Antimicrobial activities of isoalantolactone, a major sesquiterpene lactone of Inula racemosa

Isoalantolactone, a major constituent of Inula racemosa (Compositae) was tested for its antimicrobial action against five bacteria, six human and six plant pathogenic fungi. The lactone showed absolute toxicities at 500 μg/mL against 3 soil borne phytopathogenic fungi (Gaeu-mannomyces graminis var. tritici, Rhizoctonia cerealis and Phytophthora capsici) with the MICs determined to be 100, 100 and 300 μg/mL, respectively. At the MICs, isoalantolac-tone exhibited its fungi.static nature of toxicity. The lowest fungicidal concentrations of the lactone to G. graminis var. tritici, R. cerealis and P. capsici were shown to be 150, 150 and 350 μg/mL, respectively. Moreover, isoalantolactonc displayed weaker antibacterial activities against Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas fluorecense, Sarcina lentus and Staphylococcus aureus with MICs of 125, 425, 150, 150 and 100 μg/mL, respectively. The investigation disclosed the strong inhibition of isoalantolactonc to the phytopatho-gcnic fungi,

异土木香内酯及其衍生物的药理作用及机制

随着分子生物学和药物化学的迅速发展,医药研究领域中天然产物及其衍生物作为治疗剂的开发受到极大关注。异土木香内酯及其衍生物具有独特的药理活性,在自噬、免疫、抗炎、抗菌及抗肿瘤等方面具有多重药用价值,尤其在抗肿瘤领域展现出潜在的应用前景。然而,异土木香内酯及其衍生物的具体药理机制和临床应用潜力尚未被充分揭示。未来,深入探讨异土木香内酯及其衍生物的药理机制有助于更好地评估其临床应用的可能性。

异土木香内酯通过miR-5195-3p/KLF5/N-cadherin对肝纤维化的作用机制

目的探讨异土木香内酯(isoalantolactone,IAL)通过miR-5195-3p/KLF5/N-cadherin对肝纤维化的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、IAL低、中、高剂量(IAL组)、IAL+miR-5195-3p mimic组和奥贝胆酸组,每组20只。采用ELISA法检测炎症因子水平,HE染色和天狼星红染色观察病理学改变情况和纤维化分级、评分情况,比色法测定氧化和抗氧化酶水平;qRT-PCR和Western blotting检测肝脏组织各因子mRNA和相关蛋白表达。结果与正常组相比,模型组ALT、AST、IL-6、IL-β、TNF-α、MDA、KLF5 mRNA、N-cadherin mRNA水平及肝纤维化分级、Ishak评分明显升高(P均<0.05)。与模型组相比,IAL低、中、高剂量组和奥贝胆酸组的以上各项指标依次显著降低(P均<0.05)。与正常组相比,模型组的SOD、GSH-Px、miR-5195-3p水平明显降低(P均<0.05),与模型组相比,IAL低、中、高剂量组和奥贝胆酸组的以上指标水平依次显著升高(P均<0.05)。与正常组相比,模型组大鼠肝脏小叶炎症明显升高,并发生严重损伤,与模型组相比,IAL低、中、高剂量组和奥贝胆酸组肝脏病理状态依次减轻。荧光素酶报告发现,KLF5是miR-5195-3p的重要靶点。与IAL组相比,IAL+miR-5195-3p mimic组肝脏损伤明显减轻,纤维化程度明显改善。结论IAL可以明显改善肝功能及炎症因子水平,增强肝脏的抗氧化能力,减轻肝脏脂质过氧化损伤程度,对肝脏纤维化具有一定的防治疗作用,这可能与IAL通过提高miR-5195-3p表达,降低KLF5和N-cadherin水平有关。

气相色谱法测定参芪健胃颗粒中土木香内酯、异土木香内酯的含量

[目的]建立参芪健胃颗粒中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定方法。[方法]采用聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱,载气为高纯氮气;进样口温度为260℃;检测器温度为280℃,柱温为程序升温;检测器为氢火焰离子化检测器(FID)。[结果]土木香内酯、异土木香内酯分别在0.004 032~0.040 32μg、0.004 06~0.040 6μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为100.0%和99.6%。[结论]该方法可用于参芪健胃颗粒的质量控制,是一种操作简单、快速准确的理想检测方法。

