大鼠骨髓单个核细胞诱导扩增为内皮祖细胞的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件

目的筛选大鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)诱导扩增为内皮祖细胞(BM-EPCs)的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件,构建一个高效、高产量、高纯度的骨髓来源BM-EPCs分离培养诱导扩增方法。方法取2周龄雄性SD大鼠,脱颈处死后分离大鼠双侧胫骨和股骨,收集骨髓细胞悬液。配制30%、50%、60%和70%浓度的Percoll细胞分离液,通过Percoll密度梯度离心法分离出大鼠BMMNCs种子细胞,并计算活细胞比例。将获得的BMMNCs分为1×10^(5)、5×10^(5)、1×10^(6)、2.5×10^(6)、5×10^(6)、1×10^(7)六个组别,分别接种于25 cm^(2)无菌培养瓶中,培养7 d后镜下观察各组细胞集落形成数目,并计算每10^(6)细胞的集落形成数。运用Graphpad prism9.5软件进行Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定相关性,根据其P值将有统计学差异的接种数目纳入范围,随后使用R语言编程定义计算函数,根据已知种子细胞总数及相关性函数限制下,通过迭代寻找最佳的BMMNCs细胞接种数目。分别配制20、50、100 nmol/L浓度的人纤连蛋白(FN)溶液,以不添加FN的空白溶液为对照,分别包被空白培养瓶2、6、12、24 h,将收集的48 h未贴壁BMMNCs接种于FN包被的各培养瓶中,静置培养3 d后计算各组集落形成数目,确定FN包被的最佳浓度与时间。接种48 h未贴壁BMMNCs于25 cm^(2)培养瓶底,使用EGM-2完全培养基定向诱导,于显微镜下观察集落形成及诱导扩增进程。取培养14 d的BM-EPCs,分别采用双阳性染色法和流式细胞术鉴定BM-EPCs的纯度。结果使用Percoll分离法可把BMMNCs细胞清晰的分为5层,其中30%与50%Percoll细胞分离层之间为BMMNCs活细胞比率最高。BMMNCs的最优接种数目为2.5×10^(6)个。以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h皆可有效促进细胞集落形成。细胞接种7 d后获得形态良好的铺路石样细胞并建立生长优势,表明BMMNCs已经诱导成为形态良好的BM-EPCs。Dil-Ac-LDL/FITC-UEA-1双阳性细胞占比为91.89%±5.77%,CD31+KDR阳性率为90.73%±0.61%、CD14阳性率为0.53%±0.17%、CD45阳性率0.77%±0.34%,说明获得的BM-EPCs纯度良好。结论大鼠BMMNCs诱导扩增为BM-EPCs过程中,可使用Percoll密度梯度离心法分离BMMNCs,BMMNCs的最优细胞接种数目为2.5×10^(6)个,细胞培养瓶包被条件为以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h,分离培养诱导获得的BM-EPCs形态和纯度均良好。

CVT铁磁谐振过电压的抑制与不同故障下二次电压特征分析

针对220 kV CVT(电容式电压互感器)因铁磁谐振故障产生的过电压问题与3U0监测装置误报警的问题,结合实际参数建立仿真模型,分析了各个参数对于过电压的影响,给出了最佳参数配置并对电路拓扑结构进行优化,有效地抑制了铁磁谐振过电压。建立仿真模型对比了各个工况下的二次电压数据。仿真结果表明:二次侧接地再恢复和一次侧合闸操作均会引发铁磁谐振,同时伴随着1/3次谐波的产生,但前者引发的铁磁谐振较为严重;采用速饱和阻尼器对铁磁谐振进行抑制,阻尼电阻为5Ω时有最佳的抑制效果;阻尼器两端并联定值电阻可以有效提高抑制效果,且当电阻阻值为5Ω时效果最佳;3U_0在不同工况下对应不同的频谱特征,可据此区分不同故障。

基于双速度环观测器的光电平台稳定方法

本文设计了一种可以使光电伺服平台对目标对象进行高精度、稳定追踪的基于双速度环的扰动观测器,可以消除光电平台内部摩擦力矩、外部载体扰动以及传感器噪声的影响,提升系统的动态响应性能。首先,根据直流电机工作原理与负载模型,建立双速度环的数学控制模型。接着,通过分析多类型传感器的速度信号频谱和响应性能,选择噪声和延时较小的圆光栅代替传统测速设备,作为速度控制内环;同时选择光纤陀螺作为速度外环的反馈设备。然后,基于陀螺速度信号设计扰动观测器,对内速度环中的扰动补偿残差和外部载体扰动信号进行观测,并进行前馈信号补偿。实验结果表明,双速度环观测器的控制方法可以将系统调节时间降至原来的45%,在不同幅值(0.25°~2°)和频率(0.25 Hz~2 Hz)的正弦扰动信号下,该方法均能显著提高系统的扰动抑制能力,并将系统隔离度由原来的20.9 dB提升至30 dB。本文所提出的基于双速度环扰动观测器的控制方法满足光电跟踪平台快速响应、跟踪稳定、抗干扰能力强等要求。

