酸钙介导将pcDNA-cIL7/MH质粒转染HEK 293T细胞使其进行瞬时表达,以Western-blot检测构建的表达载体能否介导cIL-7基因在真核细胞中进行分泌表达。用已构建的VP2表达载体pcDNA-CD5-VP2与pcDNA-cIL7载体共免疫小鼠,并设pcDNA-CD5-VP2单免疫小鼠和pcDNA-cIL7单免疫小鼠作为对照。免疫后通过ELISA方法检测抗体水平,并通过淋巴细胞增殖实验和ELISA方法分别检测免疫后35 d小鼠脾脏淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素的表达水平。【结果】本试验扩增的cIL-7基因序列与GenBank中犬的序列完全一致。构建的表达载体能够介导cIL-7基因在HEK293T细胞中进行分泌表达。动物免疫试验结果显示,cIL-7与VP2共免疫组小鼠血清的抗体滴度和中和抗体效价分别极显著和显著高于VP2单免疫组(P<0.01和P<0.05);共免疫组小鼠淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平也显著高于VP2单免疫组(P<0.05)。【结论】cIL-7基因可增强小鼠对VP2 DNA疫苗的免疫应答反应。

白细胞介素-7在肠道病毒71感染所致的手足口病合并中枢神经系统损害患儿中的表达及对CD8^+T细胞功能的影响

目的观察白细胞介素-7(IL-7)在肠道病毒71感染(EV71)所致的手足口病(HFMD)合并中枢神经系统损害患儿中的表达,研究IL-7对CD8^+T细胞的调控作用。方法入组EV71感染所致的HFMD患儿48例(轻症HFMD 27例、伴有中枢神经系统损害的重症HFMD 21例),同时入组9例年龄、性别相匹配的健康对照者(HC)。分离血浆,纯化CD8^+T细胞,对重症HFMD患儿行腰椎穿刺术取脑脊液。酶联免疫吸附试验检测血浆和脑脊液中IL-7水平,实时定量PCR法检测CD127 mRNA相对表达量。使用重组人IL-7刺激纯化的CD8^+T细胞,观察分泌细胞增殖、分泌细胞因子和IL-7下游信号分子的表达变化。建立CD8^+T细胞和EV71感染的U-87MG细胞的直接接触和间接接触共培养系统,观察重组人IL-7对CD8^+T细胞功能的影响。结果伴有中枢神经系统损伤的重症HFMD患儿血浆中IL-7的表达水平较轻症HFMD和HC显著下降(P<0.000 1)。脑脊液IL-7水平在影像学正常和异常的重症HFMD之间的差异无统计学意义(P=0.218)。CD8^+T细胞绝对计数及CD127 mRNA在CD8^+T细胞中的相对表达量在HC、轻症HFMD和重症HFMD之间的差异无统计学意义(P>0.05)。重组人IL-7刺激不影响重症HFMD患儿外周血纯化的CD8^+T细胞的增殖,但可显著增加CD8^+T细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平,同时CD8^+T细胞中信号传导及转录激活因子5的磷酸化及细胞因子信号抑制物3的表达均显著升高。重组人IL-7刺激可增强重症HFMD患儿CD8^+T细胞的细胞杀伤功能,主要表现为IL-7刺激后直接接触培养系统中靶细胞的死亡比例以及分泌IFN-γ和TNF-α的水平增加,而间接接触培养细胞中靶细胞死亡比例未见显著变化。结论 IL-7在伴有中枢神经系统损伤的重症HFMD患儿中的表达降低可能影响CD8^+T细胞的杀伤功能。

密码子优化提高猪IL-7在HEK293T细胞表达的研究

为提高重组猪白细胞介素-7(pIL-7)在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达,依据人偏爱的密码子对pIL-7基因进行了优化修饰,然后用pcDNA3.1A质粒构建其与Myc/His-标签融合的真核表达载体。将此表达载体和过去构建的野生型pIL-7表达载体分别转染HEK293T细胞进行表达,利用镍-琼脂糖凝胶颗粒从培养基中纯化表达的重组pIL-7,比较二者的表达水平。结果显示,密码子优化后pIL-7基因在HEK293T细胞中的表达水平为(45±3.2)μg/T25细胞瓶,比野生型pIL-7基因的表达水平(21±1.8)μg/T25细胞瓶,提高了2倍多,可见密码子优化可明显提高重组pIL-7在HEK293T细胞中的表达。这为猪IL-7的生物学功能的研究提供了必要条件。

