转耐辐射球菌irrE基因提高拟南芥盐胁迫耐受性的表型分析

耐辐射球菌中的irrE基因作为一种全局性调节因子,在抵御极端辐射照射时起着至关重要的作用。利用农杆菌介导的花序浸染法,将irrE基因转化拟南芥,筛选和鉴定出表达irrE的植株,并分析了转基因植株的盐胁迫耐受能力。结果显示,转irrE拟南芥表现出对盐胁迫的耐受性提高;在盐胁迫下,转基因拟南芥体内脯氨酸含量比野生型有明显的提高。RNA半定量分析显示转基因植株中AtNHX1表达水平升高。因此推测irrE基因在转基因拟南芥中调控了AtNHX1的表达,引起了植株的盐胁迫耐受性提高。

过表达IrrE基因提高油菜的抗盐胁迫能力

以过表达Irr E基因油菜T3代植株和非转基因油菜植株为试验材料,研究不同浓度Na Cl胁迫下过表达Irr E对油菜植株抗盐胁迫能力的影响,检测不同浓度Na Cl胁迫下非转基因和过表达Irr E基因油菜植株叶片中的抗氧化酶活性如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、过氧化物酶(peroxidase,POD)的活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、脯氨酸、可溶性糖含量和相对电导率(REC)。结果显示,随着Na Cl浓度的增加,非转基因和过表达Irr E基因油菜植株各自的抗氧化酶活性均呈现先增强后减弱的趋势,而MDA含量、脯氨酸含量、可溶性糖含量和相对电导率都随着Na Cl浓度的增加而逐渐增加;但与非转基因相比,在高浓度Na Cl胁迫下过表达Irr E基因油菜植株具有较高的抗氧化酶活性、脯氨酸含量和可溶性糖含量以及较低的MDA含量和相对电导率,表明在高盐胁迫下过表达Irr E能够显著地提高转基因油菜植株的抗盐胁迫能力。

^(133)Cs胁迫对转IrrE油菜生理活性的影响

以转IrrE基因油菜为材料,以非转基因油菜为对照,砂培条件下研究了油菜对Cs的积累吸收情况和Cs胁迫对油菜SOD、POD酶活性、MDA含量及游离脯氨酸含量的影响.结果表明:随着处理浓度的增大,转基因油菜和非转基因油菜对Cs的吸收量都增大,二者根部的吸收量都大于其地上部分;转基因油菜根部的积累量大于非转基因油菜根部的量,而地上部分积累量小于非转基因油菜的含量;在不同Cs浓度的胁迫下,转基因和非转基因叶片的SOD和POD活性均呈现先升后降的趋势,4种Cs浓度处理下转基因油菜活性都高于非转基因油菜;转基因和非转基因油菜叶片的MDA含量均呈上升的趋势,但转基因油菜体内的MDA含量都低于非转基因油菜;4种处理下油菜叶片脯氨酸含量也表现出上升趋势,而转基因油菜产生的游离脯氨酸高于非转基因产生的.以上结果说明在油菜受到Cs胁迫时,转IrrE基因油菜比非转基因油菜更具有Cs胁迫耐受性.

IrrE重组大肠杆菌的构建和性能分析

利用p ET-28a(+)质粒将来源于耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans)R1的irr E基因在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行异源表达,在IPTG终浓度2,mmol/L、诱导温度37,℃、诱导培养6,h条件下进行了蛋白诱导.进一步考察Irr E异源表达对大肠杆菌生长性能和耐受能力的影响,结果表明:Irr E的表达能够提高大肠杆菌正常条件下的生长速率和最终生物量;同时,能够不同程度提高大肠杆菌在压力冲击下的存活能力,其中,高渗条件下存活能力的提高最为明显.而重组菌株在压力冲击下的生长速率和最终生物量均明显高于对照菌株.这说明Irr E在提高大肠杆菌的压力耐受性方面表现出良好的效果.

NaCl胁迫对转IrrE基因烟草抗氧化酶活性的影响

文章主要研究了转IrrE基因烟草幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答情况。结果表明,在200mmol/LNaCl胁迫下,其中野生型烟草随着胁迫时间的延长,POD、SOD、CAT三种抗氧化酶活性和可溶性蛋白的含量逐渐升高,处理24h后达到一个峰值,然后又逐渐降低,叶片的相对含水量一直逐渐降低,而转IrrE基因烟草幼苗三种抗氧化酶活性和可溶性蛋白持续上升,相对含水量先有所降低然后逐渐升高,5个生理指标均高于野生型烟草。因此,IrrE基因作为一种转录因子可能调控了盐胁迫相关基因的表达,从而提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力。

