The First Total Synthesis of Isoliquiritin

A first total synthesis of isoliquiritin was accomplished starting from p-hydroxybenzaldehyde and 2,4-dihydroxyacetylphenone. The key step is condensation reaction. In synthetic process need not protect the hydroxy group of reacting substance.

Intestinal permeability of liquiritin and isoliquiritin in the Caco-2 cell monolayer model

The intestinal permeability of two flavonoid compounds liquiritin （LQ） and isoliquiritin （ILQ） was investigated using the Caco-2 cell monolayer model. In order to evaluate the permeability and predict the absorption mechanism of the two compounds, the study on bidirectional permeability from the apical （AP） side to the basolateral （BL） side as well as from the BL side to the AP side was carried out. The determination was performed by HPLC-UV method. And the permeability parameters, especially the apparent permeability coefficients （Papp）, were then calculated. The Papp values of LQ and ILQ are （5.40±0.16）× 10^-7 and （8.69±0.15）× 10^-7 cm/s, respectively. The results of time- and concentration-dependent transport experiments indicate that both LQ and ILQ are poor absorbed mainly through passive diffusion.

咳露口服液指纹图谱的建立及6种成分的含量测定

目的 建立咳露口服液的指纹图谱及多成分质量控制方法。方法 用UPLC与“2012版中药指纹图谱相似度评价系统”建立咳露口服液的指纹图谱方法并进行相似度评价,同时测定6种成分。结果 建立了UPLC测定10批咳露口服液指纹图谱方法,在250 nm处共标记出25个共有峰,指认出4个共有峰,354 nm处标定出19个共有峰,指认出5个共有峰,与对照图谱的相似度> 0.99,10批次咳露口服液芹糖异甘草苷、异甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸铵含量范围分别为25.057~29.652、26.404~32.072、824.457~1 291.929、319.541~557.251、4.243~15.839、250.566~479.037μg·mL^(-1)。结论 建立的咳露口服液UPLC指纹图谱及多成分测定方法操作简单,结果可靠,可为后期咳露口服液药效物质研究奠定基础。

芹糖异甘草苷对小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用

目的 探讨芹糖异甘草苷(ILA)在体内通过影响免疫系统对小鼠认识水平和抗肿瘤作用的影响。方法 尾静脉注射的方式给小鼠注射ILA;采用水迷宫检测小鼠的认知水平;流式细胞术检测免疫细胞T细胞、B细胞、NK细胞的数量;利用重度免疫缺陷鼠B-NDG进行免疫重建观察ILA与免疫系统的关系;检测脾脏组织免疫细胞T细胞、B细胞、NK细胞数量;B-NDG小鼠血液和海马组织进行RNA测序分析ILA调控的相关信号通路;采用CCK-8法体外检测人宫颈癌细胞活性,初步探讨ILA与肿瘤之间的联系。结果 水迷宫结果表明ILA不能改善小鼠的认知能力。流式细胞术检测免疫细胞中的T细胞、B细胞、NK细胞数量,结果表明ILA能稳定增加正常小鼠血液(P<0.01)和脾脏组织(P<0.01)中NK细胞的数量,ILA能增加重度免疫缺陷小鼠脾脏组织中的NK细胞数量并促进NK细胞的重建(P<0.01)。B-NDG小鼠血液RNA测序结果表明,ILA调控血小板激活、病灶黏附、趋化因子信号通路以及FcγR介导的吞噬凋亡作用,在血小板激活通路中上调Snap23、Rap1b、Fcer1g、Fermt3、p2ry12、Gnai2基因。B-NDG小鼠海马组织RNA测序结果表明,ILA可以刺激Th1和Th2和Th17细胞分化通路,可以激活吞噬小体。CCK-8法结果表明,ILA具有抑制人宫颈癌细胞(C33A)的细胞活性作用(P<0.01)。结论 芹糖异甘草苷能够激活免疫系统增加NK细胞的数量,驱动吞噬作用。同时,芹糖异甘草苷还具有抑制肿瘤细胞生长的作用,可用于抗肿瘤药物的开发。