HCV病毒对中国HIV/HCV共感染者白细胞介素-7/白细胞介素-7受体的影响

目的:探讨HCV病毒对中国HIV/HCV共感染者白细胞介素-7(IL-7)/白细胞介素-7受体(IL-7R)的影响。方法:随机选取HIV单纯感染者、HIV/HCV共感染者及健康对照组每组各30例,抽血检查血浆IL-7水平、CD4+T细胞上IL-7R(CD127)的表达、CD4+T细胞数量,各组进行比较。结果 :HIV/HCV合并感染组IL-7水平(8.55±3.15)pg/mL与HIV单纯感染组(8.63±3.64)pg/mL无显著差异(P>0.05),但HIV/HCV合并感染组CD4+CD127+T细胞百分比(53.82±15.24)%及CD4+T细胞数量(210.58±112.95)个/μL较HIV单纯感染者(61.25±16.75)%、(301.65±181.54)个/μL明显下降(P<0.05)。结论:合并HCV病毒感染可能通过影响IL-7R进一步损害HIV患者细胞免疫功能。

人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建

目的 :构建人白细胞介素 7(h IL - 7)的真核表达载体。方法 :从人脾脏组织的总 RNA中 ,用 RT- PCR方法扩增出编码成熟 h IL- 7的 c DNA,将其克隆于 p MD18- T质粒中 ,并进行序列测定。再将 h IL - 7c DNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体 p BK- CMV质粒 ,转化至大肠杆菌 DH5α。最后将表达的 lacz- h IL - 7重组蛋白行SDS- PAGE电泳 ,并作考马斯亮蓝染色分析 ,western blot鉴定。结果 :h IL- 7序列测定结果与预期一致。p BK-CMV- h IL- 7(正义插入 )的克隆表达重组蛋白 ,western blot证实此蛋白为 IL- 7。结论 :成功构建了 h IL- 7的真核表达载体 ,为进一步研究 h IL- 7的抗肿瘤作用创造了条件。

转化生长因子β_1、白细胞介素2、7与卵巢上皮性癌患者腹腔局部免疫功能的关系

目的:探讨转化生长因子β1(TGFβ1)和白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-7(IL-7)与卵巢上皮性癌腹腔局部免疫功能的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,测定49例卵巢上皮性癌,18例卵巢良性上皮性肿瘤患者血清、腹腔液中TGFβ1和IL-2、IL-7水平,比较两组之间各细胞因子水平的差异性及其相互关系。结果:卵巢上皮性癌患者血清中TGFβ1、IL-2水平与良性对照组差异无显著性(P>0.05),IL-7水平则高于对照组(P<0.05);腹腔液中TGFβ1水平明显高于对照组(P<0.01),IL-2水平明显低于对照组(P<0.05),IL-7水平则与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。Ⅲ期患者腹腔液中TGFβ1水平明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.01)。卵巢上皮性癌患者血清与腹腔液中TGFβ1、IL-2相关性不显著,而IL-7水平存在正相关;卵巢上皮性癌患者血清中TGFβ1;、IL-2和IL-7水平两两之间均无明显相关性;但腹腔液中TGFβ1与IL-2、IL-7水平均存在显著的负相关,IL-2与IL-7水平则无明显相关性。结论:卵巢癌存在腹腔局部免疫缺陷,腹腔液中TGFβ1、IL-2和IL-7参与这一过程,且3者之间可能存在一定的关系。

白细胞介素7对肺结核患者Th1/Th2平衡的调节作用

目的探讨白细胞介素7(IL-7)对肺结核患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素10(IL-10)的影响。方法随机将20例肺结核患者和15名健康人PBMC分为RPMI1640组、PPD组、PPD+IL-7组、PPD+anti-IL-7组,培养72小时后收集上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组培养上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的水平。结果与PPD组相比,加入IL-7能有效促进肺结核患者及健康人PBMC分泌IFN-γ(108.6±62.0-156.8±78.6,201.2±60.4-290.3±108.4)和TNF-α(463.5±172.2-880.9±249.3,1163.0±381.6-1716.8±522.6),抑制IL-4(58.8±14.7-36.9±13.2,47.8±17.7-35.3±11.8)和IL-10(154.4±45.9-111.0±34.4,136.9±46.4-99.3±45.7)的合成;而加入anti-IL-7可抑制IFN-γ和TNF-α的分泌,促进IL-4和IL-10的合成。肺结核患者各组IFN-γ、TNF-α水平均低于健康人各对照组(P<0.05)。而IL-4、IL-10差异无显著性意义(P>0.05)。Ⅱ型肺结核患者组IFN-γ、TNF-α水平低于Ⅲ型肺结核患者组(P<0.05),IL-4、IL-10水平高于Ⅲ型肺结核患者组(P<0.05)。结论IL-7通过诱导IFN-γ、TNF-α分泌,抑制IL-4、IL-10合成,从而调节Th1/Th2平衡。