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Spectrum-effect relationship of immunologic activity of Ganoderma lucidum by UPLC-MS/MS and component knock-out method 被引量:7
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作者 Changqin Li Yiping Cui +5 位作者 Jie Lu Lijun Meng Changyang Ma Zhenhua Liu Yan Zhang Wenyi Kang 《Food Science and Human Wellness》 SCIE 2021年第3期278-288,共11页
This study was designed to elucidate the immunoregulation of Ganoderma lucidum.HPLC fingerprint and spectrum-effect relationship of G.lucidum were established to predict the active compounds and BP neural network mode... This study was designed to elucidate the immunoregulation of Ganoderma lucidum.HPLC fingerprint and spectrum-effect relationship of G.lucidum were established to predict the active compounds and BP neural network model was established to predict the efficacy.Then the target compounds were identified by high resolution mass spectrometry.The results indicated that there are both enhanced immunity and immunosuppressive components in G.lucidum.BP neural network was trained with the common peak area and immune effi cacy index of G.lucidum fi ngerprint as samples,and a combined evaluation system of G.lucidum fi ngerprint effi cacy was established.The correlation coeffi cient R of BP network model was 0.98643,and the error of pharmacodynamic prediction results was in the ideal range.Eight compounds were identifi ed by high resolution mass spectrometry.The compounds related to immune activity in G.lucidum were determined in this study. 展开更多
关键词 Ganoderma lucidum RAW 264.7 cell Spectrum-effect relationships Component knock-out BP neural network
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Studies on the temporal,structural,and interacting features of the clubroot resistance gene Rcr1 using CRISPR/Cas9-based systems
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作者 Hao Hu Fengqun Yu 《Horticultural Plant Journal》 SCIE CAS CSCD 2024年第4期1035-1048,共14页
Clubroot disease is a severe threat to Brassica crops globally,particularly in western Canada.Genetic resistance,achieved through pyramiding clubroot resistance(CR)genes with different modes of action,is the most impo... Clubroot disease is a severe threat to Brassica crops globally,particularly in western Canada.Genetic resistance,achieved through pyramiding clubroot resistance(CR)genes with different modes of action,is the most important strategy for managing the disease.However,studies on the CR gene functions are quite limited.In this study,we have conducted investigations into the temporal,structural,and interacting features of a newly cloned CR gene,Rcr1,using CRISPR/Cas9 technology.For temporal functionality,we developed a novel CRISPR/Cas9-based binary vector,pHHIGR-Hsp18.2,to deliver Rcr1 into a susceptible canola line(DH12075)and observed that early expression of Rcr1 is critical for conferring resistance.For structural functionality,several independent mutations in specific domains of Rcr1 resulted in loss-offunction,highlighting their importance for CR phenotype.In the study of the interacting features of Rcr1,a cysteine protease gene and its homologous allele in canola were successfully disrupted via CRISPR/Cas9 as an interacting component with Rcr1 protein,resulting