转抗旱基因IrrE玉米材料的获得及抗性鉴定

以优良玉米自交系综31的幼胚为受体材料,采用农杆菌介导法将来自微生物耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)的抗旱基因IrrE转入玉米幼胚组织细胞中,转化后的细胞通过抗性筛选,分化再生成苗。结果表明,经特异PCR检测,42株植株转入了IrrE基因,有29株收获种子。T_1代在温室大棚控制水肥试验及脯氨酸等生理生化指标检测表明,转基因植株具有良好的耐旱特性,为抗旱玉米新品种选育提供了较好的亲本材料。

自然干旱胁迫下IrrE基因对甘蓝型油菜生理生化变化的影响

以转IrrE基因与非转基因甘蓝型油菜为材料,在自然干旱条件下,比较研究了转基因与非转基因油菜植株的干旱耐受性情况。结果表明,在0-35 d的自然干旱情况下,随着盆土中土壤含水量的逐渐降低,转基因与非转基因油菜植株的叶片含水量(RWC)也逐渐下降,35 d后他们的含水量降到最低,恢复供水后,其含量均逐渐上升。而油菜叶片的叶绿素含量、可溶性蛋白含量、丙二醛(MDA)含量、SOD和POD酶活性却逐渐上升,恢复供水后,他们的含量和酶活性均逐渐下降,但在干旱胁迫和复水过程中,转基因油菜叶片的含水量、叶绿素含量、可溶性蛋白含量、SOD和POD酶活性均高于非转基因油菜,而丙二醛(MDA)含量始终低于非转基因的含量。说明来源于耐辐射奇球菌的转录调节因子IrrE,参与了油菜幼苗对干旱胁迫的耐受性应答过程,从而增强了植株的耐旱能力。

转IrrE基因甘蓝型油菜农艺性状的分析

文章主要研究了转IrrE基因T1代甘蓝型油菜在自然条件与Nacl盐胁迫条件下的农艺性状,结果表明:以自然条件下的野生型油菜为对照,自然条件下的转IrrE基因油菜在株高、主花序长度、全株有效角果数差异极显著,而分枝部位高度和分枝个数差异不显著。300mMNaCl高盐胁迫条件下的转IrrE基因油菜,株高、主花序长度、全株有效角果数差异极显著,分枝数差异不显著。

IrrE基因酵母双杂交体系诱饵载体的构建

耐辐射奇球菌中的IrrE基因能增强转IrrE基因油菜的盐胁迫耐受性。为了进一步筛选植物体内与IrrE相互作用蛋白,从而加深对盐胁迫耐受性分子调控网络的认识,根据IrrE基因的开放阅读框设计引物,从PBI121-IrrE上扩增该基因的编码区,将其克隆到酵母表达载体pGBKT7中,获得IrrE的酵母表达载体pGBKT7-IrrE,测序结果表明:pGBKT7-IrrE载体构建成功,可用于后续的酵母双杂交文库的筛选工作。

异源表达irrE转基因烟草的耐盐耐旱性

【目的】IrrE是从耐辐射异常球菌中发现的全局调控蛋白,主要通过修复强辐射等逆境条件下DNA损伤,提高耐辐射异常球菌对极端逆境环境的抗性。研究按植物密码子优化的irrE后导入烟草对转基因烟草耐逆能力的提高,为棉花等作物耐逆育种研究打下基础。【方法】按照植物密码子优化细菌irrE并合成基因;通过酶切连接法构建irrE植物表达载体;通过叶盘法转化烟草并PCR验证获得阳性转基因再生苗;通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析转基因株系中irrE的表达量;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IrrE编码蛋白;通过NaCl和甘露醇模拟盐处理和干旱处理分析纯和转基因株系的耐盐耐旱性,通过测定抗逆相关生理指标鉴定其对植物耐逆的贡献。【结果】按照植物密码子对irrE进行改造,共优化了241个密码子;构建了高效植物表达载体GBI-IE;利用除草剂草甘膦作为筛选剂获得转基因再生幼苗,并通过PCR验证共获得15个独立的转基因株系;通过q RT-PCR分析从中选取两个表达量最高的株系GO1和GO2进行后续的抗逆性分析;Western blot验证IrrE编码蛋白在GO1和GO2中能正确翻译。转基因烟草耐盐耐旱性分析:种子萌发试验表明,正常1/2 MS培养基上,转基因株系GO1和GO2发芽率和非转基因野生型对照之间没有明显的差异。然而250 mmol·L^(-1)NaCl培养基上GO1和GO2萌发率分别为78.8%和90.0%,野生型仅为10.3%,分别提高了68.5%和79.7%。类似地,300 mmol·L^(-1)甘露醇条件下,野生型的萌发率为39.7%,转基因株系GO1和GO2分别提高了42.9%和50.8%;正常萌发的种子移栽到250 mmol·L^(-1) NaCl和300 mmol·L^(-1)甘露醇条件12 d后,转基因株系根长、侧根数以及鲜重等生理指标显著高于野生型对照;温室中正常生长30 d的苗期烟草在250 mmol·L^(-1) NaCl处理下,转基因烟草SOD、CAT活性比野生型对照分别提高了48.80%和88.55%,而MDA含量比野生型对照降低了61.61%,胁迫响应基因Nt ABF2、Nt LEA5、Ntzfp、Nt CDPK2在GO1和GO2转基因株系中表达量均显著高于非转基因野生型。和盐处理结果类似,300 mmol·L^(-1)甘露醇的处理下,转基因烟草的耐旱生理生化指标均优于非转基因对照。【结论】烟草中异源表达耐辐射异常球菌irrE可以显著提高耐盐耐旱性;其多效性耐非生物胁迫能力的提高表明其可作为植物耐逆基因工程的优良基因源。

