贝前列素钠对全脑缺血／再灌注大鼠脑损伤的作用及机制

目的探讨贝前列素钠对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对PGIS-PGI2-IP信号通路的影响。方法采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血/再灌注脑损伤模型,贝前列素钠(50、100μg·kg-1)术前30 min灌胃给药,水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,黄嘌呤氧化酶法、TBA法分别测定大鼠海马中SOD活性、MDA含量变化,ELISA测定大鼠海马PGI2含量,RT-PCR检测大鼠海马COX-2、PGIS与IP mRNA表达情况。结果与假手术组相比,全脑缺血/再灌注大鼠寻台潜伏期,寻台路径明显增加;SOD活性明显降低,MDA含量明显增加;PGI2含量明显增加,COX-2、PGIS、IP mRNA表达明显增加。与模型组相比较,贝前列素钠能明显改善大鼠空间学习记忆能力;升高海马SOD活性,降低MDA含量;明显降低海马PGI2含量,抑制海马COX-2、PGIS及IP mRNA的表达。结论贝前列素钠对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤具有明显的保护作用,其机制可能涉及调控PGIS-PGI2-IP信号通路平衡。

磷酸二酯酶5抑制剂促进大鼠脑缺血再灌注后神经及血管再生的研究

目的探讨磷酸二酯酶5抑制剂西地那非对大鼠脑缺血再灌注后海马神经前体细胞标记物微管相关蛋白增殖及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法雄性SD大鼠75只,随机分为假手术组5只,局灶性脑缺血再灌注组(单纯缺血组)35只及局灶性脑缺血+西地那非组(西地那非组)35只。西地那非组在大脑中动脉局灶缺血模型再灌注后2 h喂服西地那非3 d。单纯缺血组和西地那非组在术后2 h、1 d、3 d、5 d、7 d、10 d和14 d检测神经功能缺损评分。免疫组织化学方法检测各时间点海马神经前体细胞标记物微管相关蛋白阳性细胞及梗死灶周围VEGF的吸光度值。结果假手术组几乎无微管相关蛋白表达。与单纯缺血组比较,西地那非组7 d、10 d、14 d神经功能缺损评分明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);西地那非组5 d、7 d、10 d、14 d微管相关蛋白明显高于单纯缺血组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);西地那非组3 d、5 d、7 d、10 d VEGF明显高于单纯缺血组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论西地那非能够促进大鼠脑缺血再灌注后急性期神经及血管再生,改善神经功能。

加味麻黄附子细辛汤提取物对缺血再灌注诱发新西兰兔房室传导阻滞的影响

目的观察加味麻黄附子细辛汤提取物对缺血再灌注诱发新西兰兔房室传导阻滞模型的影响。方法将新西兰兔随机分6组,即:结扎右冠状动脉15 min(对照及实验A组)、60 min(对照及实验B组)、120 min(对照及实验C组),每组10只。实验组给予加味麻黄附子汤提取物、对照组给予生理盐水,均空腹灌胃,每次2 mL/kg,2次/天,连续灌胃3天。末次灌胃20 min后,20%乌拉坦1.2 g/kg耳缘静脉注射麻醉,结扎右冠状动脉制备缺血再灌注诱发房室传导阻滞动物模型,记录各组不同时段的Ⅱ导心电图和希氏束电图。观察P-R间期及A-H间期。结果缺血实验中,实验组动物P-R间期和A-H间期,于结扎5 min后较模型动物缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。缺血再灌注实验中,复灌后实验组与对照组相比,P-R间期和A-H间期缩短差异有统计学意义(P<0.05);长时间(120 min)缺血组,于复灌60 min后对照动物P-R间期、A-H间期再次延长,实验组动物未出现再次延长现象,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味麻黄附子细辛汤可改善缺血、缺血再灌注引起的房室传导功能。

PPARγ激动剂15d-PGJ_2在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用及机理

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用及机理。方法建立70%的大鼠肝脏缺血-再灌注损伤模型,40只SD大鼠随机均分为4组:假手术组、缺血-再灌注损伤组(缺血-再灌注组)、15d-PGJ2预处理组(15d-PGJ2组)及15d-PGJ2+GW9662预处理组(15d-PGJ2+GW9662组)。再灌注后,取静脉血检测肝血清酶(ALT、AST)水平,取肝脏组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性、NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达。结果与假手术组相比,其余3组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达均增加(P<0.05)。与缺血-再灌注组相比,15d-PGJ2组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NFκ-B活性、TNF-α含量和ICAM-1表达均明显降低(P<0.05);而15d-PGJ2+GW9662组与缺血-再灌注组相比有差异但无统计学意义(P>0.05)。与15d-PGJ2组相比,15d-PGJ2+GW9662组血清ALT和AST水平、肝脏组织MPO和NF-κB活性、TNF-α含量和ICAM-1表达明显增加(P<0.05)。结论PPARγ激动剂15d-PGJ2对肝脏缺血-再灌注损伤有保护作用,其机理可能是通过PPARγ途径抑制NFκ-B活性,减少TNF-α和ICAM-1炎症介质的释放实现的。

