Intermedin／adrenomedullin 2及其受体在慢性低氧性肺动脉高压大鼠右心室的表达变化

本研究探讨了新发现的小分子生物活性肽intermedin／adrenomedullin 2(IMD／ADM2)及其受体在慢性低氧性肺动脉高压大鼠右心室中的变化和可能作用。用放射免疫分析法测定正常对照组和常压低氧4周组Sprague-Dawley大鼠血浆、右心室匀浆IMD／ADM2和肾上腺髓质素(adrenomednllin,ADM)蛋白水平;逆转录-多聚酶链反应法测定右心室IMD／ADM2、ADM及受体:降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR)、受体活性修饰蛋白1,2,3(receptor activity modifying protein 1,2,3,RAMP1,RAMP2,RAMP3)mRNA表达。结果显示:低氧组平均肺动脉压、右心室与左心室加室间隔重量比[RV／(LV+S)]显著高于对照组(均P<0．01);低氧组血浆和右心室组织匀浆ADM水平比对照组分别高1．26倍和1．68倍(P<0．01),IMD／ADM2水平则较对照组分别高0．90倍和1．19倍(P<0．01);与对照组相比,低氧组右心室IMD／ADM2、ADM mRNA表达均上调(P<0．01),RAMP2 mRNA表达增强(P<0．05),而两组间CRLR、RAMP1、RAMP3 mRNA的表达水平无显著性差异。结果表明,慢性低氧性肺动脉高压大鼠IMD／ADM2表达水平升高。

Intermedin^(1-53)保护异丙基肾上腺素诱导的心肌损伤

目的在异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠急性心肌损伤的模型上探讨Intermedin153(IMD153)对心肌损伤的保护作用。方法用ISO建立大鼠缺血损伤模型,观察IMD153对心脏功能和心肌组织损伤影响;半定量RTPCR检测心室肌降钙素受体样受体(calcitoninreceptorlikereceptor,CL)、受体活性修饰蛋白(receptoractivitymodifyingprotein,RAMP)1/2/3的mRNA表达水平;放射免疫法测定心肌cAMP的含量和放射配基法测定心肌浆膜IMD受体结合位点。结果与对照组比较ISO组大鼠的左室内压变化速率(±LVdp/dtmax)分别降低23%和44%(均P<0.01),左室舒张末压(leftventricularenddiastolicpressure,LVEDP)增高7.8倍(P<0.01),心室肌CL、RAMP1/2/3的mRNA水平均明显上调(除RAMP2P<0.05,均P<0.01),ISO组心肌浆膜IMD受体Bmax值升高118%〔(83.05±5.75)vs(38.10±1.85)pmol·g-1Pro,P<0.01〕;与单纯ISO组比较,IMD可呈剂量依赖性减轻心内膜下心肌缺血损伤,改善心功能,高剂量Intermedin治疗组大鼠优于低剂量组。结论ISO诱导的缺血损伤心肌的IMD受体上调,而IMD153对心肌缺血损伤具有明显的保护作用。

Intermedin_(1-53)对两肾一夹高血压大鼠的影响及其机制

目的观察Intermedin1-53(IMD1-53)对两肾一夹(2-kid-ney1-clip,2K1C)高血压大鼠的影响作用及其机制。方法采用2K1C复制肾性高血压大鼠模型;检测心功能,免疫组化法检测心脏IMD的水平;放射免疫学方法检测血浆中IMD和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的含量;采用硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,Griess化学比色法测定血清中一氧化氮合酶(nitric oxidesythase,NOS)活性。结果 2K1C高血压大鼠心功能抑制,心脏IMD的水平及血浆中IMD和AngⅡ的含量升高,血清中NO、NOS的含量降低;与2K1C组比IMD1-53组大鼠心功能明显改善,血浆中AngⅡ的含量降低,血清中NO和NOS的含量升高,差异均有显著性。结论 IMD在2K1C时表达升高,外源性IMD具有明显降低肾性高血压的作用,其降压作用机制可能与增加NO/NOS有关。