人脾脏巨噬细胞的分离与纯化

目的 探索分离纯化大量人脾脏巨噬细胞 (MΦ)的方法。方法 选取 10例手术切除的脾脏 ,机械研磨法获得脾脏组织细胞混悬液。采用贴壁培养的方法进行MΦ的分离与纯化 ,相差显微镜下动态观察 ,明确贴壁培养的合适时间 ,详细记录MΦ分离纯化过程各步骤所需时间。收获的MΦ ,台盼蓝染色判定活力并计数 ,统计出平均每克脾脏组织收获的MΦ数及其纯度。相差显微镜、透射电镜观察分离纯化MΦ的形态特征。结果 分析贴壁培养各时间段的细胞纯度及活力 ,确定MΦ培养的合适时间为 2～ 3h。贴壁培养纯化后 ,平均从每克脾脏组织可收获 (0 .2 5± 0 .0 3)× 10 8个MΦ ,纯度为 (90± 5 ) % ,细胞活力≥ 99% ,细胞结构及各种细胞器结构均完整。结论 贴壁培养方法分离纯化人脾脏MΦ是成功可行的 ,收获的MΦ数量大、纯度高、活力好 。

枫杨树皮抗菌物质的分离鉴定研究

依据生物活性跟踪法的程序(体外抗菌为药理筛选指标),通过萃取、沉淀、硅胶吸附柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱的现代分离手段,对传统外用抗菌中药枫杨树皮的抗菌物质进行了系统筛选,发现乙醇提取物的亲脂性萃取部位(氯仿部位、乙酸乙酯部位、石油醚部位)有抗菌作用,其他部位无活性;首次从氯仿部位和乙酸乙酯部位筛选出4个抗菌活性单体,TLC确定纯度后,经EI-MS、1D NMR(1H、13C、DEPT)和2D NMR(HSQC、1H-1H COSY、HMBC)分别鉴定为5-羟基-1,4-萘醌(1)、5-羟基-2-甲氧基-1,4-萘醌(2)、2,6-二甲氧基-1,4-对苯醌(3)、没食子酸(4)。3个类别抗菌化学母核(苯醌、萘醌、苯甲酰)的多个抗菌成分共同构成枫杨的抗菌物质基础。多成分活性中心抗菌物质基础的阐明,可为研发不易产生耐药性的枫杨抗菌部位药和药材质量标准研究奠定理论基础。

层间组合隔震结构随机动力可靠度分析

为了限制隔震层在大震作用下的层间位移,基于在隔震层增设黏滞阻尼器的层间组合隔震体系,分别采用刚度非退化和退化的Bouc-Wen模型模拟隔震层及其他楼层的恢复力特性,建立了层间组合隔震结构在大震作用下的运动方程,运用虚拟激励法对该体系进行随机响应分析,得到了隔震层及其他各层层间响应峰值的统计量。以隔震层和其他各层的最大层间位移作为控制指标,建立极限状态方程,采用当量正态化法(JC法),基于串联模式计算了体系的动力可靠度。通过数值分析,比较了层间组合隔震、层间隔震与非隔震结构的总体失效概率。最后通过改变黏滞阻尼器的速度指数和黏滞阻尼系数,系统地研究了黏滞阻尼器参数对层间组合隔震结构动力可靠度的影响。结果表明:层间组合隔震结构的总体失效概率比层间隔震结构和非隔震结构都要低。当黏滞阻尼系数不变时,速度指数越小,结构的总体失效概率越低;当速度指数不变时,随着黏滞阻尼系数的增加,结构的总体失效概率呈现出先减小后增大的趋势,结构的主要失效模式也逐渐由隔震层过渡为上部结构。

坦克炮弹药共用底火装定能量双向隔离系统设计方法

针对坦克炮、自行火炮信息化弹药膛内实时装定问题,采用共用底火的装定系统对入膛后的弹药进行实时装定。为了解决共用底火装定系统中存在击发能量流与装定能量流对装定回路和击发回路产生影响的问题,建立了能量流双向隔离系统边界条件和隔离系统函数,并通过对函数的参数取值设计了针对特定击发能量类型的隔离系统。试验结果表明,采用该方法得到的隔离系统能够有效地隔离装定能量流和击发能量流,且其对击发能量流的损耗很小。