川芎嗪对实验性大鼠脑缺血-再灌注损伤的影响

目的通过观察缺血-再灌注损伤大鼠脑梗死的面积及神经学缺陷的程度,了解川芎嗪对大鼠脑缺血-再灌注的影响,探讨其有效剂量和量效关系;用免疫组织化学检测观察脑梗死组织ED1、IL-1β和TNF-α之表达,探讨川芎嗪的作用机制。方法应用改良线栓法复制缺血-再灌注脑梗死动物模型。将健康成年66只SD雄性大鼠随机分为11组,实验结束后处死大鼠,将假手术组Ⅰ组、模型对照组Ⅰ组、TMP治疗组(Pre-100)Ⅰ组、治疗组(Pre-120)、治疗组(Pre-140)及MK801组Ⅰ组中的脑组织切取材制片、TTC染色、福尔马林固定后,采用病理图像分析系统,评价TMP是否能减少脑梗死面积;将假手术组Ⅱ组、模型对照组(Control)Ⅱ组、治疗组(Pre-100)Ⅱ组和MK801组Ⅱ组中大鼠的脑组织取材制片后,用免疫组织化学染色,观察ED1、IL-1β和TNF-α的阳性表达。结果(1)缺血前川芎嗪各剂量治疗组及缺血后30min川芎嗪治疗组均可减少缺血90min、再灌流24h脑梗死面积的形成并改善神经学缺陷。(2)缺血前治疗组川芎嗪100mg/kg同时也可以减少脑梗死区域内的ED1、IL-1β和TNF-α之免疫阳性表达。结论(1)川芎嗪可以减少大鼠缺血-再灌注脑梗死的形成并改善其神经学缺陷;(2)川芎嗪的治疗效用可能与抑制小胶质细胞活化、IL-1β和TNF-α的免疫阳性表达有关,并且推论川芎嗪可以用于治疗人脑梗死病。

二氢辣椒碱诱导治疗性低体温对小鼠脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的探讨二氢辣椒碱(DHC)诱导治疗性低体温对小鼠脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用及其机制。方法将20只成年野生型(WT)小鼠随机分为WT组和WT+DHC组,每组10只;20只瞬时感受器电位香草酸受体1基因敲除(TRPV1 KO)小鼠随机分为TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组,每组10只。所有小鼠建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型。WT组和TRPV1 KO组小鼠再灌注开始后皮下泵注生理盐水1.25 mg·kg^(-1)·h^(-1),WT+DHC组和TRPV1 KO+DHC组小鼠再灌注开始后皮下泵注DHC 1.25 mg·kg^(-1)·h^(-1)。所有小鼠再灌注90 min后全部移入22℃的鼠笼中,每隔5 min记录小鼠再灌注期的中心体温变化至再灌注后24 h。在麻醉开始前和再灌注后24 h对小鼠进行神经行为测试评分,测试结束后取小鼠脑组织切片行氯化三苯基四氮唑染色,计算小鼠的脑组织梗死率。结果4组小鼠再灌注0、30、60 min时中心体温比较差异均无统计学意义(P>0.05)。WT组、TRPV1 KO组和TRPV1KO+DHC组小鼠再灌注90 min时的中心体温与0、30、60 min时比较差异均无统计学意义(P>0.05),2、3、4、6、12、24 h时的中心体温与0、30、60、90 min时比较均显著降低(P<0.05);WT组、TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组小鼠2、3、4、6、12、24 h时的中心体温在3组同时间点之间两两比较及组内不同时间点之间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。WT+DHC组小鼠再灌注后90 min及2、3、4、6、12、24 h时的中心体温与0、30、60 min时比较均显著降低(P<0.05),且均显著低于WT组、TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组同时间点(P<0.05)。麻醉前4组小鼠神经行为学测试总分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。再灌注后24 h 4组小鼠神经行为学测试总分均低于麻醉前(P<0.05),但WT+DHC组小鼠的行为学测试总分明显高于WT组、TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组(P<0.05),而WT组、TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组小鼠的行为学测试总分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。再灌注后24 h,4组小鼠的自发性活动、攀爬实验、本体觉实验和对触摸触须的反应等4项神经行为学测试评分比较差异均无统计学意义(P>0.05);WT+DHC组小鼠的四肢运动对称性试验和前爪伸展试验评分显著高于WT组、TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组小鼠(P<0.05);WT组、TRPV1 KO组和TRPV1 KO+DHC组小鼠的四肢运动对称性试验和前爪伸展试验评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。再灌注后24 h,WT+DHC组小鼠的脑组织梗死率显著低于其他3组(P<0.05);而WT组、TRPV1 KO组、TRPV1 KO+DHC组小鼠脑组织梗死率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠局灶性脑缺血再灌注后皮下泵注DHC可通过激活TRPV1受体诱导治疗性低体温,并减少脑组织损伤,改善脑神经功能。

