Hearing analysis in heterozygous and homozygous klotho gene deficient mice

Objective: To understand the crucial role of the klotho gene in hearing development in mouse models.Methods: PCR was used to identify CBA mice with different genotypes, i.e. WT, heterozygous(klotho +/-)or homozygous(klotho-/-). Mice phenotype and weight were recorded postnatal 25 days(P-25) and auditory brainstem responses(ABR) were used to determine auditory function at P-60.Results: klotho-/-mice tended to have smaller size, lighter weight and higher ABR thresholds at P-60,showing early onset age-related hearing loss(ARHL).Conclusion: Heterozygous and homozygous klotho deficient mice exhibit different degrees of hearing loss at young age, with homozygous mice(klotho-/-) showing more severe hearing loss. Our results indicate that persisted expression of klotho protein in the inner ear may potentially delay the onset of ARHL and play an important role in the protection of auditory function.

血清成纤维生长因子-23/抗衰老基因Klotho、辅助性T淋巴细胞1/辅助性T淋巴细胞2细胞因子在老年终末期肾病患者中的表达及对医院感染的预测和预后的影响

目的观察血清成纤维生长因子-23(fibroblast growth factor 23,FGF23)/抗衰老基因Klotho、辅助性T淋巴细胞(helper T lymphocytes,Th)1/Th2细胞因子在老年终末期肾病患者中的表达,并分析对医院感染的预测和预后的影响。方法选取2021年1月1日至2022年12月31日自贡市精神卫生中心(自贡市老年病医院)收治的106例老年终末期肾病患者,男65例,年龄范围60~84岁,年龄(67.21±3.07)岁,女41例,年龄范围60~84岁,年龄(67.65±2.98)岁,于入院第2天检测血清FGF23、抗衰老基因Klotho、Th1细胞因子[γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素2(interleukin-2,IL-2)]、Th2细胞因子(IL-4、IL-10)水平,进行急性生理功能及慢性健康状况评分Ⅱ(acute physiology and chronic health status scoring systemⅡ,APACHEⅡ)评估。根据住院期间是否发生医院感染分为感染组(28例)、未感染组(78例),比较两组各项血清指标及APACHEⅡ评分水平,分析各项指标与APACHEⅡ评分的相关性。随访3个月统计患者生存预后[生存(71例)、死亡(35例)],比较不同预后患者血清FGF23、Klotho、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平,分析各项指标对医院感染及预后的预测价值及临床效用。结果106例老年终末期肾病患者根据住院期间是否发生医院感染分为感染组(28例)、未感染组(78例),随访3个月后生存71例、死亡35例。入院第2天感染组血清FGF23、IL-4、IL-10水平及APACHEⅡ评分分别为(78.64±20.16)ng/mL、(20.14±1.48)μg/L、(22.47±2.56)μg/L、(26.38±6.51)分,未感染组分别为(60.17±16.83)ng/mL、(16.25±1.21)μg/L、(19.52±1.86)μg/L、(22.97±6.45)分,感染组血清FGF23、IL-4、IL-10水平及APACHEⅡ评分均高于未感染组(P<0.05);入院第2天感染组血清Klotho、IFN-γ、IL-2水平分别为(34.95±12.62)ng/mL、(22.19±1.69)μg/L、(28.73±2.95)μg/L,未感染组分别为(51.61±16.08)ng/mL、(25.31±1.74)μg/L、(33.95±1.52)μg/L,感染组血清Klotho、IFN-γ、IL-2水平均低于未感染组(P<0.05);血清FGF23、IL-4、IL-10水平与APACHEⅡ评分呈正相关(相关系数r=0.629、0.597、0.612,P均<0.05),血清Klotho、IFN-γ、IL-2水平与APACHEⅡ评分呈负相关(相关系数r=-0.632、-0.718、-0.701、0.597,P均<0.05);死亡患者入组后1个月血清FGF23、IL-10、IL-4水平分别为(77.49±21.85)ng/mL、(24.76±4.77)μg/L、(24.81±6.28)μg/L,生存患者分别为(58.92±16.94)ng/mL、(18.10±3.82)μg/L、(13.57±4.38)μg/L,死亡患者入组后1个月血清FGF23、IL-10、IL-4水平高于生存患者(P<0.05);死亡患者入组后1个月血清Klotho、IFN-γ、IL-2水平分别为(30.03±11.76)ng/mL、(20.33±2.63)μg/L、(27.19±4.91)μg/L,生存患者分别为(55.68±17.02)ng/mL、(26.54±4.79)μg/L、(35.22±5.64)μg/L,死亡患者入组后1个月血清Klotho、IFN-γ、IL-2水平低于生存患者(P<0.05);血清FGF23、Klotho、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10预测终末期老年肾病患者发生医院感染、生存预后曲线下面积分别为0.904(OR:0.832~0.953)、0.911(OR:0.840~0.958),且具有良好临床效用(P<0.05)。结论老年终末期肾病患者血清FGF23/Klotho、Th1/Th2细胞因子水平失衡,合并感染患者血清FGF23、IL-10、IL-4水平异常升高,血清Klotho、IFN-γ、IL-2水平表达降低,联合血清FGF23/Klotho、Th1/Th2细胞因子预测医院感染、评估预后的价值较高。