气相色谱法测定土木香药材中土木香内酯和异土木香内酯的含量

土木香来源于菊科植物,中华人民共和国药典1985年版(一部)规定其来源为土木香Inula helenium L.和总状土木香I.racemosaHook f.的根。前者主产于河北省安国县,当地称之为青木香、祁木香。

异土木香内酯通过介导ROS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

目的:探讨异土木香内酯通过介导ROS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡机制。方法:不同终浓度异土木香内酯体外诱导Hela细胞24 h及加入抑制剂NAC作为实验组,以正常细胞作为对照组,MTT测定细胞活性;Hoechst 33258染色观察Hela细胞凋亡细胞核变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期和ROS产生变化和MMP水平;Western blot方法测定细胞色素C蛋白、Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:异土木香内酯以浓度依赖性抑制Hela细胞生长;20μmol/L和40μmol/L终浓度异土木香内酯处理Hela细胞24 h后,细胞核出现典型的核固缩及核碎裂凋亡形态,细胞凋亡率增加,可抑制细胞生长于S期,细胞内均可诱导ROS的产生。ROS抑制剂NAC可以明显阻断异土木香内酯对Hela细胞生长的抑制作用,降低细胞凋亡率;20μmol/L和40μmol/L终浓度异土木香内酯处理Hela细胞24 h后,Bax蛋白表达水平明显增加而Bcl-2蛋白表达水平明显降低,同时Caspase-3蛋白也被活化,出现cleaved Caspase蛋白,线粒体内细胞色素C蛋白释放增加。结论:异土木香内酯在体外可通过介导ROS产生及线粒体损伤来抑制人宫颈癌Hela细胞生长且诱导其凋亡,且伴随Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调及Caspase-3活化相关变化。

RP-HPLC测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯含量

目的建立了反相高效液相色谱法同时测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯的方法。方法采用Phenomenex Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5.0μm);流动相为乙腈-0.04%磷酸溶液(50∶50);检测波长:194nm;流速:1.0mL.min-1。结果异构体土木香内酯和异土木香内酯达到基线分离,含量测定的线性良好,线性范围和相关系数分别为0.07～4.80μg.L-1(r=0.9998),0.07～4.85μg.L-1(r=0.9998);回收率分别为97.5%和102.1%;方法精密度良好,RSD分别为1.56%和1.87%(n=5);方法重现性良好,RSD分别为1.67%和0.92%(n=5)。结论所建立的方法简便、快捷、准确,重现性好,可用于藏木香药材及其制剂的质量控制。

用HPLC法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯、异土木香内酯、大黄素和大黄酚的含量

目的：建立HPLC法同时测定六昧安消胶囊中土木香内酯、异土木香内酯、大黄素和大黄酚含量的方法。方法：采用HPLC-二极管阵列检测器法（HPLC—DAD），色谱柱：Agilent Eclipse PlusC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0．04％甲酸（60：40），流速：1．0mL／min，检测波长：220nm，柱温：25℃，进样量：10μL。结果：土木香内酯、异土木香内酯、大黄素和大黄酚的线性范围分别是：2．46～98．4、2．48～99．2、2．56～102．4和2．58～103．2μg／mL，色谱响应线性关系良好。日内和日间RSD均〈2％；最低检测限分别为1．75、1．31、0．50和0．49μg／mL。稳定性结果为峰面积的RSD分别为1．29％、1．40％、1．30％和0．45％，在48h内稳定。加样回收率结果分别为99．0％、100．6％、98．7％和99．7％（n＝6），RSD分别为1．03％、0．62％、1．36％和0．26％。结论：本法快速、简便，重现性好，精密度高，测定结果准确可靠，可作为该制剂的定量测定方法。

RP-HPLC测定藏药六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量

目的：建立六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的高效液相色谱法含量测定方法．方法：色谱柱为Kromasil C18色谱柱（250mm×4．6mm，5pm）；流动相为乙腈-0．1％磷酸溶液（58：42）；流速为1．0mL／min；检测波长：194nm．结果：土木香内酯、异土木香内酯均在0．30～1．50μg范围内呈良好的线性关系；r均为0．9998；平均回收率分别为98．2％（RSD=1．67％，n=5）和97．7％（RSD=1．48％，n=5）．结论：该方法简便、灵敏、准确，可作为六味能消胶囊的质量控制方法．