小鼠骨骼肌源间充质干细胞的分离与培养

为观察成体小鼠肌肉组织中是否含有间充质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSC) ,将分离胶原酶消化的肌肉单个核细胞 ,在含 10 %胎牛血清的α MEM /F12培养液中培养 ,观察培养细胞的形态、细胞化学及增殖特性特征 ,用流式细胞术分析细胞表型 ,并观察细胞体外向成骨细胞分化能力。结果显示 ,从小鼠肌肉组织中分离和培养获得的细胞具有良好的增殖特性 ,CD3 4及CD45阴性 ,CD2 9及Sca 1阳性率在 90 %以上。细胞化学染色显示 ,细胞非特异性酯酶和酸性磷酸酶为阳性 ,碱性磷酸酶阴性 ,糖原为弱阳性。细胞经维生素C ,β 磷酸甘油及地塞米松诱导后 ,碱性磷酸酶活性明显增强 ,阳性率达到 94%以上。结论 :成体小鼠肌肉组织中含有间充质干细胞 。

糖蜜发酵生产丙酮丁醇的研究

分离选育出４株丙酮丁醇发酵菌种，分别编号为：ＣＬＳ．００１，００２，００３，００４，都属厌氧梭状芽孢杆菌，它们可利用糖蜜发酵产生丙酮和丁醇。经正交试验，选出最佳发酵条件。分离株ＣＬＳ．００４在糖蜜浓度１０～１５ＢＸ、３５～３８°Ｃ、ｐＨ６．８～７．２条件下，发酵总溶剂的生成率和糖利用率分别可达到３０％和８５％以上。

Proteome of human colon cancer stem cells:A comparative analysis

AIM： To isolate and identify the biological characteristics of human colon cancer stem cells （SW1116 cells） and further study their proteome. METHODS： SW1116 cells were isolated and cultured with a serum-free medium （SFM）. Sphere formation was assayed to observe the formation of colon cancer stem cell spheres. SW1116 cells were inoculated into a serum-containing medium for observing their differentiation characteristics. Proliferation curve and cross-resistance of SWl116 cells to different drugs were detected by MTT. Percentage of SP cells in SW1116 cells was detected with Hoechst33342 staining. Telomerase activity in SW1116cells was checked by polymerase chain reaction （PCR）-enzyme linked immunosorbent assay. Expressions of stem cell relevant genes and proteins were detected by reverse transcription-PCR and Western blot, respectively. Total protein was isolated from SW1116 cells by two-dimensional gel electrophoresis （2-DE） and differentially expressed proteins were identified by tandem mass spectrometry （MALDI-TOF/TOF）. RESULTS： The isolated SW1116 cells presented as spheroid and suspension growths in SFM with a strong self-renewal, proliferation, differentiation and drug-resistance ability. The percentage of SP cells in SW1116 cells was 38.9%. The SW1116 cells co-expressed the CD133 and CD29 proteins. The telomerase activity in SW1116 cells was increased. The expressions of different stem cell relevant genes and proteins were detected. The proteomic analysis showed that the 26 protein spots were differently expressed in SW1116 cells and 10 protein spots were identified as ubiquitin fusion- degradation l-like protein, nuclear chloride channel protein, tubulin 13, Raichu404X, stratifin, F-actin cap- ping protein α-1 subunit, eukaryotic translation elongation factor 1 delta isoform 2, hypothetical protein, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase and guanine nucleotide binding protein 13 polypeptide 2-like 1, respectively. CONCLUSION： SW1116 cells are biologically characterized by self-renewal, proliferation and differentiation, and the differently expressed proteins in SW1116 cells may be essential for isolating cancer stem cells.

AP1000核电站屏蔽厂房BIS-TMD新型结构及其抗震性能研究

针对核电站传统结构在服役期间可能出现的地震破坏,应用建筑结构隔震减震技术,将AP 1000核电站的非能动安全理念推广到结构抗震领域,提出了屏蔽厂房基础隔震-调频质量阻尼(BIS-TMD)新型结构,大幅度地提高了屏蔽厂房的抗震安全。基于屏蔽厂房各部分的功能要求,修改了屏蔽厂房各部分的连接方式,在增加附加质量很小的情况下,实现了本新型结构。基于AP 1 000基础隔震结构的研究成果,构建了本新型结构的参数优化模型,给出了TMD支座的选型参数,研究了本新型结构的减震机理。通过与传统结构、基础-隔震结构和TMD结构等比较,表明了本新型结构综合了BIS和TMD的优点,能够很好地抵御地震大小和频谱、重力水箱水质量、TMD支座和BIS支座力学性能等因素变化对减震效果的影响;具有显著的减震效果,稳定的抗震鲁棒性和良好的场地适用性,能够很好地满足核电站抗震安全的要求。