Klotho基因3个SNP位点与老年高血压及脂代谢的相关性

目的研究重庆地区汉族人群Klotho基因3个单核苷酸多态性位点的分布规律及其与老年高血压、脂代谢的相关性。方法选择高血压人692例及正常健康人460例作为对照组,提取外周血白细胞基因组DNA,应用单一等位基因特异性引物PCR技术(SASP-PCR)检测Klotho基因3个SNP位点的基因型,同时测定血脂等指标。结果高血压组Klotho基因G-395A SNP AA等位基因频率较对照组增高(P=0.049),GG等位基因频率较对照组低(P<0.01);高血压组男性患者AA等位基因型频率较对照组明显增高(P<0.01),GG等位基因频率较对照组明显低(P=0.01)。高血压组K lotho基因F352V SNP FF等位基因频率较对照组低(P=0.03),FV等位基因频率与对照组无差异(P=0.057);按性别分层研究,高血压组各等位基因型频率与对照组均无差异(P>0.05)。高血压组K lotho基因SNP C370S CC、CS及SS等位基因型频率及性别分层的基因频率与对照组均无显著差异(P>0.05)。K lotho基因G-395A SNPGG等位基因携带者其血浆HDL值较GA等位基因增高(P=0.043);Klotho基因F352VSNP FV等位基因携带者其TC值较FF等位基因者低(P=0.01),LDL值也较FF等位基因携带者低(P=0.04),且其HDL值较VV等位基因者增高(P=0.024);Klotho基因C370S SNP各基因型携带者之间其血脂各指标水平无显著性差异(P>0.05)。结论 Klotho基因G-395A SNP与老年高血压及血脂有相关性;Klotho基因F352V SNP与高血压及血脂也有相关性;而并未发现Klotho基因C370SSNP与老年高血压及血脂的相关性。

重庆老年汉族人群klotho G-395A、F352V与C370S基因多态性与原发性骨质疏松症的相关性研究

目的:探讨重庆地区汉族老年人群klotho G-395A、F352V与C370S3个位点的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)与原发性骨质疏松症的相关性。方法:应用嵌套式等位基因特异性引物PCR技术测定重庆地区汉族老年人群300例原发性骨质疏松症患者和93例对照者klotho G-395A、F352V、C370S SNP,比较两组基因型和等位基因分布频率。结果:在klotho G-395A SNP中,原发性骨质疏松症组患者AA等位基因型频率较对照组高,有显著性差异(P<0.01),按性别分层研究则仅男性原发性骨质疏松症患者AA等位基因型频率较对照组高,有显著性差异(P<0.01);在klotho F352V SNP中,无论男性还是女性原发性骨质疏松症患者FF、FV与VV各等位基因型频率与对照组均无显著性差异(P>0.05);在klotho C370SSNP中,无论男性还是女性原发性骨质疏松症患者其CC、CS与SS各等位基因型频率与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:klotho G-395A SNP与原发性骨质疏松症有相关性,并存在着性别差异性;而尚未发现klotho F352V与C370S SNP与原发性骨质疏松症有相关性。