腺苷抑制 GSK-3β活性对大鼠急危重症胰腺炎肠屏障功能障碍的影响

目的:研究腺苷对大鼠急危重症胰腺炎(SAP)肠屏障功能障碍(IBD)的保护途径。方法:将64只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组8只、SAP组40只(分为0、3、6、12、24 h不同时间点处理组,每组8只)、腺苷处理组(Ade-Ⅳ组)8只、线粒体膜通透性转移孔(mPTP)抑制剂环孢素A(CsA)组8只。大鼠SAP造模完成后,血清胰淀粉酶升高及镜下胰腺组织病理学改变提示造模成功,HE染色观察大鼠小肠组织损伤情况,Western blotting法检测大鼠小肠组织P-GSK-3β表达水平,应用电镜观察小肠线粒体超微结构的变化,采用差速离心法分离线粒体,并在Ca^(2+)诱导下完成线粒体肿胀实验。结果:大鼠SAP造模成功后,SAP组40只大鼠血清胰腺淀粉酶水平随着0~12 h时间点的延长逐渐升高,且12 h达到高峰,24 h下降至最低点,差异均有统计学意义(P<0.01);切片染色观察,SAP组小肠黏膜充血、水肿,并伴有柱状上皮细胞坏死,甚至出现部分绒毛的断裂、缺损,而Ade-Ⅳ组肠黏膜上皮及绒毛形态基本完整,绒毛排列基本整齐;P-GSK-3β的表达,Ade-Ⅳ组较SAP组显著增加(P<0.01);小肠线粒体超微结构在SAP组肿胀明显,还出现了空泡变性,而Ade-Ⅳ组肿胀程度减轻,空泡变性减少;线粒体肿胀实验发现520 nm处线粒体吸光度值CsA组<Ade-Ⅳ组<SAP组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:腺苷对SAP并发的IBD有保护作用,其机制可能与抑制GSK-3β活性,进而阻止mPTP的开放有关。

自体门静脉血冲洗供肝在原位肝移植中的应用价值

目的探讨自体门静脉血冲洗供肝在原位肝移植中的应用价值。方法采用回顾性队列研究方法。收集2018年5月至2019年6月中国科学技术大学附属第一医院收治的35对行原位肝移植供者和受者的临床病理资料;35例供者,男31例,女4例;年龄为(48±9)岁;35例受者,男25例,女10例;年龄为(47±9)岁。35例受者中,16例采用自体门静脉血冲洗供肝,设为门静脉组;19例采用白蛋白冲洗供肝,设为白蛋白组。观察指标:(1)手术情况。(2)术后情况。(3)随访情况。正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较采用t检验。偏态分布的计量资料以M(范围)表示。计数资料以绝对数表示,组间比较采用Fisher确切概率法。结果(1)手术情况。门静脉组和白蛋白组受者无肝期时间、开放后5 min内动脉血Ca2+浓度分别为(52±12)min、(0.99±0.10)mmol/L和(64±12)min、(1.05±0.07)mmol/L,两组上述指标比较,差异均有统计学意义(t=2.94,2.22,P<0.05);开放后5 min内平均动脉压、开放后5 min内动脉血K+浓度、开放后5 min内动脉血pH值分别为(70±24)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、(4.7±1.3)mmol/L、7.27±0.06和(71±28)mmHg、(4.6±1.1)mmol/L、7.30±0.07,两组上述指标比较,差异均无统计学意义(t=0.14,0.30,1.22,P>0.05)。(2)术后情况。门静脉组和白蛋白组受者发生再灌注后综合征、严重再灌注后综合征(心脏停搏)、原发性移植物无功能分别为6、0、2例和8、1、1例,两组上述指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后第7天总胆红素分别为(90±52)μmol/L和(166±112)μmol/L,两组比较,差异有统计学意义(t=2.66,P<0.05);术后第7天国际标准化比值、术后7 d内丙氨酸转氨酶最高值、术后7 d内天冬氨酸转氨酶最高值分别为2.1±2.0、(1952±2813)IU/L、(3944±6673)IU/L和1.8±0.6、(1023±1014)IU/L、(2005±2910)IU/L,两组上述指标比较,差异均无统计学意义(t=0.66,1.23,1.08,P>0.05)。门静脉组和白蛋白组受者发生肝动脉并发症、胆道并发症分别为1、2例和0、4例,两组上述指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。门静脉组和白蛋白组受者围手术期分别死亡3例和2例。(3)随访情况。35例受者中,30例获得术后随访,随访时间为534(28~776)d。随访期间,门静脉组受者中,3例发生术后并发症,其中2例死亡,1例经对症治疗后恢复良好。白蛋白组受者中,5例发生术后并发症,其中1例死亡,4例经对症治疗后恢复良好。截至随访日期,门静脉组11例受者和白蛋白组16例受者均恢复良好。结论肝移植术中应用自体门静脉血冲洗供肝可以缩短无肝期时间,不增加再灌注后综合征、缺血再灌注损伤和胆道并发症的发生。