大鼠肾脏缺血再灌注损伤中Intermedin及其受体表达的变化

目的观察大鼠肾脏缺血/再灌注损伤(IRI)模型中,血管活性肽Intermedin(IMD)及其受体系统降钙素受体样受体(CRLR)、受体活性修饰蛋白(RAMPs)在肾组织表达的变化。方法健康雄性Wistar大鼠16只随机分为假手术组和IRI组,双侧肾动脉夹闭45min、再灌注12h制备IRI模型。比色法测定血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)的浓度;放射免疫分析法测定血浆、肾组织IMD及血浆肾上腺髓质素(ADM)的含量;半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾组织IMD、ADM、CRLR、RAMPs的mRNA表达。结果与假手术组相比,IRI组大鼠SCr和BUN明显升高(P<0.05);血浆和肾组织的IMD含量增加(分别升高了53.76%、36.85%),血浆ADM含量升高了143.22%(均P<0.05);IRI组大鼠肾组织IMD、ADM、CRLR、RAMP1、2、3的mRNA表达较假手术组均上调(分别升高了22.1%、41.1%、32.8%、33.7%、35.9%、29.4%,均P<0.05)。结论肾脏IRI过程中IMD及其受体系统表达增加,可能参与了肾脏IRI的病理生理过程。

Intermedin对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注炎性细胞因子的影响

目的观察Intermedin对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后炎性细胞因子的影响,从而进一步探讨Intermedin对糖尿病心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法健康雄性SD大鼠74只,给予适应性饲养一周后,将74只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组(50只)和非糖尿病组(24只)。非糖尿病组给予枸橼酸缓冲液腹腔注射,糖尿病组建立糖尿病大鼠模型,通过腹腔注射链脲佐菌素复制I型糖尿病大鼠模型。然后阻断大鼠冠状动脉左前降支30 min制备心肌缺血再灌注损伤模型。将成功造模的大鼠随机分为5个实验组:对照组(NS)、缺血再灌注组(NIR)、糖尿病组(DS)、糖尿病缺血再灌注组(DIR)和应用Intermedin干预的治疗组(IMD)。应用ELISA法测定血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量。应用RT-PCR法检测心肌组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的m RNA的表达。免疫组织化学S-P法和Western-blot检测心肌组织NF-κB的表达。结果与各自对照组和糖尿病组比较,NIR组与DIR组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量升高(P<0.05)。但是同DIR组比较,IMD组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量则明显降低。(P<0.05)。NIR组和DIR组大鼠心肌组织中TNF-α、IL-6、IL-1βm RNA表达与各自对照组和糖尿病组比较均明显增强(P<0.05)。IMD组TNF-α、IL-6、IL-1βm RNA表达比DIR组明显减弱(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,当心肌缺血再灌注后其心肌组织中可观察到核移位的现象,即在NIR组和DIR组中NF-κB活化增强,阳性颗粒出现在胞浆和胞核。而在对照组和糖尿病组大鼠心肌组织中观察到NF-κB呈低表达状态,并且阳性表达出现在胞浆中。同DIR组相比较,IMD组NF-κB的表达活性将低,阳性表达的细胞数明显减少(P<0.05)。Western blot结果显示:分别与对照组和糖尿病组相比较,NIR组和DIR组NF-κB表达量均显著增加(P<0.05),而IMD组NF-κB表达显著低于DIR组(P<0.05)。结论 Intermedin对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注具有保护作用,其部分保护作用机制可能与intermedin可以抑制NF-κB活化,从而减少炎性因子如TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,减轻炎症反应有关。

小蓟醇提物对肾性高血压大鼠血浆Intermedin的干预影响

目的探讨小蓟醇提物对两肾一夹(2-kidney1-clip,2K1C)高血压大鼠血浆Intermedin(IMD)变化的影响。方法采用2K1C复制肾性高血压大鼠模型;免疫组化法检测心脏、肾脏和腹主动脉IMD的水平;放射免疫学方法检测血浆中IMD和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的含量;采用硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,Griess化学比色法测定血清中一氧化氮合酶(nitric oxide sythase,NOS)活性。结果与正常组比模型组大鼠心脏、肾脏和腹主动脉IMD的水平及血浆中IMD和AngⅡ的含量升高,血清中NO和NOS的含量降低;与模型组相比,小蓟组大鼠心脏、肾脏和腹主动脉IMD的蛋白增加,血浆中IMD的含量、血清中NO和NOS的含量均升高,血浆中AngⅡ的含量降低,差异均有显著性。结论小蓟对肾性高血压有降压作用,该作用可能是通过调节IMD及其NO/NOS通路实现的。