HPLC-DAD同时分析甘草中7种有效成分

目的采用HPLC—DAD中梯度洗脱和检测波长时间序列采样的方法，建立甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch．）中4种黄酮成分（甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素）和3种甘草皂苷成分（甘草酸、甘草皂苷G2、乌拉尔甘草皂苷B）的同时分析方法。方法采用C18（4．6mm×250mm，5um）色谱柱。流动相：乙腈-（0．5％醋酸铵＋1％冰醋酸），梯度洗脱0～12min从6：94到22：78，12～25min从22：78到25：75，25—45min从25：75到40：60，45～50min从40：60到6：94，保持5min；检测波长：时间序列采样。结果7种成分的线性关系良好，平均加样回收率在98％～103％之间。结论该方法准确、灵敏度高，可用于甘草药材质量的评价。

HPLC法同时测定白芍、甘草药对提取物中9种有效成分

目的建立反向高效液相色谱法,同时测定白芍甘草药对提取物中芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素9种成分。方法采用Dikma Technologies-C18(200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱,体积流量1.0mL/min,检测波长为267nm(0～13min)、258 nm(13～17min)、230 nm(17～27min)、276 nm(27～42min)、360 nm(42～46 min)、276nm(46～50min)、230nm(50～53min)、275nm(53～55min)、250nm(55～90min),柱温30℃。结果在色谱条件下,芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、芹糖基异甘草苷、异甘草苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸、异甘草素的进样量分别在0.004 476～0.044 76μg,0.014 67～0.146 7μg,0.004 975～0.049 75μg,0.001 031～0.010 31μg,0.005 813～0.058 13μg,0.001 744～0.017 44μg,0.000 982～0.009 82μg,0.018 20～0.182 0μg,0.000 098～0.000 98μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;加样回收率(n=5)均在96.3%～103.4%,RSD均小于2.5%。结论本法快速、准确,重复性好,可更好地控制白芍炙甘草药对提取物的质量。

HPLC法分析12产地甘草中4种主要黄酮类化合物的含量

目的:分析不同产地甘草中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素的含量,为不同产地甘草的质量评价提供参考。方法:从全国7省区12产地采集甘草种子,栽培于北京中医药大学药草园,1年后每产地随机挑取15株甘草作为实验材料,利用ITS序列鉴定其基原,采用HPLC法测定其甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的含量,分析各成分含量的差异性及相关性。结果:ITS鉴定结果表明甘草样品均为乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)。HPLC分析结果显示:甘草苷的标准曲线为Y=0.000 5X+1×10^(-5)(R^2=0.999 9),在0.113 7μg^0.854 1μg范围内线性良好;异甘草苷的标准曲线为Y=0.000 3X-3×10^(-5)(R^2=0.999 9),在0.025 3μg^0.204 8μg范围内线性良好;甘草素的标准曲线为Y=0.000 3X+1×10^(-4)(R^2=0.999 8),在0.009 3μg^0.092 7μg范围内线性良好;异甘草素的标准曲线为Y=0.000 2X-7×10^(-5)(R^2=0.999 9),在0.004 6μg^0.030 7μg范围内线性良好。不同产地甘草中4种黄酮类成分含量差异显著,其中山西应县甘草样品的甘草苷、异甘草苷、甘草素及异甘草素的含量均为最高,而黑龙江肇州县、新疆尼勒克县、额敏县、阿拉尔县甘草样品的甘草苷、异甘草苷、甘草素及异甘草素的含量普遍较低。且所有样品中4种黄酮类化合物的含量之间均存在显著相关关系。结论:不同产地甘草质量差异性显著,本实验结果可以为不同产地甘草的质量评价提供参考。

多壁碳纳米管与甘草苷和异甘草苷的选择性吸附作用

Selective adsorption of active ingredients liquiritin and isoliquiritin from Glycyrrhiza uralensis Fisch with multi-walled carbon nanotubes(MWNTs) has been studied.Distribution coefficients of liquiritin between ethanol solvent and r-MWNTs or o-MWNTs in 293K is 37.5 and 43.3,while the distribution coefficients of isoliquiritin between ethanol solvent and r-MWNTs or o-MWNTs is 717 and 1080,respectively.It was indicated that the distribution coefficient of isoliquiritin adsorbed by MWNTs was much larger than that of liquiritin,and oxidation treatment of MWNTs could obviously enhance their adsorption ability.The possible reasons that MWNTs can selectively adsorb isoliquiritin other than liquiritin were discussed on the bases of molecular structure of the active ingredients and their interaction with nanotubes.

