山茱萸环烯醚萜苷的化学成分及生物活性研究进展

山茱萸是我国药食两用的大宗药材之一,广泛应用于内外妇儿各类患者及保健品的开发等。山茱萸环烯醚萜苷(cornel iridoid glycosides, CIG)为山茱萸的特征活性成分群,综述近10年的文献报道,已有103种CIG被分离鉴定。研究将对CIG的化学成分、裂解规律、体内代谢产物研究进行归纳总结,并从药理药效、作用通路及分子机制等方面综述CIG在降血糖、神经保护、心脏保护、肝脏保护、肾脏保护、睾丸保护等多种生物活性的研究进展,以期为CIG进一步的研究、开发及应用提供新的思路。

山茱萸提取物对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗与脂肪分解的影响

目的观察山茱萸环烯醚萜苷类提取物对3T3-L1成熟脂肪细胞葡萄糖消耗及异丙肾上腺素(ISO)诱导脂肪分解的影响,探讨其分子机制。方法葡萄糖氧化酶法测定0.04、0.2、1g/L浓度山茱萸提取物干预24h后对脂肪细胞葡萄糖消耗量的影响;比色法测定干预2d后ISO 30min诱导脂肪细胞脂肪分解的甘油释放量;Real-time PCR法检测干预2d后脂肪细胞AMPK、GLUT4和HSL mRNA表达水平,Western blot检测药物对AMPK、ACC蛋白磷酸化的影响。结果 1g/L山茱萸提取物干预成熟脂肪细胞24h后可增加葡萄糖消耗,干预2d后可明显抑制不同浓度ISO诱导的脂肪分解,0.2、0.04g/L提取物可抑制低浓度ISO诱导的脂肪分解;各浓度提取物干预2d可不同程度上调AMPK、GLUT4mRNA水平,下调HSL mRNA表达,1g/L浓度时AMPK、ACC磷酸化水平升高。结论山茱萸提取物可能通过上调AMPK基因表达的相关途径增加3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗并抑制ISO诱导的脂肪分解。

山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病肾病变的保护作用

目的 研究山茱萸环烯醚萜总苷 (HXMTZG)对链脲佐菌素 (STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病变 (DN)的保护作用。方法大鼠ipSTZ 6 0mg/kg ,1周后血糖值高于 16 .7mol/L者则纳为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠随机分为模型组、氨基胍 (AG)组 (0 .1g/kg ,ig)和HXMTZG组 (0 .5、1.0g/kg ,ig) ,同期另设正常组 ,各组连续灌胃给药 12周。实验结束后测定血糖和尿微量白蛋白 (UMA) ,取肾脏经HE和PAS糖原染色后进行光镜检查。结果 模型组大鼠血糖、UMA排出量均高于正常组 ,HXMTZG及AG对血糖基本无降低作用 ,但两者均能显著降低UMA的排出 (P <0 .0 1) ;光镜检查显示模型组呈现早 -中期糖尿病肾病变 ,而HXMTZG及AG组均能不同程度地减轻肾小球系膜增生、GBM增厚、糖原沉积及AE透明变等。结论HXMTZG能延缓实验性DN大鼠的发生与发展 。

山茱萸环烯醚萜总苷对晚期糖基化终末产物诱导的肾系膜炎症反应的调节

目的探讨山茱萸环烯醚萜总苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的大鼠肾系膜HBZY-1细胞炎症反应的影响以及可能的作用机制。方法采用巨噬细胞和肾系膜细胞共培养体系,评估巨噬细胞的迁移能力;采用ELISA试剂盒评估炎症因子的分泌水平;采用Western blot分析法评估炎症相关蛋白的表达。结果与AGEs诱导的模型组相比,山茱萸环烯醚萜总苷显著抑制AGEs诱导的巨噬细胞迁移能力,不同剂量山茱萸环烯醚萜总苷(1.0、0.5、0.25mg/mL),对巨噬细胞迁移抑制率分别为42.09%±7.25%、26.44%±10.23%、20.84%±6.84%;山茱萸环烯醚萜总苷显著抑制AGEs诱导的炎症因子IL-6,IL-10,MCP-1和TNF-α的分泌水平;Western blot分析显示山茱萸环烯醚萜总苷及AGEs受体特异性抗体显著下调AGEs诱导的ICAM-1和TGF-β1的蛋白表达。结论山茱萸环烯醚萜总苷可剂量依赖性地减轻AGEs诱导的大鼠肾系膜细胞HBZY-1炎症反应,对糖尿病肾病的发生发展具有一定的保护作用。