大蓟醇提物对两肾一夹高血压大鼠Intermedin变化的影响

目的探讨大蓟提取物对两肾一夹(2-kidney1-clip,2K1C)高血压大鼠Intermedin(IMD)变化的影响。方法采用2K1C复制肾性高血压大鼠模型;检测心功能、左心重与体重比值(LVM/BW)及右肾重与左肾重比值(RK/LK);免疫组化法检测心脏、肾脏和腹主动脉IMD的水平;放射免疫学方法检测血浆中IMD和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的含量;采用硝酸还原酶法测定血清中一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,Griess化学比色法测定血清中一氧化氮合酶(nitric ox-ide sythase,NOS)活性的变化。结果与正常组相比,模型组大鼠心功能抑制,RK/LK和LVM/BW比值升高,心脏、肾脏和腹主动脉IMD的水平及血浆中IMD和AngⅡ的含量升高,血清中NO和NOS的含量降低;与模型组相比,大蓟组大鼠心功能明显增强,RK/LK和LVM/BW比值及血浆中AngⅡ的含量降低,心脏、肾脏和腹主动脉IMD的水平升高,血浆中IMD的含量、血清中NO和NOS的含量升高,差异均有显著性。结论大蓟通过增加IMD的含量激活NO/NOS对肾性高血压有降压作用。

Intermedin预处理对大鼠肾缺血离体再灌注损伤的保护作用

目的:探讨IMD预处理对大鼠肾缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用。方法:用动脉夹夹闭大鼠左侧肾蒂1h再灌注1h的手术方法制成急性肾缺血再灌注损伤动物模型,将动物分为对照组、肾I/R组、IMD高、低剂量预防组、ADM预防组,检测离体肾脏流出液量及其中乳酸脱氢酶(LDH)含量、肾脏组织过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,肾组织光镜下形态学观察。结果:与单纯肾I/R组相比,IMD高、低剂量组和ADM组均显著增加了离体肾脏流出液量(P<0.01),均显著降低了乳酸脱氢酶活性(P<0.01),均显著增加了离体肾脏的T-SOD和CAT活性(P<0.001);且IMD低剂量组的作用更加显著(P<0.05),均明显抑制了MDA的生成(P<0.001),形态学显示肾I/R组肾小球结构异常,细胞坏死、混浊肿胀或凋亡,基底膜剥脱,IMD高、低剂量组和ADM组肾小球结构基本正常,仅有中、重度空泡形成(P<0.01)。结论:IMD、ADM预处理对肾I/R损伤有保护作用,其机制可能与清除自由基、减轻脂质过氧化有关。

Intermedin1-53对大鼠心血管功能的影响及机制探讨

目的:研究Intermedin1-53(IMD1-53)对大鼠心脏及血管功能的影响及其作用机制。方法:采用Langendorff方法灌流离体心脏,记录IMD1-53灌流下心功能的变化,并以静脉注射给药方法观察IMD1-53对动脉血压的影响,同时检测心脏及血管组织cAMP含量。结果:IMD1-53灌注明显增强心功能,LVSP,+dp/dtmax和-dp/dtmax较对照组分别增加45%,51%和37%,并增加冠脉流量。IMD1-53增强心功能的作用可被PKA抑制剂H-89阻断。IMD1-53灌流后的心肌组织cAMP含量升高131%。此外,IMD1-53静脉注射可降低大鼠动脉血压和心率,同时经IMD1-53孵育的血管组织cAMP含量升高236%。结论:IMD1-53有明显的增强心功能及降压作用,该作用可能与cAMP途径有关。