KLOTHO的3个SNP位点分布与几种疾病相关性的研究

目的分析汉族人群Klotho基因3个单核苷酸多态性位点(G-395A,F352V,C370S)与几种疾病的相关性。方法选择无亲戚关系的病人161例及正常健康人55例,提取血白细胞基因组DNA,采用等位基因特异性引物PCR技术检测Klotho基因3个SNP位点的基因型,并用SAS统计软件对所得数据进行分析。结果3个位点存在多态性,均出现2种基因型。G-395A与糖尿病有关(P<0.002);F352V与高血压和冠状动脉硬化性心脏病有关(分别为:P=0.0120和P<0.0001);C370S与冠状动脉硬化性心脏病有关(P<0.0001)。G-395A多态性中的AA基因型可能易患高血压,GG基因型可能对患冠状动脉硬化性心脏病,糖尿病有保护性作用。F352V多态性中的VV和FF可能是高血压和冠状动脉硬化性心脏病的易患基因型,而FV基因型具有保护作用,VV基因型可能易患糖尿病。C370S基因型中,CC和SS是冠状动脉硬化性心脏病易患基因型,而CS基因型具有保护作用。结论该研究发现在中国汉族人群中,启动子区G-395A多态性中的AA基因型易患高血压,GG基因型可能对患冠状动脉硬化性心脏病,糖尿病有保护性作用。对于编码区的F-352V和C370S多态性,杂合子对患冠状动脉硬化性心脏病有保护作用。

Klotho基因多态性与60岁以上老年原发性骨质疏松症的相关性

背景:研究发现,Klotho基因与人类多种疾病如骨质疏松、肿瘤、动脉粥样硬化、血糖异常等均有关。目的:进一步验证klotho基因多态性与老年人(≥60岁)原发性骨质疏松症的相关性。方法:研究方案的实施符合滨州医学院附属医院医院对研究的相关伦理要求。受试者对试验过程完全知情同意。收集于滨州医学院附属医院体检中心、老年医学科就诊的,长期居住鲁西北地区的汉族老年患者609例,其中骨质疏松者303例,骨量正常者306例,利用SNaPshotSNP分型技术对klotho基因G395A、F352V位点进行基因分型。结果与结论:①Klotho基因G395A基因型GG在骨量正常组中分布频率显著高于骨质疏松组(P<0.05);②女性骨质疏松组患者GG基因型分布频率显著低于骨量正常组(P<0.05);③多因素Logistic回归分析表明,总胆红素、年龄及体质量指数为原发性骨质疏松症发病的危险因素;④结果说明,Klotho基因G395A、F352V位点多态性可能不是该地区汉族老年人群骨质疏松症发生的危险因子,总胆红素、年龄及体质量指数可能与骨质疏松症的发生有关。

血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞Klotho基因表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)后Klotho、p53、p21mRNA及蛋白的表达和细胞凋亡情况,探讨高血压肾损害肾小管上皮细胞凋亡的相关机制。方法:AngⅡ按浓度梯度0(对照组)、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L分组培养NRK-52E24h,确定适宜干预浓度后,按时间梯度0h、6h、12h、18h、24h分组培养确定最佳干预时间。分别用RT-PCR和Western印迹法检测Klotho、p53、p21mRNA及蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3的活性;AnnexinV-FITC双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:随着AngⅡ干预NRK-52E浓度增高(10-10mol/L～10-6mol/L)及作用时间延长(6h～24h),Caspase-3活性逐渐增高,凋亡率逐渐增加(P<0.01)。与对照组比较,AngⅡ组Klotho表达明显下调,p53和p21表达上调,Caspase-3活性增高,凋亡率增加(P<0.01)。结论:AngⅡ可通过抑制Klotho表达,增加p53和p21的表达,活化Caspase-3,从而诱导肾小管上皮细胞发生凋亡,这可能是其在高血压肾损害肾小管细胞凋亡中的作用机制之一。

体外转染Klotho基因对H9c2(2-1)大鼠心肌细胞缺血再灌注的影响

目的研究转染Klotho基因对H9c2(2-1)大鼠心肌细胞缺血再灌注的影响。方法培养H9c2(2-1)大鼠心肌细胞,建立模拟缺血再灌注模型,Fermentas转染试剂介导小鼠Klotho基因转染H9c2(2-1)大鼠心肌细胞。实验分4组:对照组(Control组)、缺血再灌注组(I-R组)、转染Klotho基因组(Klotho组)、转染Fermentas转染试剂空载体组(Vehicle control组)。各组进行缺血再灌注后RT-PCR及免疫荧光法检测Klotho mRNA及Klotho蛋白表达,MTT法检测细胞活性,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及Klotho含量。结果 Klotho组较I-R组和Vehicle control组Klotho mRNA、Klotho蛋白表达明显增加,LDH、MDA明显降低,细胞活性高(P<0.01)。结论 Fermentas转染试剂介导的Klotho基因转染H9c2(2-1)大鼠心肌细胞可保护H9c2(2-1)大鼠心肌细胞、减轻H9c2(2-1)大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤。