新疆木香挥发油气相色谱—质谱分析

用SE—54毛细管柱GC—MS联用技术分析了新疆木香(Inula helenium)挥发油的化学成分,初步鉴定了其中31个化合物,占挥发油色谱峰总面积的79.78％,主要成分为土木香内酯(10.14％),异土木香内酯(6.88％),β-榄香烯(7.56％),香橙烯(5.70％),夙毛菊内酯(5.50％),肉豆蔻醚(4.71％)及二氢异土木香内酯(3.78％)等。

藏药二十一味寒水石丸中5个成分的测定

目的建立二十一味寒水石丸（寒水石、木香、牛黄、藏木香等）中木香烃内酯、去氢木香内酯、胆酸、土木香内酯和异土木香内酯的RP-HPLC测定方法。方法二十一味寒水石丸甲醇提取液的测定在迪马Diamonsil-2 C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱进行,流动相分别为乙腈-水（65∶35）、甲醇-0.1%醋酸溶液（75∶25）和乙腈-0.1%磷酸水（52∶48）;体积流量分别为1.0、0.8、1.0 m L/min;柱温均为30℃;其中木香烃内酯和去氢木香内酯检测使用二极管阵列检测器,检测波长225 nm;胆酸检测使用蒸发光散射检测器,漂移管温度90℃,氮气体积流量为1.6 L/min;土木香内酯和异土木香内酯的检测波长为220 nm。结果木香烃内酯、去氢木香内酯、胆酸、土木香内酯和异土木香内酯线性范围分别为0.043 5-0.435μg（r=0.999 8）、0.045-0.45μg（r=0.999 9）、0.506 5-2.533μg（r=0.999 9）、0.64-2.4μg（r=0.999 3）、0.64-2.4μg（r=0.999 9）;平均回收率分别为99.5%、99.7%、99.8%、99.3%、99.6%;RSD分别为0.8%、0.9%、1.3%、0.7%、1.1%（n=9）。结论本方法可用于二十一味寒水石丸中5个成分的定量测定。

气相色谱法测定藏木香中异土木香内酯的含量

本实验采用气相色谱法对藏木香中所含的异土木香内酯进行含量测定.所用柱子是HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25μm)的毛细管色谱柱.氦气作为载气,采用氢火焰离子检测器,实验最后所得的平均回收率为97.43%,RSD为1.90%(n=5).所建立的方法简便、准确、专属性强,可有效地控制藏木香的质量.

新疆木香中土木香内酯与异土木香内酯的分离鉴定

采用络合柱层法从新疆木香Inula helenium石油醚溶出部分分离得到两个结晶,经光谱分析鉴定为土木香内酯(Alantolactone)和异土木香内酯(Isoalantolactone)。

异土木香内酯通过caspase依赖凋亡途径抑制K562/A02细胞增殖

目的:探讨异土木香内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:选用异土木香内酯0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L分别处理K562/A02细胞12、24和48 h,用CCK-8法测定异土木香内酯对K562/A02细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测异土木香内酯对K562/A02细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)、活性氧(reactive oxygen species)及细胞凋亡(apoptosis)的影响;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:异土木香内酯能够明显抑制K562/A02细胞增殖,其作用24 h的IC_(50)值约为(15±1.42)μmol/L(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,0、10、15、20μmol/L异土木香内酯作用24 h后,细胞凋亡率分别为(1.35±0.52)%、(18.07±4.03)%、(27.53±3.01)%和(34.99±4.91)%(P<0.05),同时线粒体膜电位逐渐降低,分别为(96.42±3.59)%、(74.25±6.91)%、(60.97±5.69)%和(31.28±4.95)%;此外,也伴随着细胞内活性氧的增加,分别为(5.03±1.43)%、(17.55±3.85)%、(32.09±3.23)%和(44.38±5.92)%。异土木香内酯能够明显下调BCL-2的表达,上调BAX、cytochrome C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP的表达。结论:异土木香内酯对K562/A02细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用可能是通过caspase依赖的线粒体途径诱导细胞凋亡而实现的。

