抗角蛋白16单克隆抗体对角质形成细胞增殖活性的影响

目的研究抗角蛋白单克隆抗体(mAb)对体外培养的角质形成细胞增殖活性与细胞周期的影响。方法以无血清培养基体外原代培养角质形成细胞。应用3H-TdR掺入DNA合成测定法,观察抗角蛋白16mAb(anti-K16mAb)对角质形成细胞代谢增殖的影响。用流式细胞仪分析anti-K16mAb作用后角质形成细胞的细胞周期变化。结果mAb作用后,角质形成细胞样品的cpm降低,并呈抗体剂量依赖方式。流式细胞仪分析表明,处于S期的细胞比例由27%上升至42.2%,同时处于G1期与G2期的细胞比例分别相应下降。结论anti-K16mAb可抑制体外培养的角质形成细胞的增殖活性,且将细胞阻滞于S期,无法进入G2期与M期分裂增殖。

角蛋白K6、K16在寻常性银屑病皮损中的表达及其临床意义

目的:探讨角蛋白K6、K16在银屑病发病机制中的地位。方法:用免疫组化法,检测30例银屑病患者皮损处和10例正常对照者皮肤角质形成细胞中角蛋白K6和K16的表达水平。结果:①银屑病组患者皮损处表皮角质形成细胞中K6、K16的表达水平与正常对照组相比,差异具有显著性,其中,病例组棘细胞层K6、K16的表达与对照组相比,差异具有极显著性;②角蛋白K6、K16在银屑病进行期和稳定期的表达差异无显著性,但分别与消退期银屑病相比差异均具有显著性:③角蛋白K6、K16的表达在急性点滴状和慢性斑块状银屑病间差异无显著性。结论:角蛋白K6、K16在银屑病发病机制中可能起重要作用,这两个指标有望作为监测银屑病活动性的指标。

细胞角蛋白19联合人乳头状瘤病毒DNA(16/18型)检测早期宫颈癌淋巴结微转移

目的探讨早期宫颈癌患者淋巴结中细胞角蛋白19(CK-19)mRNA和人乳头状瘤病毒(HPV)DNA(16/18型)的表达及联合检测的临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,检测CK-19mRNA和HPVDNA(16/18型)在30例早期宫颈癌患者194枚淋巴结中的阳性率及二者联合检测的敏感度和准确度。结果 30例早期宫颈癌患者的淋巴结194枚,常规病理学HE染色检出8例患者26枚淋巴结转移、22例患者无转移淋巴结164枚。在22例HE染色未检出淋巴结转移组中,聚合酶链反应检测9例患者40枚淋巴结CK-19mRNA呈阳性,12例患者68枚淋巴结HPVDNA(16/18型)呈阳性。转移淋巴结组和无转移淋巴结组CK-19mRNA阳性率分别为92.3和23.8,HPVDNA(16/18型)阳性率分别为96.2和40.5;比较两组淋巴结CK-19mRNA和HPVDNA(16/18型)阳性检出率,转移淋巴结组明显高于无转移淋巴结组(P<0.01)。单独检测CK-19mRNA敏感度为33.0,HPVDNA敏感度为47.9;采用二者联合检测,敏感度可达76.8,准确度为81.8。结论 CK-19mRNA和HPVDNA(16/18型)可作为判断早期宫颈癌淋巴结微转移的参考指标,二者联合检测有较高的检出率。

白血病相关蛋白16与角蛋白18相互作用的鉴定

目的:验证白血病相关蛋白(LRP)16与角蛋白(KRT)家族成员KRT18之间的相互作用关系。方法:PCR扩增KRT18及其结构域缺失体基因片段,构建KRT18全长及其结构域真核表达载体,通过体外GST pull down实验和体内免疫共沉淀实验验证LRP16/KRT18的相互作用,并鉴定其作用的结构域。结果:构建了KRT18及其结构域重组子,GST pull down实验证明LRP16与KRT18在体外存在相互作用,它们的特异结合区域位于KRT18的C端,KRT18能够与LRP16的C端结构域相互作用;免疫共沉淀实验表明内源性LRP16与KRT18的C端在体内存在特异结合。结论:KRT18与LRP16存在相互作用,为进一步研究KRT18影响LRP16的亚细胞分布及调控LRP16核功能执行的作用机制奠定了基础。