Klotho基因对糖尿病肾病细胞凋亡作用及百令胶囊对其影响研究

目的研究抗衰老基因Klotho、p21和p53凋亡基因对糖尿病肾病(DN)细胞凋亡的作用,以及百令胶囊对其的影响。方法将124例DN患者随机分为常规组(61例)和观察组(63例),另收集65例同意受试的健康体检人员为对照组。常规组给予降糖、降脂等基础治疗,观察组在此基础上口服百令胶囊,对照组口服淀粉安慰剂。采静脉血分析三组治疗前后Klotho蛋白和Klotho-mRNA、p21蛋白和p21-mRNA、p53蛋白和p53-mRNA表达。收集尿液检测肾损伤标志性蛋白[尿白蛋白(U-Alb)、尿β2微球蛋白(U-β2-MG)、尿视黄醇结合蛋白(U-RBP)、尿白蛋白排泄率(UAER)]及尿糖、尿磷(UP)、空腹血糖(FBG)和肾小球滤过率(GFR)等指标情况。结果对照组所有检测指标治疗前后比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组治疗10周后,Klotho蛋白和Klotho-mRNA高表达,p21蛋白和p21-mRNA低表达,且U-Alb、U-RBP、U-β2-MG和UAER下降,UP增高,与常规组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。但FBG、尿糖值常规组与观察组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Klotho蛋白和Klotho-mRNA高表达,p21蛋白和p21-mRNA低表达可延缓DN病理进程,百令胶囊可能通过上调K-mRNA表达,抑制肾p21表达而降低肾小管上皮细胞凋亡率,同时还能提高UP排泄,降低蛋白尿而达到肾脏的保护作用。

福辛普利和缬沙坦抑制AngⅡ诱导的大鼠肾小管上皮细胞klotho基因表达下调

目的探讨福辛普利(Fos)和缬沙坦(Val)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)抑制NRK-52E细胞klotho基因表达的干预作用及klotho与转化生长因子-β1(TGF-β1)的关系。方法将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组、AngⅡ分别再加Fos(10-5mol/L)组、Val(10-5mol/L)组和Fos+Val组,培养24 h后,用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测klotho和TGF-β1mRNA表达;用免疫组织化学法和Western blot检测klotho和TGF-β1蛋白表达。对klotho和TGF-β1蛋白表达进行直线相关分析。结果 (1)AngⅡ诱导NRK-52E中TGF-β1mRNA表达上调,同时使klothomRNA表达下调,经Fos或Val或Fos+Val干预后,TGF-β1mRNA表达明显受抑制,而klothomRNA显著上调表达(P<0.05)。(2)Fos、Val和Fos+Val均明显上调AngⅡ诱导的klotho蛋白低表达(P<0.05),同时抑制TGF-β1蛋白高表达(P<0.05)。(3)klotho和TGF-β1蛋白表达呈直线负相关(r=-0.717,P<0.05)。结论福辛普利和缬沙坦可上调AngⅡ诱导的klotho基因低表达,抑制TGF-β1高表达,klotho基因mRNA表达增强可能与TGF-β1表达下调有关。

Klotho基因多态性与老年人低骨量的相关性研究

目的研究klotho基因G395A、F352V位点与新疆维、汉两民族老年人(≥60岁)低骨量的相关性,探讨该基因多态性在维、汉两民族中的分布差异。方法收集入住新疆医科大学第一附属医院干部病房的维、汉老年患者324例,其中低骨量病例组(骨量减低组+骨质疏松组)164例,对照组(骨量正常值)160例。采用多重SNa Pshot SNP(Single nucleotide polymorphisms)分型技术对klotho基因G395A、F352V位点进行基因分型。结果 (1)Klotho基因多态性在病例组与对照组间整体比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)在维、汉两民族间整体比较,G395A多态性的分布差异无统计学意义(P>0.05),维吾尔族人群F352V多态性基因型TT及等位基因T分布频率均低于汉族,差异具有统计学意义(P<0.05);汉族人群TG、GG基因型及等位基因G频率均低于维吾尔族,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)在男、女性别间比较,G395A、F352V多态性分布差异均未见有统计学意义(P>0.05)。结论 Klotho基因G395A、F352V位点多态性可能不是新疆地区维、汉老年人群低骨量发生的危险因子,F352V多态性在维、汉不同民族中的分布具有差异性。