黄甘草化学成分的研究

本文首次报道自豆科甘草属黄甘草Glycyrrhiza eurycarpa P.C.Li(G.Korshinskyi non Grig.)根及根茎中分得四个黄酮甙,根据理化性质及光谱数据(IR,UV,MS,~1HNMR,^(13)CNMR及CD),化合物Ⅰ的结构推定为芒柄花素-7-O-[D-β-D-呋喃芹糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖甙(formononetin-7-O-[D-apio-β-D-furanosyl(1→2)]-β-D-glucopyranosidc),为一新天然产物,命名为黄甘草甙(glycyrosidc,Ⅰ)。化合物Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ分别鉴定为甘草甙(liquiritin,Ⅱ)、异甘草甙(isoliquiritin,Ⅲ)和夏佛托甙(schaftoside,Ⅳ)。

HPLC波长切换法对芍药甘草汤中不同极性部位化学成分的比较研究

目的:研究芍药甘草汤中5个成分(芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷、异甘草苷、甘草酸)在不同极性部位中的分布和含量变化情况。方法:采用Dikma Technologies-C_(18)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相是乙腈(A)-0.1%磷酸水(B),梯度洗脱:0~20 min,14%A^20%A;20~30 min,20%A^25%A;30~50 min,25%A^40%A;50~70 min,40%A^55%A,检测波长:0~20 min,波长为230 nm;20~30 min,波长为276 nm;30~50 min,波长为360 nm;50~70min,波长为248 nm,流速为1.0 m L·min-1,柱温为30℃。结果:芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷、异甘草苷和甘草酸在乙酸乙酯部位中含量依次为:8.718 mg·g^(-1),24.35 mg·g^(-1),29.49 mg·g^(-1),18.59 mg·g^(-1),12.40 mg·g^(-1);在乙醇部位中含量依次为:95.84 mg·g^(-1),161.8 mg·g^(-1),28.89 mg·g^(-1),8.991 mg·g^(-1),29.37 mg·g^(-1);在水部位中含量依次为:14.25 mg·g^(-1),22.50 mg·g^(-1),48.44 mg·g^(-1),0.7242 mg·g^(-1),19.30 mg·g^(-1)。结论:通过含量测定的结果显示,指标性成分在乙醇部位中含量最多,优选出乙醇部位为最佳极性部位。

HPLC法同时测定甘草及甘草头中4种成分含量

目的：建立HPLC法同时测定甘草饮片及甘草头中甘草苷、异甘草苷、甘草素和甘草酸的含量。方法：采用 Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），0.1%磷酸水-乙腈梯度洗脱，流速1.0 mL· min-1，检测波长为276 nm（0-18 min）、360 nm（18-24 min）、276 nm（24-30 min）、250 nm（30-65 min），柱温30℃。结果：在该色谱条件下，甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸的进样量分别在0.1085-1.085、0.0168-0.168、0.00494-0.0494、0.407-4.07μg范围内线性关系良好。加样回收率均在96.61%-100.89%，RSD值均小于0.81%。5个不同批次的甘草饮片中4种成分的含量分别为0.513%、0.0729%、0.0484%、1.945%；2个批次甘草头中4种成分含量分别为0.456%、0.0636%、0.0362%、1.630%。结论：4种成分的响应与浓度之间呈良好的线性关系；甘草头中4种成分的含量与甘草饮片基本相当，可作为活性成分提取的原料加以利用。

六种甘草属植物根中黄酮类成分的高效液相色谱分析

应用反相高效液相色谱技术,对从甘草中提取的10个黄酮类化合物进行了分离,并且分析了6种甘草属植物根的9个样品的黄酮类化合物的组成,结果表明,不同种的甘草中所含黄酮类化合物的成分、含量均不同。