皮肤局部外涂IL-20,K16反义寡核苷酸乳剂对银屑病样皮损的影响

目的 :研究白细胞介素 2 0 (IL 2 0 ) ,K16反义寡核苷酸乳剂皮肤局部外涂对豚鼠银屑病样皮损的影响 .方法 :用5 0g·L-1心得安乳剂外涂豚鼠耳背部皮肤成功诱导银屑病样动物模型 ,然后分别以IL 2 0和K16反义寡核苷酸、正义寡核苷酸乳剂及单纯乳剂基质作用于皮损 ,进而通过HE染色观察皮损的变化和原位杂交检测其表达的水平 .结果 :IL 2 0反义寡核苷酸治疗组较正义寡核苷酸组及单纯乳剂基质对照组皮损评分显著降低 (4 0± 1 0vs 7 0± 0 9,7 6± 1 2 ,P <0 0 1) ;K16反义寡核苷酸治疗组较正义寡核苷酸组及单纯乳剂基质对照组皮损评分也有降低 (5 2± 1 0vs 7 2± 1 0 ,7 6± 1 2 ,P <0 0 5 ) .治疗组IL 2 0和K16的表达与对照组相比均有不同程度的降低 ,具有阳性杂交信号的细胞数量减少 ,信号强度减弱 .结论 :IL 2 0和K16反义寡核苷酸能够抑制豚鼠银屑病样皮损的发展 ,甚至使其逆转 ;IL 2 0和K16反义寡核苷酸乳剂外涂可以抑制靶mRNA的水平及表达 .

角蛋白16在喉癌中的表达及临床意义

目的探讨角蛋白16(KRT16)在喉癌中的作用及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR对KRT16基因在20例喉癌及癌旁正常黏膜组织中基因水平进行定量检测,同时制作组织芯片应用免疫组化方法检测其在50例喉癌及癌旁正常黏膜组织中蛋白水平的表达。结果喉癌组及癌旁正常黏膜组KRT16 mRNA的相对表达量分别为0.732±0.201和0.201±0.134,KRT16蛋白的阳性率分别为84.0%(42/50)和22.2%(10/45),两组比较差异均有统计学意义;KRT16的表达与与患者性别、年龄无显著相关性,而与TNM分期、淋巴结转移有显著相关。结论KRT16在喉癌中的表达与肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关,可能成为喉癌新的肿瘤标志物或预后因子。

抗角蛋白K16抗体对培养角质形成细胞分化和细胞活性的影响

目的研究抗角蛋白K16抗体对培养角质形成细胞分化和细胞活性的影响。方法鼠抗人角蛋白K16的IgG单克隆抗体作用培养的角质形成细胞,分别于作用12h,24h和36h,以同种型抗体作对照,采用定量PCR,Western blot的方法分别检测抗角蛋白K16抗体对角质形成细胞分化标志蛋白(nascent polypeptide-associated complex,NACA)和Involucrin mRNA表达的影响,以及对Involucrin和肌动蛋白合成启动蛋白(actin related protein,ARP2)表达的影响。结果 12h,24h和36h后NACA mRNA升高5.93-,3.35-和3.54-倍。12h和36h后Involucrin mRNA升高2.33-和2.0-倍。36h后Involucrin蛋白升高4.5-倍,而Arp2蛋白下降1.82-倍。结论抗角蛋白K16抗体能调节角质形成细胞的分化、影响细胞的活动力,角蛋白K16可能是维持银屑病角质形成细胞高分化和表皮增殖特性的重要因素。