COPD稳定期合并肺动脉高压患者的Intermedin、尾加压素Ⅱ水平观察

目的探讨血浆Intermedin(IMD)、尾加压素Ⅱ(UⅡ)水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发肺动脉高压(PH)的相关性。方法应用超声心动图测定65例老年COPD稳定期患者的肺动脉压(PAP),根据是否存在PH将患者分为PH组30例和无PH组35例;另择健康查体者30例作为对照组。比较三组血浆IMD、UⅡ含量,分析血浆IMD、UⅡ含量与PAP和动脉血氧分压(PaO2)的相关性。结果 PH组和无PH组的血浆IMD含量较对照组均明显降低(P均<0.05),血浆UⅡ含量较对照组均明显升高(P均<0.05);PH组IMD含量明显低于无PH组(P<0.05),血浆UⅡ含量明显高于无PH组(P<0.05);PH组PAP与血浆IMD含量呈显著负相关(r=-0.83,P<0.05),与血浆UⅡ含量呈显著正相关(r=0.72,P<0.05)。结论 IMD、UⅡ在PH形成和血管收缩及舒张中起重要作用,其失衡及血管重塑可能是COPD发展为PH的基础,血浆IMD及UⅡ含量可作为判断PH严重程度的指标之一。

Intermedin对缺氧/复氧诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的影响

急性肾衰竭是临床常见危重症,其病因中,肾前性氮质血症和缺血性急性肾小管坏死占75%[1],目前认为肾脏缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤是导致缺血性急性肾衰竭的重要机制之一。细胞凋亡参与了这个损伤过程,抑制细胞的凋亡能减轻肾脏I/R损伤[2]。垂体中叶素（intermedin,IMD）是2004年发现的降钙素基因相关肽超家族新成员[3,4],

Intermedinl-53抑制血管钙化的新机制

血管钙化是动脉粥样硬化、高血压、糖尿病血管病变、血管损伤、慢性肾病和衰老等普遍存在的病理表现。研究发现血管局部旁／自分泌的活性因子在血管钙化的发生和发展中具有重要的调节作用。我们前期工作发现Inte^edin（IMD）可通过上调MGP的表达并增加羧基化MGP水平抑制BMP2信号通路，从而下调Cbfa-1的基因表达，抑制血管平滑肌细胞（VSMC）向成骨样细胞表型转化从而抑制血管钙化[CardiovascRes，2010]；

Intermedin在两肾一夹高血压大鼠中的表达

目的观察Intermedin(IMD)在两肾一夹(2-kidney1-clip,2K1C)高血压大鼠肾脏和腹主动脉中的变化及其意义。方法采用2K1C复制肾性高血压大鼠模型,随机分为正常组、模型组。分别测定平均颈动脉压(mCAP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力变化最大速率(LV±dp/dtmax),左心重与体重比值(LVM/BW)及右肾重与左肾重比值(RK/LK)。免疫组化法检测IMD的水平。结果模型组大鼠mCAP和LVEDP比正常组升高48.23%、340%(P均<0.01),LV+dp/dtmax和LV-dp/dtmax降低51.26%和24.65%(P均<0.01),LVM/BW以及RK/LK升高36.77%(P<0.05)、26.35%(P<0.01);与正常组比较模型组肾脏和腹主动脉IMD的含量分别增加了26.15倍和4.80倍(均P<0.01)。结论肾性高血压大鼠引起肾脏和腹主动脉IMD蛋白表达增加,其变化可能参与了肾性高血压的发病过程。

心肌纤维化大鼠Intermedin_(1-53)及其受体的变化

目的在大鼠心肌梗死致心肌纤维化模型上观察Intermedin1-53及其受体的变化。方法通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型,4周后检测心功能,梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,IMD1-53和心室肌降钙素受体样受体(CL)、受体活性修饰蛋白(RAMP)1/2/3的mRNA表达。结果与假手术组比较模型组大鼠的心功能明显减低,检测梗死区心肌组织的Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达增加,心室肌IMD1-53、CL、RAMP1/2/3的mRNA水平分别上调75%(P<0.01)、57%(P<0.05)、61%(P<0.01)、48%(P<0.05)和80%(P<0.05)。结论心肌纤维化大鼠的心肌IMD1-53及其受体明显上调,其变化可能参与心肌纤维化的发病过程。