白芍甘草药对中芹糖异甘草苷和异甘草苷在大鼠体内药代动力学研究

目的:比较炙甘草与白芍配伍前后,炙甘草中芹糖异甘草苷和异甘草苷的药动学行为差异。方法:采用文献报道的HPLC法,同时测定大鼠灌服炙甘草药材、白芍甘草药对后血浆中芹糖异甘草苷和异甘草苷的含量,计算药代动力学参数并进行t检验。结果:与白芍配伍后,异甘草苷的AUC显著降低,通过药时曲线趋势可见对芹糖异甘草苷亦有影响,但药代动力学参数表现不明显,尚需进一步研究。结论:白芍可能通过抑制炙甘草中的芹糖异甘草苷的代谢,增加其生物利用度。

粗毛甘草化学成分研究

从新疆产粗毛甘草(Glycyrrhiza aspera Pall.)根中分离得到7个化合物,经光谱解析和化学关联分别证明为甘草酸(glycyrrhizic acid)、甘草甙(liquiritin)、异甘草甙(isoli-quiritin)、甘草酚(glycyrol)、异甘草酚(isoglycyrol)、甘草香豆素(glycycoumarin)和异甘草香豆素(isoglycycoumarin)。这些成分均为首次从粗毛甘草中获得,其中异甘草香豆素是新化合物。

复方甘草片中甘草酸、异甘草苷、异甘草素的测定

目的：建立复方甘草片中甘草酸、异甘草苷和异苷草素的含量定量分析的高效液相色谱(HPLC)方法。方法：采用色谱柱ODS-C_(18)(4．6mm×250mm,5μm),甘草酸流动相为甲醇：冰醋酸：水(70：1：30)；检测波长254nm。异甘草苷与异甘草素在同一条件下检测,其流动相为甲醇：冰醋酸：水(50：2：50)；检测波长346nm；三者流速均为1ml /min；进样量为10μl；柱温为25℃。结果：复方甘草片中甘草酸的含量为7．51mg/g,异甘草苷和异甘草素的含量分别为3．01mg/g,0．448mg/g,上述3种组分的平均回收率分别为98．32%,99．57%和98．59%。结论：本方法可作为复方甘草片中的甘草酸、异甘草苷和异甘草素的含量质量控制的一种有效方法。

三(3,6-二氧杂庚基)胺(TDA-1)相转移催化合成异甘草苷

以TDA-1为相转移催化剂,碳酸氢钠/氯化钾体系为碱性介质,就对羟基苯甲醛与1-溴-2,3,4,6-O-四乙酰基--αD-吡喃葡萄糖的糖苷化反应条件进行了探讨,着重考察了反应时间、反应温度和催化剂用量对-βD-甲乙酰基葡萄糖对甲酰苯基苷合成收率的影响;并利用硼酸/哌啶/二甘醇二乙醚催化体系,通过-βD-四乙酰基葡萄糖对甲酰苯基苷与2,4-二羟基苯乙酮的羟醛缩合反应,对异甘草苷的合成工艺进行了研究,其结果经红外光谱和核磁共振氢谱确证,总收率为27%。

异甘草素对人鼻咽癌CNE2细胞裸鼠移植瘤模型的放疗增敏作用

目的观察异甘草素对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应,并探讨其与乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平之间的关系。方法取低分化鼻咽癌CNE2细胞接种于雌性裸鼠皮下(共接种20只),待肿瘤结节4~6 mm时,将裸鼠随机分为4组,分别为对照组、异甘草素组(50 mg·kg^(-1)·周^(-1))、放疗组、异甘草素(50 mg·kg^(-1)·周^(-1))联合放疗组。依照各组不同治疗措施处理,定期测量瘤体体积,20 d后处死裸鼠,剥离瘤体称重。分别计算4组抑瘤率。采用荧光定量PCR检测瘤体组织中HIF-1α及VEGF mRNA的表达水平。结果异甘草素联合放疗组移植瘤的体积和重量显著下降,与对照组、单纯异甘草素及单纯放疗组比较差异均有统计学意义(P<0.05);异甘草素联合放疗组HIF-1α、VEGF mRNA表达水平明显下降,与对照组及放疗组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论异甘草素能增强鼻咽癌裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其作用机制可能与抑制HIF-1α、VEGF表达水平,从而抑制肿瘤血管生成作用有关。