山茱萸环烯醚萜总苷对2型糖尿病心脏病变大鼠胰岛素抵抗及血脂含量的影响

目的:观察山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对2型糖尿病心脏病变大鼠胰岛素抵抗及血脂含量的影响。方法:大鼠以高脂饲养结合STZ腹腔注射造模,2周后灌胃给予ICO(0.1,0.2g/kg)或氨基胍(AG,0.1g/kg)治疗,连续16周。检测体重、空腹血糖、血清Ins、Ins-Ab、CHOL、TG、HDL-C及LDL-C含量;分离心脏进行形态学观察。结果:模型组大鼠体重、血糖、Ins-Ab、IR、CHOL、TG、LDL-C明显升高,Ins水平显著降低;光镜检查显示心肌肥大伴程度不等的间质水肿和组织细胞增生,心内膜或心包膜有轻度炎症及纤维化。ICO及AG组大鼠体重、血糖、Ins-Ab、IR、CHOL、TG、LDL-C均明显降低,心肌肥大程度减轻。结论:ICO对2型糖尿病心脏病变有一定的保护作用。

山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病心脏病变的保护作用

目的研究山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对实验性糖尿病心脏病变的保护作用。方法以高脂饲养结合STZ腹腔注射造模。于造模后2周分别灌胃给予降糖通脉(JTTM)胶囊(0.8 g/kg)I、CO(0.05、0.10、.2 g/kg)治疗,连续16周。检测空腹血糖、血清NO、NOS、血浆ET含量,取心脏计算心指数,并采用光镜观察其形态学改变。结果模型组大鼠空腹血糖升高,血清NO、NOS水平明显降低,血浆ET水平明显升高,心指数增加(P<0.05,P<0.01)。光镜检查显示模型大鼠心肌肥大,伴程度不等的间质水肿和组织细胞增生;心内膜或心包膜有轻度炎症及纤维化。应用ICO及JTTM后,糖尿病大鼠血糖降低,血清NO、NOS水平升高,血浆ET水平降低,心指数降低,心肌肥大程度减轻。结论ICO对糖尿病心脏病变有一定的保护作用。

山茱萸不同部位4种环烯醚萜苷成分含量比较研究

目的建立HPLC法同时测定山茱萸药材中莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷I含量的方法,并比较不同部位中4种成分的差异。方法采用Diamonsil Plus C_(18)-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-0.3%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长240 nm和270 nm。结果 4种成分在山茱萸果肉、果梗和果核中的含量存在显著差别。果肉中莫诺苷和马钱苷的含量显著高于果梗及果核,当药苷在果核中含量最高,山茱萸新苷I在果梗中含量最高。结论山茱萸不同部位化学成分存在显著差异,建议去核入药。

HPLC-QAMS法测定不同产地19批山茱萸中5种环烯醚萜苷类成分的含量

目的:测定不同产地19批山茱萸中5种环烯醚萜苷类成分的含量。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-一测多评(QAMS)法。色谱柱为Agilent XDB-C_(18),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为35℃,进样量为15μL,检测波长为240nm。以山茱萸中的马钱苷为内参物,建立其与山茱萸中另外4种环烯醚萜苷类成分即莫诺苷、当药苷、山茱萸苷和山茱萸裂苷之间的相对校正因子并进行适用性评价后计算4种成分的含量;另采用HPLC-外标法测定19批药材中上述5种成分的含量,比较两种方法测定结果的差异,验证QAMS法的准确性。结果:在适用性评价中,不同试验条件下4种成分的相对校正因子的RSD均小于2%;两种测定方法下,4种成分的含量比较差异均无统计学意义(P均大于0.05)。结论:本研究建立的HPLC-QAMS法可用于山茱萸中5种环烯醚萜苷类成分的含量测定,且方法准确、可靠、快速,成本更低。

山茱萸环烯醚萜苷类成分的研究进展

山茱萸为临床常用大宗药材,其环烯醚萜苷类成分是研究最深入、最具有开发前景的主要活性成分之一。文章对2015年1月至2019年10月关于山茱萸环烯醚萜苷类成分的研究进展进行综述。已有文献报道的山茱萸环烯醚萜苷类成分共66种,从药理活性、分子机制及作用通路多个方面综述其对糖尿病及并发症、脑组织、神经系统及肝损伤的保护作用、抗炎及调节毛发生长的生物活性,以期为山茱萸环烯醚萜苷类成分的深入研究、开发和利用挖掘新的思路和方向。

基于莫诺苷转化的山茱萸环烯醚萜苷提取工艺

目的:基于莫诺苷转化现象研究山茱萸环烯醚萜苷的提取工艺。方法:采用正交试验法,优选山茱萸环烯醚萜苷提取工艺。结果:山茱萸中环烯醚萜苷的最佳提取工艺为:以水做提取溶剂,加10倍量水,提取3次,每次80 min,莫诺苷转移率为145%,马钱苷为92%。结论:优选所得山茱萸提取工艺稳定、合理,可大量提高莫诺苷的提取量。