子宫颈非典型不成熟鳞状上皮化生与子宫颈鳞状上皮内瘤变Ⅲ级形态学及增殖分化特征比较

目的探讨子宫颈非典型性不成熟鳞状上皮化生(AIM)与子宫颈CINⅢ形态学及增殖分化特征的差异。方法采用形态学观察,AB黏液组化染色,细胞增殖相关抗原Ki-67和角蛋白(CK)10、14免疫组化染色方法,观察55例原诊断为CINⅢ的病例和14例子宫颈息肉伴成熟性鳞状上皮化生(OSM)组织病理学特征,黏液残留情况,细胞增殖活性和分化程度;采用半巢式PCR检测HPV16E6DNA。结果(1)参照Crum的组织学诊断标准,在CINⅢ中有1例经组织形态观察符合AIM的诊断标准,即重新诊断为AIM;(2)根据鳞状上皮中的黏液残留情况,从55例CINⅢ中鉴别出7例AIM;(3)AIM的Ki-67表达高于OSM(P=0.022),明显低于CINⅢ(P=0.000)差异有统计学意义;(4)CK10在AIM和CINⅢ中的表达差异有统计学意义(P=0.000);CK14在AIM和CINⅢ组间的表达差异无统计学意义(P=1.000);(5)AIM的HPV16感染检出率为71.4%与CINⅢ的检出率85.4%相比差异无统计学意义(P=0.321)。结论在Crum的AIM形态学诊断标准基础上,结合本研究中各项指标的研究结果,本研究提出AIM与CINⅢ的鉴别诊断依据:①核分裂象数≤15/10HPF,位于上皮下1/3层;②病理性核分裂象罕见;③AB染色显示有黏液残留;④Ki-67PI<50%;⑤CK10弥漫表达于除基底副基底层外黏膜上皮各层。

羽毛中脂质对羽毛角蛋白降解的影响

研究旨在探讨羽毛结构中的脂质对地衣芽孢杆菌CP-16降解羽毛的影响。通过制备天然羽毛粉和脱脂羽毛粉,比较地衣芽孢杆菌CP-16发酵液和该菌产4种蛋白酶(P-Glu、P-Alk、P-Trx、P-Ker)角蛋白酶活性的变化,发现羽毛的脱脂处理可明显提高蛋白酶水解角蛋白速度,其中,CP-16发酵液、P-Alk、P-Ker均提高近1倍,P-Glu和P-Trx提高了约2倍,并发现地衣芽孢杆菌CP-16发酵上清液和胞内液均有脂肪酶活性,分别为6.8 U/ml和1.1 U/ml。添加外源脂肪酶对CP-16菌降解天然羽毛有抑制作用,而对降解脱脂羽毛无影响。这说明地衣芽孢杆菌CP-16可能存在分泌脂类水解酶水解脂质降解羽毛的机制。

人乳头瘤病毒16 E6和 E7基因对人喉鳞癌细胞系增殖和分化的影响

目的研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6和 E7基因对 Lscc-02人喉鳞癌细胞系增殖和分化的影响,以探讨 HPV16与喉鳞癌演进的关系。方法采用阳离子脂质体基因转染技术将携带有 HPV16 E6和 E7 DNA 的真核表达质粒导入 HPV 阴性的 Lscc-02喉鳞癌细胞系,以载体质粒转染的细胞以及未转染细胞为对照,观察并比较体外及裸鼠体内细胞的增殖状态和分化程度。结果转染 HPV16 E6和 E7的喉鳞癌细胞体外增殖加快,增殖 A 比值为2.96,高于载体质粒转染的细胞1.90以及未转染细胞1.85,软琼脂克隆形成率较载体质粒转染的细胞以及未转染细胞增大,分别为23.6%、12.7%、12.0%,血清依赖降低;增殖核抗原 Ki-67表达的阳性百分数为93.8%,明显高于载体质粒转染细胞的80.7%以及未转染细胞的79.2%;角蛋白13表达的阳性百分数为80.9%,明显低于载体质粒转染细胞的91.0%以及未转染细胞的93.7%;裸鼠体内转染 HPV16 E6和E7的喉鳞癌细胞移植瘤潜伏期及体内倍增时间较载体质粒转染的细胞以及未转染细胞缩短,潜伏期分别为19 d、28 d、30 d,体内倍增时间分别为2.15 d、3.28 d、3.47 d,瘤组织细胞变小,异形性增大,细胞核分裂象多,有向低分化鳞癌发展趋势。结论 HPV16 E6和 E7促进 Lscc-02喉鳞癌细胞系增殖,抑制其分化,使肿瘤细胞的恶性增强,提示 HPV16在喉鳞癌的演进过程中可能起重要作用。