Klotho基因转染骨髓间充质干细胞移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的观察Klotho基因(抗衰老基因)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞。慢病毒介导Klotho转染至BMSC中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMSC中Klotho mRNA的表达。制备大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为正常对照组、模型对照组、增强型绿色荧光蛋白-BMSC组(EGFP-BMSC组)、EGFP-Klotho-BMSC组。细胞移植28天后多普勒超声检测心功能,荧光显微镜观察细胞存活及分布,HE染色观察心肌组织病理变化。Masson染色检测心肌胶原沉积含量和心肌纤维化程度。结果 Klotho转染BMSC后,BMSC中Klotho mRNA表达明显增多(P<0.05)。移植28天后超声心动图结果显示,与EGFP-BMSC组及模型对照组比较,EGFP-Klotho-BMSC组左心室射血分数(LVEF)提高(P<0.05)。EGFP-BMSC组及EGFP-Klotho-BMSC组心肌纤维化程度较模型对照组减轻(P<0.05),EGFP-KlothoBMSC组较EGFP-BMSC组心肌纤维化改善更为明显(P<0.05)。结论 Klotho基因联合BMSC治疗可进一步抑制心肌纤维化,减少心肌间质胶原沉积,改善心功能。

慢性心衰大鼠心肌Klotho、ColⅠ和ColⅢmRNA的表达及其相关性

目的探讨慢性心衰大鼠心肌中Klotho基因、Ⅰ型胶原(ColⅠ)m RNA和Ⅲ型胶原(ColⅢ)m RNA的表达及其相关性。方法清洁级SD大鼠20只,体重250~300 g,随机分为心衰模型组和正常对照组,每组10只,心衰模型组连续14 d腹腔注射异丙肾上腺素3 mg/(kg·d)建立心衰大鼠模型,正常对照组不做处理。建模2 w后,全部大鼠称体重后处死,取心脏称重,并计算心脏湿重/体重指数(HW/BW);RT-PCR检测各组大鼠心肌组织中Klotho基因以及ColⅠ和ColⅢm RNA的表达量,分析各指标间的相关性。结果成功建立大鼠心衰模型(LVEF<50%)。RT-PCR检测结果显示,心衰模型组大鼠心肌中Klotho m RNA的表达较正常对照组显著降低(P<0.05),而ColⅠ和ColⅢm RNA的表达量较正常对照组显著增加(P<0.05)。相关分析显示,大鼠心肌组织中Klotho m RNA表达量与心肌组织ColⅠ m RNA和ColⅢm RNA的表达量呈独立、显著的负相关(P<0.05)。结论心衰大鼠心肌中Klotho基因与ColⅠ及ColⅢm RNA的表达呈显著负相关,可能是Klotho基因抑制心肌纤维化的机制。

缬沙坦对自发性高血压大鼠脑超微结构和Klotho基因表达的影响

目的:探讨缬沙坦对自发性高血压模型鼠脑超微结构及其脑组织中Klotho基因和微炎症因子(ICAM-1和VCAM-1)表达的影响。方法:选取22周龄雄性自发性高血压模型鼠10只,随机分为高血压组与缬沙坦组(5只/组),Wistar-kyoto大鼠(WKY)5只作为正常对照组。通过电镜观察各组大鼠脑的超微结构,RT-PCR、免疫组织化学技术和Western印迹检测Klotho基因和微炎症因子(ICAM-1和VCAM-1)的表达。结果:高血压组大鼠脑神经元细胞的超微结构主要表现为细胞固缩、染色质边集、典型凋亡小体形成,但经过缬沙坦干预后,其神经元损害有所减轻。RT-PCR结果显示缬沙坦干预能够上调KlothomRNA表达水平、下调微炎症因子ICAM-1和VCAM-1mRNA的表达;免疫组织化学技术和Western印迹检测证实缬沙坦干预能够增加Klotho蛋白、减少ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达。结论:缬沙坦能够上调Klotho的表达,改善高血压脑超微结构的改变。