耐辐射异常球菌全局调控蛋白IrrE的研究进展

全局调控蛋白IrrE是异常球菌属中所特有的一种DNA损伤修复调节因子,可以显著提高细胞受到损伤时各修复基因的表达。在目前已经完成测序的异常球菌中共发现7种不同来源的IrrE蛋白,经序列比对与同源建模,发现其氨基酸序列相似性较高且具有相同的保守结构域,这可能预示了其功能上的相似性。此外,irrE在大肠杆菌及油菜中表达后,能明显增强宿主的耐盐性,体现了较高应用价值。本综述介绍了异常球菌属及其全局调控蛋白IrrE的发现、结构与相关功能,分析与展望了该调控蛋白潜在的应用前景。

耐辐射奇球菌全局调控蛋白IrrE作为抗逆元件的机制及应用

细胞对不良环境的耐受性属于复杂表型,往往由多个基因控制,且有着严格的调控机制,难以通过操作单个基因来提升耐受性。利用全局转录调控因子来提升细胞对不良环境耐受性成为一种重要的策略。耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)的全局转录调控蛋白IrrE(或PprI),其分子大小为3.5×10^(4),对重组修复系统具有去阻遏和激活作用,与细胞的耐辐射性能直接相关。此后,在多项研究中发现,IrrE可以作为极端应激反应的全局调控因子,提高了外源宿主的应激能力。irrE在大肠杆菌、酿酒酵母、运动单胞菌等菌株中的异源表达可以导致宿主的转录组发生显著变化,激发宿主菌对抗抑制物、高渗透压、高温、溶剂等不良环境胁迫。IrrE及其突变体作为抗逆元件,已经在燃料乙醇、有机酸、生物聚合物、微生物燃料电池以及生物修复等领域进行了应用研究,取得了较好的效果。

转IrrE基因甘蓝型油菜对NaCl胁迫的耐受性应答

以转IrrE基因甘蓝型油菜为材料,研究了转IrrE基因甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答情况.在200 mmol/L NaCl胁迫下,随着胁迫时间的延长,转IrrE基因和野生型油菜的POD、SOD和CAT三种抗氧化酶活性均增加,其中野生型油菜的三种抗氧化酶在24h后达到峰值,随后逐渐下降,而转IrrE基因油菜的三种抗氧化酶活性却持续增加,并在相同的胁迫时间内均高于野生型油菜的酶活性;同时转IrrE基因油菜的脯氨酸和可溶性蛋白质含量均比野生型油菜的高,但其丙二醛(MDA)的含量比野生型油菜的低.结果表明,IrrE基因作为一种转录因子可能广泛参与了油菜幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答过程,从而提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力.

干旱胁迫对转IrrE基因甘蓝型油菜生理生化指标的影响

以转IrrE基因与非转基因甘蓝型油菜为材料,用10%(W/V)PEG6000(聚乙二醇)进行了干旱胁迫实验,比较研究了转IrrE基因与非转基因甘蓝型油菜幼苗的耐受性应答情况。结果表明:转基因油菜植株含水量下降趋势小于非转基因油菜植株;转基因油菜植株叶绿素含量和荧光参数F0的上升趋势均明显大于非转基因油菜植株;转基因油菜植株的Fv/Fm值和可溶性蛋白含量均大于非转基因油菜植株,但丙二醛(MDA)含量小于非转基因油菜植株。以上结果从侧面证实了:在干旱胁迫下,转IrrE基因油菜植株较非转基因植株有更强的耐受能力;IrrE基因作为一种转录调节因子,广泛参与了油菜幼苗对干旱胁迫的耐受性应答过程,增强了植株的耐旱能力。