抗角蛋白16抗体对角质形成细胞外皮蛋白、Toll样受体2和4的调节

目的研究抗角蛋白16抗体对角质形成细胞分化、Toll样受体2和4的调节。方法将抗角蛋白16抗体加入培养的角质形成细胞中,以同种型抗体作对照,研究外皮蛋白和Toll样受体2和4 mRNA表达。结果抗角蛋白16抗体作用角质形成细胞6 h、24 h、36 h后,Toll样受体2mRNA表达分别上调1.73、1.60、2.52倍:12 h和36 h后Toll样受体4 mRNA表达分别上调3.62和2.21倍;12 h、36 h后外皮蛋白mRNA表达分别上调2.33倍和2.0倍。结论抗角蛋白16抗体可能是联系Toll样受体2和4与角质形成细胞分化的重要环节。

氨基酮戊酸光动力疗法抑制成纤维细胞生长因子10诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖的机制研究

目的 探讨氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）对成纤维细胞生长因子10（FGF-10）诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖的作用及其机制。 方法 将培养的HaCaT细胞分为4组：空白对照组（无任何处理），FGF-10组（加入FGF-10孵育24 h），ALA-PDT组（ALA孵育24 h后红光照射），FGF-10 ＋ ALA-PDT组（FGF-10孵育24 h后，再加ALA孵育24 h，红光照射）。用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，Western印迹法检测K1、K6、K16及角质形成细胞生长因子受体（KGFR）的含量，ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1α（IL-1α）蛋白表达，免疫荧光检测各组细胞KGFR和K6蛋白表达水平。统计学分析采用析因设计的方差分析和单因素方差分析。结果 析因分析显示，ALA-PDT和FGF-10对HaCaT细胞增殖无交互作用（F交互 = 1.369，P = 0.276），FGF-10对HaCaT细胞增殖有促进作用（FFGF-10 = 20.853，P 〈 0.05），而ALA-PDT有抑制作用（FALA-PDT = 24.822，P 〈 0.05）。与空白对照组细胞增殖活性（A值为0.924 ± 0.024）比较，FGF-10组（1.233 ± 0.099）显著升高（P 〈 0.05），而ALA-PDT组（0.718 ± 0.107）显著降低（P 〈 0.05），FGF-10 ＋ ALA-PDT组（0.901 ± 0.014）较FGF-10组显著降低（P 〈 0.05）。Western印迹法显示，FGF-10可促进K1、K6、K16蛋白和KGFR的表达（均P 〈 0.05），而ALA-PDT抑制这些蛋白的表达（均P 〈 0.05），FGF-10 ＋ ALA-PDT组K1、K6、K16和KGFR的相对表达量与FGF-10组比较均显著降低（均P 〈 0.05）。ELISA法显示，FGF-10会增加HaCaT细胞IL-1α蛋白分泌（P 〈 0.05），但ALA-PDT对其没有影响（P = 0.467）。此外，免疫荧光检测显示，FGF-10增加HaCaT细胞K6和KGFR免疫荧光强度（P 〈 0.05），而ALA-PDT降低K6和KGFR免疫荧光强度（P 〈 0.05），FGF-10 ＋ ALA-PDT组K6和KGFR免疫荧光强度显著低于FGF-10组（P 〈 0.05）。 结论 ALA-PDT能抑制FGF-10诱导的HaCaT细胞过度角化及增殖，其机制与下调K1、K6、K16、KGFR及IL-1α有关。