异土木香内酯对金黄色葡萄球菌肠毒素表达的影响

为了考察异土木香内酯对金黄色葡萄球菌的抗菌活性,并研究其对金葡菌肠毒素表达的影响。应用肉汤微量稀释法测定异土木香内酯对金黄色葡萄黄色球菌标准株的最低抑菌浓度,采用Western-blot分析、蛋白酶试验、肿瘤坏死因子释放试验和荧光定量PCR分析测定异土木香内酯对金黄色葡萄黄色球菌主要肠毒素SEA和SEB表达的影响。结果表明:异土木香内酯在2048μg/mL仍然不能抑制金葡菌的生长,然而低浓度(1～8μg/mL)的异土木香内酯能够剂量依赖性地降低金葡菌SEA和SEB的表达。

异土木香内酯降低金黄色葡萄球菌α-溶血素的表达

为了考察异土木香内酯对金黄色葡萄球菌的抗菌活性,并研究其对金葡菌α-溶血素表达的影响,应用肉汤微量稀释法测定异土木香内酯对金葡菌标准株的最低抑菌浓度,采用溶血试验、Western-blot分析和荧光定量PCR分析测定异土木香内酯对金葡菌α-溶血素表达的影响。结果表明,异土木香内酯在2048μg/mL仍然不能抑制金葡菌的生长,然而低浓度(1～8μg/mL)的异土木香内酯能够剂量依赖性地降低金葡菌α-溶血素的表达。该研究提示异土木香内酯可作为以毒力因子为靶标的抗感染药物开发的先导结构。

HPLC测定蒙药清血八味散中异土木香内酯和土木香内酯含量

目的：建立蒙药清血八味散中异土木香内酯和土木香内酯含量的方法。方法：采用高效液相色谱法,使用色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.04%磷酸水溶液（60∶40）,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为194 nm,柱温为30℃。结果：异土木香内酯进样量在0.05~0.25μg、土木香内酯进样量在0.03~0.15μg范围内与峰面积具有良好的线性关系,平均回收率为异土木香内酯98.9%,RSD 1.65%;土木香内酯99%,RSD 0.62%。结论：该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于作为清血八味散中异土木香内酯和土木香内酯的含量测定。

紫外可见分光光度法测定蒙药复方述达格-4中总内酯的含量

目的:建立蒙药复方述达格-4中总内酯的含量测定方法。方法:以异土木香内酯为对照品,以盐酸、三氯化铁为显色剂,采用紫外可见分光光度法测定述达格-4中总内酯的含量。结果:异土木香内酯在0.842~5.052mg范围内与吸光度呈良好的线性关系Y=0.1493X+0.1399(r=0.9995),平均加样回收率为98.43%,RSD=1.69%(n=6)。结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于述达格-4中总内酯含量的测定。

HPLC同时测定三味甘露散中土木香内酯和异土木香内酯含量

目的：建立同时测定三味甘露散中土木香内酯、异土木香内酯含量的方法。方法采用高效液相色谱法,光电二极管阵列检测器,色谱柱为 CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.4%磷酸（58∶42）,流速1.0 mL/min,检测波长225 nm,柱温30℃。结果土木香内酯在0.083～0.517μg、异土木香内酯在0.108～0.672μg 范围内呈良好线性关系,r＝0.9999；土木香内酯平均加样回收率为97.95%,RSD＝1.31%；异土木香内酯平均加样回收率为97.69%,RSD＝1.24%。结论本方法操作简便,可快速、准确地测定三味甘露散中土木香内酯和异土木香内酯的含量。

HPLC测定四味土木香散中土木香内酯和异土木香内酯的含量

目的:采用HPLC测定四味土木香散中土木香内酯和异土木香内酯的含量。方法:色谱柱为YMC-Pack ODS-A(250×4.6;5min),流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(10:6:9,氨水调pH7),流速为1mL.main-1,检测波长为220nm。结果:土木香内酯进样量2.51～75.3μg、异土木香内酯进样量2.50～75.1μg时与峰面积呈良好的线性;平均回收率分别为:99.86%(RSD=0.32%)和100.34%(RSD=1.12%)。结论:本方法简便、快捷、准确,适用于四味土木香散中土木香内酯和异土木香内酯的质量控制。