利用酵母双杂交系统筛选IrrE相互作用蛋白

本研究通过酵母双杂交技术,构建了IrrE蛋白为诱饵载体,从拟南芥cDNA文库中筛选与IrrE诱饵蛋白相互作用的功能蛋白.研究结果表明,在所获得的阳性克隆中,发现了一个与拟南芥基因Atlg01470所编码的蛋白有较高同源性的蛋白,即LEA14蛋白(晚期胚胎发育富集蛋白),同源性高达98%.推测IrrE转录因子在提高植物耐盐性的过程中起了重要作用.

表达耐辐射异常球菌IrrE蛋白对产丁二酸大肠杆菌耐渗透压的影响

高渗透压胁迫是降低生物法制备丁二酸生产效率的关键因素之一。为提高丁二酸生产菌株对高渗透压胁迫的耐受性能,本研究考察了外源引入全局调控蛋白IrrE提高大肠杆菌耐高渗透压胁迫性能的可行性。试验结果表明,在不同浓度Na+胁迫下,重组菌生长和发酵性能明显提升。在5 L罐发酵中,重组菌最大细胞干重、糖耗和丁二酸产量比对照菌分别提高了15.6%、22%和23%,表明引入IrrE蛋白可提高菌株对高渗透压胁迫的耐受能力。进一步比较重组菌和对照菌胞内相容性物质海藻糖和甘油的浓度后发现,重组菌胞内海藻糖和甘油浓度明显提高,其最大积累量分别是对照菌的1.3和3.8倍,推测IrrE可通过增加胞内相容性物质的积累提高菌株对高渗透压胁迫的耐受性。

生态环保项目财务基准收益率调整测算方法研究

随着国家“双碳”战略的实施,生态环保领域的投资种类和数量逐年增加,投资决策变得异常复杂,而生态环保项目经济评价参数已多年没有修订,已经影响到此类项目的科学决策,有必要适时出台新版的方法与参数手册。文章基于建设项目财务基准收益率的一般定义及使用规范,参考实际工作中的生态环保项目决策案例,以及生态环保企业上市公司年报的财务指标和市场估值,探讨了使用WACC及CAPM方法调整生态环保项目财务基准收益率的原理及算法,并给出了测算实例,经过和实际项目决策案例的对比,论证了调整生态环保类项目基准财务收益率的必要性和方法的可行性,期望能供生态环保领域的项目决策者及相关政府部门在编制投资方案及制定相关政策时参考借鉴。

基于IRR计算方法的农户生产经营贷款策略研究——以峨边县为例

以乐山市峨边县农村金融机构农户生产经营贷款投资数据为基础,以贷款从事农业生产的农户为调研对象,运用净现值分析法(NPV)与内部收益率计算法(IRR)对农户生产经营情况展开分析,了解农户生产支出与运营利润情况。得出峨边县农户在生产经营投资中面临农户文化水平普遍不高、农村金融机构缺乏贷前调查与贷后管理、政府对农户生产经营贷款投资的指导与补贴缺位、农户生产经营贷利率过高等问题的结论,可为农户生产经营贷款的提前规划提供参考,以防范生产经营贷款投资风险,有效维护与完善农村金融市场,提振农户的生产经营贷款投资信心,激发农村市场的巨大潜力。

“投资人+EPC+招商运营”模式下产业园项目财务测算分析及纳税筹划的探讨

文章对“投资人+EPC+招商运营”模式下产业园项目进行财务测算分析,利用IRR税后估值模型和LINGO软件求解线性规划模型得出最优解。通过研究开发进度对各项经济指标的影响,结合X市产业园项目实例,发现在以销定产前提下,合理安排开发进度保持年累平均开发进度达到租赁前置后的租售去化率的1.03倍,使得IRR税后最大化,并有效降低投资决策风险。文章揭示了产业园项目投资成效,为未来类似项目提供了可行途径,结合合理的税收筹划,助力企业经济快速发展。

美国REITs对中国房地产发展的镜鉴

我国房地产市场正在从卖方市场向买方市场过渡,面临着诸多问题。为了探索适合我国国情并具有特色的房地产发展之路,促进我国房地产市场平稳健康发展,本文通过研究美国房地产市场发展的历史、美国房地产开发商向REITs转变的过程、美国REITs与房地产投资收益率IRR的关系等,总结了可以借鉴的经验,提出了利用REITs投资工具,满足工薪家庭住房需求、化解地方政府债务风险、建设全国统一房地产大市场等建议。