老年人群klotho G-395A、F352V与C370S基因多态性及组合与其血清klotho蛋白水平的相关性研究

目的:探讨重庆市汉族老年人群Klotho G-395A、F352V与C370S 3个位点的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)及其组合与血清klotho蛋白水平的相关性。方法:随机选择汉族老年人390例,采用等位基因特异性引物PCR技术检测Klotho G-395A、F352V与C370S SNP,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测其血清klotho蛋白水平。结果:Klotho G-395A、F352V与C370S SNP各等位基因型携带者其血清klotho蛋白水平均无显著性差异(P>0.05)。基因组合分析研究发现Klotho G-395A、F352V与C370S SNP各组合等位基因型携带者其血清klotho蛋白水平差异性较大,其中Klotho G-395G+F352F+C370S携带者较Klotho G-395G+F352F+C370C携带者其血清klotho蛋白水平明显增高(P=0.056)。结论:Klotho G-395A、F352V与C370S SNP各等位基因型携带者其血清klotho蛋白水平无显著性差异,而组合等位基因型研究发现Klotho G-395G+F352F+C370S携带者较Klotho G-395G+F352F+C370C组合等位基因型携带者血清klotho蛋白水平增高有显著性趋势。

2型糖尿病患者Klotho基因G-395A多态性及其对合并下肢动脉粥样硬化的影响

目的观察2型糖尿病(T2DM)患者Klotho基因G-395A多态性,探讨其对合并下肢动脉粥样硬化的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术,分别对205例健康体检者(汉族85例、彝族120例,对照组)、140例T2DM患者(汉族79例、彝族61例,T2DM组)及224例T2DM合并下肢动脉粥样硬化患者(汉族157例、彝族67例,动脉硬化组)的Klotho基因G-395A多态性进行检测,比较各组汉族、彝族基因型频率、等位基因频率,分析T2DM合并下肢动脉粥样硬化的危险因素。结果动脉硬化组汉族Klotho基因G-395A位点GA+AA基因型频率高于彝族(P<0.05),其余各组各等位基因及基因型频率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。汉族T2DM患者发生下肢动脉粥样硬化的影响因素为SBP、TG、LHL、空腹血糖(FPG)、Klotho基因G-395A位点GA+AA基因型(P均<0.05),彝族为TG、LHL、FPG、血肌酐(P均<0.05)。结论 T2DM合并下肢动脉粥样硬化患者存在Klotho基因G-395A多态性,Klotho基因G-395A位点GA+AA基因型可能是云南省汉族部分T2DM患者发生下肢动脉粥样硬化的危险因素。

小鼠全长膜型Klotho蛋白cDNA表达体系的构建与应用

目的克隆编码小鼠膜型Klotho(mKL)蛋白的cDNA片段,构建、包装Klotho重组腺相关病毒表达体系,并检测rAAV/mKL载体表达功能。方法选择RT-PCR扩增小鼠全长mKL蛋白的基因片段,将该片段亚克隆至腺相关病毒载体pAAV-IRES-hnGFP,采用酶切及DNA测序鉴定;利用AAV-293细胞包装rAAV/mKL,经转染7901细胞,检测其Klotho表达情况。结果本文成功克隆出序列信息和读码框完全正确的3 064 bp的小鼠Klotho基因片段,并构建pAAV/mKL克隆。在AAV-293细胞中包装出rAAV/mKL,病毒原液转染7901细胞后其Klotho mRNA表达上调,而细胞上清液Klotho蛋白也明显增加(P<0.01)。结论成功构建小鼠Klotho重组腺相关病毒载体(pAAV/mKL),获得了rAAV/mKL,并经转染7901细胞验证其基因表达功能正常,这就为进一步研究Klotho基因治疗衰老相关性疾病提供了技术基础。