日本血吸虫成虫31/32KD抗原的纯化及其免疫化学特性

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫成虫31/32KD抗原。分离的抗原经银染色及免疫印迹法分析证明已达免疫纯及生化纯级。该抗原PAS染色呈阴性,经过碘酸钠处理后不失去活性,在琼脂糖凝胶电泳中趋向阳极。鉴于血吸虫成虫31/32KD组分是一种主要血清学抗原,它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断提供了条件。

村镇住宅基础隔震效果分析

以中原地区出现最多的一类村镇住宅为例,进行标准化、统一化的隔震设计,探索实践隔震设计全流程设计方法,形成标准化的设计选用表,并且对村镇住宅基础隔震效果进行了分析.结果表明:对于6层以下的村镇住宅建筑结构,随着住宅层数的增加及住宅平面总长度的变大,隔震效果大体上逐渐增强,但变化逐渐趋于平缓.

甲基化特异性PCR技术的质量控制及改进

目的:改进甲基化特异性PCR(MSP)技术并控制实验质量.方法:采用改进的MSP法检测正常胃粘膜及胃癌组织中caveolin-1基因的甲基化状况.运用饱和酚-氯仿抽提法提取DNA,其中石蜡包埋组织连续切片厚度为8μm;采用热启动PCR:反应体系为25μL、变性温度设定为95.5℃、循环数设定为30.结果:新鲜组织较石蜡包埋组织更适于MSP实验,但福尔马林固定石蜡包埋组织同样可用于MSP实验,并且8μm厚的石蜡包埋组织能获得较完整的DNA链.热启动PCR效果良好:25μL体系敏感性优于50μL体系,95.5℃可以使含CpG岛的DNA链解链更完全,30个循环足以扩增小于150bp的目的片段.结论:采用改进的MSP技术,可获得较好的DNA模板,提高实验的灵敏度和成功率,更适于甲基化的研究.

变速直驱开关磁阻风力发电系统雷电防护技术研究

根据风力发电机组防雷保护的研究成果和相关行业防雷标准,分析雷电的形成、破坏机理及其破坏形式。结合开关磁阻风力发电系统特征,划分雷电防护区域;按照风力发电机组防雷设计应该遵循的原则,通过外部防护和内部防护相结合,提出开关磁阻风力发电系统各部件防雷保护措施。为工程实践中开关磁阻风力发电系统的雷电防护提供一定的参考。

光电设备的三维减振系统设计

分析了振动对光电设备的影响,针对光电设备中光学装置的减振设计,提出了三维减振设计构想。设计了一套既有隔振缓冲能力,同时也具备抑制角振动功能的三维减振系统。对三维减振系统的抗振动设计和抗冲击设计进行了分析计算,并通过台架试验验证了减振特性,能够满足光电设备的使用要求。

半刚性基层上蜡制养护剂作水泥混凝土路面隔离层试验研究

主要对半刚性基层上采用蜡制隔离剂作水泥混凝土路面隔离层进行路面层间力学性能试验研究,探讨了半刚性基层上铺筑水泥混凝土面层时采用蜡制隔离层与无隔离层时的层间力学性能差别。通过室内外试验获得不同构造深度和不同剂量的蜡制隔离层层间力学性能参数,为实体工程路面设计、施工控制提供了科学依据。

关于GW_5-66型隔离开关改进的几点阐述

针对GW5 66型隔离开关在导电、传动、维修等方面存在的问题 ,文中主要阐述了如何采取措施进行改进。改进后的隔离开关 ,无论在性能和可靠性等方面都获得很大提高。

鸡肾型传染性支气管炎病毒分离及鉴定

某鸡场暴发主要以侵害鸡肾脏的疾病,引起肾脏肿大、苍白,肾小管和输尿管有白色尿酸盐沉积,伴有下痢。产蛋鸡产蛋下降,雏鸡的死亡率达25%～90%。从感染鸡分离到1株疑为鸡肾型传染性支气管炎病毒,接种鸡胚,鸡胚出现侏儒化、卷曲等特征性病变。

一株山羊源浅绿色气球菌的分离

从吉林省松原市病死山羊体内分离到了1株优势菌,通过形态学、分子生物学以及MALDITOF MS对该菌进行鉴定,采用纸片法检测该菌药物敏感程度。结果表明:分离到的优势菌为浅绿色气球菌。药敏试验结果显示该菌对苯唑西林、万古霉素等6种抗生素敏感,对大观霉素、四环素等4种药物中度敏感,对红霉素、克拉霉素等6种抗生素耐药。