高效液相色谱指纹图谱评价泻白散及其3种单味药内在质量

建立高效液相色谱指纹图谱评价泻白散及其炒桑白皮、地骨皮、炙甘草3种单味药内在质量的方法。采用C_(18)色谱柱(250 nm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温为30℃,流量为1 mL/min,检测波长为254 nm,进样体积为5μL,分析时间为120 min,采用二级管阵列检测器进行测定,用高效液相色谱(HPLC)进行指纹图谱研究。结果表明,市售桑白皮饮片13个批次之间的相似度为0.024~0.975;市售地骨皮饮片13个批次之间的相似度为0.061~0.983,不同批次间差别较大;炙甘草饮片13个批次之间的相似度为0.978~0.998,相似度非常高。对14批泻白散组方的水煎液进行HPLC指纹图谱分析发现,有9个共有峰,可指认其中的地骨皮乙素、异甘草苷、甘草酸3个峰。该方法能够反映市售泻白散及其3种单味药的内在质量,为泻白散经典名方的质量标准制定及临床用药提供参考。

Neuroprotective effect of isoliquriitin on corticosterone-induced apoptosis in PC12 cells

OBJECTIVE Isoliquiritin,a flavonoid glycosides compound,possess a broad spectrum of pharmacological activities including antioxidant,antiinflammatory. However,rare studies in the field of isoliquiritin antidepressant-like effects have been carried out,the molecular mechanism also remains unclear. In this study,the model of corticosterone-damaged rat adrenal pheochromocytoma(PC12)cells has been used to generate an in vitro experimental model of depression. The aim was to investigate thecytoprotective efficiency and potential mechanisms of isoliquiritin in corticosterone-damaged PC12 cells. METHODS The cells were treated with 400 μmol·L^(-1)corticosterone in the absence or presence of isoliquiritin for 24 h; cells viability and lactate dehydrogenase(LDH) leakage were then determined,Hoechst 33342/PI and Annexin V/PI double staining were performed to evaluate the cytoprotective efficiency of isoliquiritin. Next,intracellular calcium([Ca^(2+)]_i),mitochondrial membrane potential(MMP),reactive oxygen species(ROS),malondialdehyde(MDA),the activity of superoxide dismutase(SOD)and catalase(CAT),and Western blotting analysed for the expression of Bcl,Bax,caspase-3 and cytochrome C(Cyt-C) were investigated to explore the potential mechanisms. RESULTS The results of the present study showed that pretreatment of PC12 cells with isoliquiritinsignificantly prevented the corticosterone-induced cell apoptosis. In addition,isoliquiritin increased the activity of SOD and CAT,decreased the contents of ROS and MDA. These findings suggest that isoliquiritin provided a protective action against corticosterone-induced celldamage by reducing oxidative stress. Furthermore pretreatmented with isoliquiritin reduced corticosterone-induced mitochondrial dysfunction by preventing mitochondrial membrane potentials dissipation.Our findings indicated that isoliquiritin might exert its therapeutic effects viaregulating mitochondrial dysfunction. Moreover isoliquiritin strongly attenuated [Ca^(2+)]_i overload and down-regulation of Bax,caspase-3 and Cyt-C protein expression,up-regulation of Bcl protein expression. CONCLUSION Isoliquiritin has acytoprotective effect on corticosterone-induced cytotoxicity in PC12 cells,which may be related to its antioxidant action,inhibition of [Ca^(2+)]_ioverload and inhibition of the mitochondrial apoptotic pathway.

甘草中甘草苷、异甘草苷对照品的制备及鉴定

目的:研究中药甘草中甘草苷、异甘草苷对照品的制备方法。方法:采用大孔吸附树脂、聚酰胺色谱、凝胶色谱、制备色谱等方法分离制备对照品,采用波谱方法对其进行结构鉴定。结果:从甘草中分离出甘草苷、异甘草苷对照品。结论:该对照品可作为控制甘草总黄酮制剂质量的指标成分。