冬虫夏草菌粉对肾缺血-再灌注损伤大鼠Klotho基因和免疫调节的影响

目的观察冬虫夏草菌粉对大鼠肾缺血-再灌注损伤动物模型Klotho基因和免疫调节的影响,探讨其可能的机制。方法 30只Wistar大鼠分为假手术组、模型组、实验组。模型组和实验组大鼠采用夹闭双肾动脉45 min后复灌方法造模,假手术组不夹闭双肾动脉作为对照。术后实验组给予10%冬虫夏草菌粉按2.0 m L/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组则给予2.0 m L/(kg·d)生理盐水。灌胃治疗7 d后,检测尿磷(UP)含量、血清总蛋白(STP)、白蛋白(ALB)和肾功能3项[胱抑素C(Cys C)、肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)],RT-PCR法检测肾组织Klotho蛋白和Klotho-m RNA表达及肾组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果模型组肾组织匀浆中Klotho蛋白和Klotho-m RNA与假手术组比较下调(均P<0.05);模型组大鼠心室内血STP和ALB治疗后与假手术组比较差别不大(均P>0.05)。实验组Klotho蛋白、Klotho-m RNA、STP和ALB与模型组比较均升高(均P<0.05)。模型组心室内血清SOD与假手术组比较降低,而MDA升高(均P<0.05),LDH则差别不大(P>0.05)。实验组MDA与模型组比较降低,SOD活性增强(均P<0.05)。模型组Cys C、Scr、BUN和UP与假手术组比较均升高(均P<0.05)。实验组Cys C、Scr、BUN和UP与模型组比较均降低(均P<0.05)。结论冬虫夏草菌粉在抑制肾缺血-再灌注造成的脂质过氧化反应的同时,免疫力得以提升,并通过上调Klotho蛋白和lotho-m RNA达到抗衰老、增加UP排泄来减轻肾功能损害。

百令胶囊影响肾血管性高血压患者Klotho基因和肾功能的机制分析

目的观察百令胶囊对肾血管性高血压(RVH)患者Klotho基因和肾功能的影响。方法 142例患者按入院先后顺序随机分为常规治疗组72例和联合治疗组70例。常规治疗组剔除介入和手术病例后进行保守治疗;联合治疗组在此基础上加服百令胶囊。两组均于治疗21 d时采血分析Klotho蛋白和Klotho-mRNA表达,检测Klotho基因凋亡相关基因p21和p53表达,比较尿液中β_2微球蛋白(β2-MG)、尿微量白蛋白(m Alb)、尿白蛋白排泄率(UAER)、尿磷(UP)和静脉血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、胱抑素C(Cys C)等指标;同时监测收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心率(HR)。结果联合治疗组总有效率为87.27%,优于常规治疗组的69.49%(P<0.05)。两组治疗21 d后,SBP、DBP和HR与治疗前均有不同程度的降低,但组间比较差别不大(P>0.05)。常规治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA及凋亡相关基因p21和p53表达与治疗前比较无明显变化(均P>0.05)。联合治疗组Klotho蛋白和Klotho-mRNA与治疗前比较明显上调,p21则下调,且优于常规治疗组(均P<0.05),p53表达与治疗前比较变化不大(P>0.05)。两组治疗21 d后,SCr、BUN和Cys C与治疗前比较均显著下降(均P<0.05),且联合治疗组SCr、BUN和Cys C与常规治疗组比较下降更多(均P<0.05)。两组治疗后UAER、β2-MG和mAlb与治疗前比较均下降,而UP则增高(均P<0.05),且联合治疗组的UAER、β_2-MG、m Alb和UP改善均优于常规治疗组(均P<0.05)。结论百令胶囊通过上调K-mRNA表达,抑制肾小管上皮细胞凋亡相关基因p21表达,降低肾小管上皮细胞凋亡率,提高UP排泄而达到保护肾脏的作用,可明显提高RVH的临床疗效。

老年大鼠组织中Klotho基因表达分布特征

目的研究Klotho基因在大鼠组织中的表达及其分布。方法饲养SD大鼠分为对照组和老年组,每组6只。处死后取心脏、主动脉、肾脏、脑、肺、肝、胰、脾、骨骼肌、脂肪组织,提取总RNA和总蛋白。应用RT-PCR和ELISA法检测Klotho mRNA及Klotho蛋白在各组织中的表达水平。结果两组大鼠心脏、主动脉、肾脏、脑、肺、肝、胰、脾、骨骼肌、脂肪组织中均有Klotho基因表达,并且在肾脏、胰腺中高表达,脂肪中低表达。老年组Klotho mRNA、Klotho蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.001)。结论大鼠心脏、主动脉、肾脏、脑、肺、肝、胰、脾、骨骼肌、脂肪组织中均有Klotho基因表达。老年大鼠组织中Klotho基因表达减少。