败血症休克大鼠肺组织Intermedin含量及其mRNA表达

目的:观察败血症休克大鼠血浆和肺组织中intermedin(IMD)含量和mRNA表达变化情况。方法:盲肠结扎穿孔法制备大鼠腹膜炎早、晚期败血症休克(Early sepsis,ES;Late sepsis,LS)模型,放射免疫法测定血浆和肺组织IMD含量。半定量RT-PCR测定肺组织IMD mRNA水平。结果:与对照组相比,ES大鼠血浆和肺组织IMD含量分别增加609.3%和39.9%(P<0.001),与ES大鼠相比较,LS大鼠血浆IMD浓度增高60.6%(P<0.001),而肺组织IMD浓度无明显变化(P>0.05);与对照组相比,LS大鼠肺组织IMDmRNA表达水平增高135.4%(P<0.001);但ES大鼠则无明显变化(P>0.05)。结论:IMD在败血症休克大鼠血浆和肺组织中显著增加,参与了休克的病理生理过程,但机制不明。

败血症休克大鼠血浆和心血管组织中Adrenomedullin与Intermedin的变化

目的探讨腹膜炎败血症休克大鼠血肾上腺髓质素(ADM)和IMD的变化。方法在SD大鼠用结扎肓肠和穿孔的方法复制大鼠腹膜炎败血症休克模型,术后10h为早期败血症(ES),术后20h为晚期败血症大鼠(n=7)血浆ADM和IMD分别增加196.5%和609.3%(P&lt:0.001),主动脉含量分别增加30%和75.2%(P【0.01),左心室含量分别高67.1%和36.2%(P均【0.01);与休克早期大鼠相比较,晚期败血症大鼠血浆ADM和IMD分别增加31.5%和60.6%(P均&It;0.001),胸主动脉ADM增高32.8%,IMD降低23.5%(P分别&It;0.05和0.01),左心室ADM增加42.5%,IMD减少74.2%(P分别&It;0.05和0.01)。休克早晚期血浆、动脉和心脏ADM/IMD均增加(P均【0.05)。结论ADM和IMD在败血症休克大鼠血浆和心血管组织中显著增加,参与了休克的病理生理过程。

冠心病患者活性肽Intermedin水平及临床意义

目的测定冠心病患者血浆Intermedin(IMD)浓度,探讨活性肽IMD与冠状动脉粥样硬化、冠心病的关系以及临床意义。方法随机选取冠心病患者58例,根据冠状动脉造影结果,按冠状动脉狭窄的程度分4组;按狭窄的血管支数分为单支组、双支组、多支组、0支组。随机选取同期查体健康者22例作为对照,年龄(56.36±9.72)岁。采用同批酶联吸附法测定血浆IMD浓度。应用SPSS11.5进行数据统计分析结果冠心病组血浆IMD水平(2.56±0.78mg/L)明显高于对照组(1.85±0.31)mg/L(P<0.01);不同狭窄程度冠状动脉病变的组间血浆IMD水平有显著差异(P<0.01);冠状动脉狭窄不同支数组间血浆IMD水平无显著差异(P=0.27)。结论随冠状动脉病变程度加重,冠心病患者血浆IMD水平出现升高幅度降低,与冠状动脉病变支数无关。

Intermedinl-53通过激活AMPK抑制内质网应激减轻心肌肥厚

目的Intermedin（IMD）是近年发现的降钙素基因相关肽家族新成员，具有调节心血管系统功能稳态的作用。本课题在腹主动脉缩窄（abdominalaortaconstriction，AAC）导致高血压心肌肥厚模型上研究IMDl-53在心肌肥厚中的作用和机制。方法腹主动脉缩窄制备大鼠心肌肥厚模型，检测AAC后2．4、8周心脏中IMD及其受体mRNA及蛋白的表达变化；AAC术后24h皮下植入微量渗透泵，

Intermedin_(1-53)对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:研究intermedin1-53(IMD1-53)对醛固酮(ALD)促SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导途径的作用。方法:分离培养SD乳鼠CFBs,将细胞分成对照组、不同浓度ALD组、ALD+不同浓度IMD1-53组,用MTT比色法测定细胞活性。通过Western blotting方法观察IMD1-53对ALD诱导的p-ERK蛋白表达的影响。结果:(1)IMD1-53对基础状态下的CFBs增殖无明显抑制作用,但能呈浓度(10-9～10-7mol/L)依赖性地抑制ALD刺激CFBs的增殖。(2)IMD1-53具有浓度(10-9～10-7mol/L)依赖性地抑制ALD诱导的p-ERK蛋白表达的作用。结论:IMD1-53通过ERK信号途径抑制ALD促CFBs增殖的效应。