星点设计-响应面法优化山茱萸总苷的提取及纯化工艺

目的:采用星点设计-响应面法优化山茱萸总苷的提取及纯化工艺。方法:以乙醇浓度、液料比和提取时间为自变量,以莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的收率以及提取物得率为因变量,通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,以响应面优选最佳的超声提取工艺。以乙醇浓度、洗脱体积、上样量为自变量,以莫诺苷、马钱苷和獐牙菜苷的收率以及洗脱物得率为因变量,通过对自变量的总评归一值进行多元线性回归和二项式拟合,以响应面优选最佳的大孔树脂纯化工艺。结果:确定提取工艺条件为乙醇浓度22%～25%,液料比12～15倍,提取时间30～40 min;纯化工艺条件为乙醇浓度35%～45%,洗脱体积7～9 BV,上样量40～50 mg.g-1。2个步骤工艺验证的总评归一预测値与实测值的偏差分别为-1.8%和2.7%。结论:采用星点设计-响应面法优选山茱萸总苷提取及纯化工艺,方法简便,预测性良好。

山茱萸环烯醚萜苷类提取物对3T3-L1脂肪细胞线粒体氧消耗及相关基因表达的影响

目的:观察山茱萸环烯醚萜苷类提取物对小鼠胚胎成纤维细胞(3T3-L1)成熟脂肪细胞有氧呼吸氧消耗速率及相关基因表达的影响,分析可能分子机制。方法:以3T3-L1脂肪细胞为研究对象,Seahorse细胞外流量分析方法测定0.04,0.2,1 g·L^(-1)质量浓度山茱萸提取物干预2 d后对脂肪细胞氧消耗速率的影响,另设空白组。逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测干预2 d后脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体-γ辅激活子-1α(PGC-1α),沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1),腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),线粒体脱偶连蛋白1抗体(UCP-1),PR结构域的蛋白16(PRDM16)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)mRNA表达水平。结果:与空白组比较,0.2,1 g·L^(-1)山茱萸提取物干预成熟脂肪细胞2 d后可增加ATP生成、基础呼吸和最大呼吸能力,1 g·L^(-1)提取物可使储备呼吸能力增强,0.04 g·L^(-1)提取物则使质子漏氧消耗速率明显升高;各质量浓度提取物干预2 d不同程度明显上调PGC-1α,AMPK,SIRT1 mRNA水平,明显下调PPARγmRNA表达,均具有明显统计学差异(P<0.05,P<0.01),对UCP-1,PRDM16基因表达没有明显影响。结论:山茱萸环烯醚萜总苷对成熟脂肪细胞有氧呼吸具有促进作用,增加ATP生成,细胞不具备米色化特征,其作用可能与AMPK,SIRT1,PGC-1α,PPARγ多个因子的调节相关。

UFLC-MS/MS法同时测定栀子厚朴汤中10个成分的含量

目的:建立超快速液相色谱-串联质谱法同时测定栀子厚朴汤中10个成分(京尼平苷、京尼平龙胆双糖苷、和厚朴酚、厚朴酚、异柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素和橙皮素)的含量。方法:采用Shim-Pack XR-ODS色谱柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~10 min,10%B→30%B;10~12 min,30%B→60%B;12~18 min,60%B→85%B),平衡时间为5min,流速为0.5 mL·min-1,柱温为30℃,进样量为5μL;质谱采用3200 QTRAP三重四极杆串联质谱仪,离子源为电喷雾电离源(ESI源),检测方式为负离子检测,扫描模式为多反应检测(MRM)。结果:京尼平苷、京尼平龙胆双糖苷、和厚朴酚、厚朴酚、异柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素和橙皮素质量浓度分别在1~40μg·mL-1(r=0.999 6)、0.2~8μg·mL-1(r=0.999 7)、0.1~4μg·mL-1(r=0.999 3)、0.1~4μg·mL-1(r=0.999 7)、0.2~8μg·mL-1(r=0.999 5)、1~40μg·mL-1(r=0.999 7)、0.2~8μg·mL-1(r=0.998 5)、1~40μg·m L-1(r=0.999 7)、0.1~4μg·m L-1(r=0.999 2)和0.02~0.8μg·m L-1(r=0.999 4)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.0%、98.5%、96.9%、98.8%、98.4%、99.3%、99.4%、98.7%、98.9%和97.9%。6批样品中上述10个成分的含量范围分别为京尼平苷4.51%~4.83%,京尼平龙胆双糖苷0.805%~0.841%,和厚朴酚0.125%~0.134%,厚朴酚0.133%~0.144%,异柚皮苷0.403%~0.435%,柚皮苷5.54%~5.84%,橙皮苷0.210%~0.222%,新橙皮苷3.98%~4.30%,柚皮素0.059 2%~0.066 0%,橙皮素0.021 3%~0.022 3%。结论:本方法准确灵敏,稳定性和重复性好,可用于栀子厚朴汤的质量控制。