微囊藻胞内毒素的批量快速提取方法研究

针对目前胞内微囊藻毒素提取方法步骤复杂且提取效率低的现状,提出了一种高效的快速提取藻胞内毒素的方法体系,采用对鲜藻进行匀浆超声后测定含水量,1.5 m L 75%甲醇溶液一次性、低温静置提取干重为2~5 mg藻样12 h的步骤。该方法测定胞内毒素MC-RR和MC-LR的相对标准偏差依次为4.1%和4.6%(n=9),检测方法的最低浓度可达0.03 mg/g;对比试验表明该方法和Harada方法、沸水浴方法对胞内藻毒素提取效率无差异显著性,但Harada方法操作过程繁琐、沸水浴提取方法对HPLC色谱柱有一定损伤,2种方法实际应用价值均不大。总之,该方法简单高效,可充分满足微囊藻胞内毒素含量的HPLC检测所需稳定性和精度的需要,适用于常规实验室进行大批量藻类样品的毒素快速提取分析工作。

内皮素对培养心肌细胞内游离钙浓度的作用

实验用培养新生ＳＤ 大鼠心室肌细胞， 以Ｆｕｒａ２／ＡＭ 荧光指示剂负载检测心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２ ＋ ］ｉ） 的变化， 探讨内皮素１（ＥＴ１） 对［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 的作用及其机制。结果显示：ＥＴ１ 引起心肌细胞［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 升高有两个时相， 瞬时相和持续相。ＥＴ１ 诱导的瞬时相［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 升高呈浓度依赖性， 预先用ＥＴＡ 特异性受体阻断剂ＢＱ１２３ 处理， 可阻断ＥＴ１ 引起的［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 升高，提示上述作用是通过ＥＴＡ 受体介导的； 除去胞外Ｃａ２ ＋ 后，ＥＴ１ 仅引起瞬时相的［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 升高，持续相消失；ＰＫＣ 的激活剂ＰＭＡ预处理， 能明显减弱ＥＴ１ 诱导的瞬时相［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 的升高。氨氯吡咪和硝苯吡啶不能阻断ＥＴ１ 诱发的［Ｃａ２ ＋ ］ｉ变化； 用百日咳毒素（ＰＴＸ） 预处理细胞２４ ｈ ，ＥＴ１仍可诱导瞬时相的［Ｃａ２ ＋ ］ｉ升高， 但持续相消失。以上结果表明： 瞬时相［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 升高可能与百日咳毒素不敏感的Ｇ蛋白有关， 持续相主要由胞外Ｃａ２ ＋ 内流引起的， 并与ＰＴＸ 敏感Ｇ蛋白有关。蛋白激酶Ｃ 在该效应中起重要作用，Ｎａ＋ ／Ｈ＋ 交换在ＥＴ１ 引起的［Ｃａ２ ＋ ］ｉ ?

香丹注射液细菌内毒素检查法的研究概况

目的 :系统介绍香丹注射液细菌内毒素检查法的研究情况。方法 :以国内公开发表的论文为基础 ,对香丹注射液细菌内毒素检查法进行介绍。结果 :应用细菌内毒素检查法检测香丹注射液共有 11篇文章。结论 :细菌内毒素检查法检查香丹注射液内毒素是可行的 ,但必须加快对香丹注射液细菌内毒素检查法的研究步伐和论证 ,尽早将其热原检查法改为细菌内毒素检查法。

利用志贺毒素B亚基融合蛋白研究其胞内降解作用

志贺毒素B亚基(StxB)能与哺乳动物细胞表面受体糖脂Gb3特异结合内吞进入细胞,经早期胞内体/循环胞内体到达高尔基体后,再逆向运输至内质网。目前研究尚不明确StxB在胞内运输时是否发生降解。本文利用基因工程原理在StxB的C端添加Myc标签,获得融合蛋白StxB-Myc,应用免疫荧光方法,研究StxB的C端是否发生水解。实验结果表明,融合蛋白StxB-Myc在从细胞膜经胞内体到达高尔基体的过程中不发生水解;进入高尔基体后,B亚基C端发生降解,降解后的小片段能逐渐进入溶酶体中发生水解,而此过程不影响降解后的B亚基到内质网的逆向运输。

血活素注射液细菌内毒素检查法

目的:建立一种血活素注射液中细菌内毒素检查法。方法:鲎试剂检测原料、半成品、成品,灵敏度0.25EU·ml^(-1)。结果:鲎试剂法可用于血活素注射液检测。结论:此法简便、灵敏、准确。

重组人透明带3肽段rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发顶体反应及其机制

目的探讨大肠杆菌重组表达的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348生物学特性和功能，研究rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348能否诱发人精子顶体反应及其相关机制。方法rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应用金霉素染色法进行评价，同时研究了G特异蛋白抑制剂白日咳毒素（PTX）、钙离子螯合剂EGTA和T型钙通道抑制剂pimozide对rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发人精子顶体反应的影响；同时用荧光分光光度计监测rhuZP3a^22-176或rhuZP3b^177-348刺激获能精子胞内钙（[Ca^2＋]i）浓度的变化。结果不同浓度的rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348均能诱导人精子AR，其中rhuZP3a^22-176诱导人精子AR呈浓度依赖方式。PTX、EGTA和pimozide可以分别抑制rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应。rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348诱发的顶体反应是由于刺激获能人精子[Ca^2＋]i升高所致，但rhuZP3a^22-176诱发[Ca^2＋]i升高的方式与rhuZP3b^177-348诱发[Ca^2＋]i升高方式不尽相同，rhuZP3a^22-176只能引起[Ca^2＋]i升高，而rhuZP3b^177-348既有[Ca^2＋]i升高，又伴有持续升高。上述精子[Ca^2＋]i升高可被EGTA和pimozide抑制。结论rhuZP3a^22-176和rhuZP3b^177-348通过激活G蛋白使胞外钙通过T型钙通道内流促使[Ca^2＋]i上升，从而引起精子顶体反应，这与人类天然ZP3诱导顶体反应作用相似。

一株林麝肺源创口博德特氏杆菌全基因组及细胞致死性肿胀毒素分析

【目的】为探究林麝的死亡原因,本研究无菌采集1只死亡林麝肺脏后进行细菌的分离鉴定。【方法】通过细菌分离纯化、生化试验和16S rRNA序列分析,对分离菌株进行鉴定;然后通过药敏试验、全基因组测序与分析以及细胞致死性肿胀毒素(cytolethal distendin toxin subunit B,CDTB)分析,对分离菌株耐药性和致病性进行研究。【结果】在死亡林麝肺脏中分离出1株革兰阴性菌,经鉴定为创口博德特氏杆菌,命名为ZL0001。经过细胞培养观察和CDTB分析表明该菌为胞内寄生菌,含有细胞致死性肿胀毒素,能导致细胞凋亡。药敏结果表明该分离株对氨苄西林、亚胺培南、链霉素和四环素等药物敏感;对氨曲南、林可霉素、克林霉素和呋喃妥因耐药。全基因组测序分析结果表明,该菌株与其他创口博德特氏杆菌的平均核苷酸一致性(average nucleotide identity,ANI)值均>97%,基因组大小为4350644 bp,共发现22个耐药相关基因。此外,该菌株基因组包含63个毒力相关基因,其参与鞭毛蛋白、脂多糖、铁摄取、抗血清蛋白以及细胞致死性肿胀毒素等毒力因子的合成。【结论】本研究首次在动物呼吸道中分离出创口博德特氏杆菌,并证明其为胞内寄生菌,对林麝肺炎的发病机理研究具有重要意义。