in the conversion from clubroot resistant to susceptible in plants carrying intact Rcr1.These results indicated an indispensable role of these two cysteine proteases in Rcr1-mediated resistance response.This study,the first of its kind,provides valuable insights into the functionality of Rcr1.Further,the new vector p HHIGR-Hsp18.2 demonstrated an inducible feature on the removal of add-on traits,which should be useful for functional genomics and other similar research in brassica crops. 展开更多
关键词 Clubroot resistance Brassica crops CANOLA Rcr1 CRISPR/Cas9 system Gene knock-out Timing control Non-synonymous mutation Protein-protein interaction
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基于CRISPR/Cas9技术构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株及其表型研究
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作者 李雪银 吴传新 +3 位作者 刘慧玲 李丽 程莎 孙航 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第1期87-95,共9页
目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成... 目的 采用CRISPR/Cas9技术构建吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)基因敲除的THP-1细胞株,为研究IDO1在巨噬细胞中的作用提供细胞模型。方法 设计靶向IDO1基因的3条向导RNA(guide RNA,gRNA),分别构建IDO1-gRNA重组质粒,酶切及测序鉴定后,包装成Lenti-IDO1-gRNA慢病毒。利用Cas9慢病毒感染THP-1细胞获得稳定表达Cas9蛋白的细胞株,再经Lenti-IDO1-gRNA慢病毒感染敲除IDO1基因,有限稀释法获得单克隆细胞株。T7E1酶切检测gRNA打靶效率,PCR产物测序和Western blot鉴定IDO1基因敲除效果。CCK8法检测IDO1基因敲除对THP-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测对巨噬细胞标志物CD11b、CD68和CD14表达的影响,中性红法检测巨噬细胞吞噬功能。结果 成功构建了3种IDO1-gRNA重组质粒,3条gRNA均能有效编辑IDO1基因,以gRNA2编辑效率最高。经PCR产物测序和Western blot验证获得了3株THP-1 IDO1-KO单克隆细胞株,并发现IDO1基因敲除可抑制THP-1细胞增殖,下调THP-1巨噬细胞CD11b、CD68表达,上调CD14表达,增强THP-1巨噬细胞吞噬功能。结论 成功构建IDO1基因敲除的THP-1细胞株;IDO1对THP-1细胞增殖活性、分化调节以及THP-1巨噬细胞吞噬功能调节有重要作用,为后续进一步探讨IDO1基因在巨噬细胞中的功能及机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 吲哚胺-2 3-双加氧酶1 基因敲除 THP-1细胞 巨噬细胞
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CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测
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作者 万苗苗 阳倩 +5 位作者 陈吉璐 陈丹丹 毛林 班谦 陈胜 惠文巧 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第2期27-31,共5页
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,... 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 山羊 CDK2 基因敲除
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射血分数保留的心力衰竭小鼠端粒缩短的研究
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作者 黄舒影 陈骁楠 +1 位作者 张俊峰 张绘莉 《国际心血管病杂志》 2024年第4期231-236,共6页
目的:探讨端粒缩短与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)间的关系。方法:野生型C57BL/6J小鼠、第二代端粒酶敲除(mTRG2)和第三代mTRKO(mTRG3)小鼠简单随机抽样法分为对照组和HFpEF组,每组各8只。对照组给予标准饲料和饮水,HFpEF组给予60%高... 目的:探讨端粒缩短与射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)间的关系。方法:野生型C57BL/6J小鼠、第二代端粒酶敲除(mTRG2)和第三代mTRKO(mTRG3)小鼠简单随机抽样法分为对照组和HFpEF组,每组各8只。对照组给予标准饲料和饮水,HFpEF组给予60%高脂饲料和含0.5 g/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的饮水,造模16周。造模开始后每2周检测小鼠左室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早期和晚期血流速度峰值的比值(E/A)、舒张早期二尖瓣口血流速度峰值和二尖瓣环运动速度峰值的比值(E/e')、左室整体纵向应变(GLS)、舒张末期左室前壁厚度(LVAWd)和舒张末期左室后壁厚度(LVPWd),评估左室收缩与舒张功能及心室重构情况。造模16周后,评估小鼠收缩期血压(SBP)、舒张期血压(DBP)和血脂水平。结果:高脂饮食和L-NAME饮水诱导造模的16周期间,各组LVEF差异无统计学意义,HFpEF组野生型小鼠在第8周出现了E/e'、E/A、LVAWd和LVPWd上升及GLS的下降(P<0.05),提示舒张功能降低和左室肥厚,即出现HFpEF表型。HFpEF组mTRG2小鼠、mTRG3小鼠分别在第6周和第4周出现了HFpEF表型。造模16周后,HFpEF组各基因型小鼠的血脂、收缩压、舒张压均较对照组同基因型小鼠明显升高(P<0.05)。结论:端粒缩短可以促进由高脂饮食和L-NAME饮水联合诱导的小鼠HFpEF早期发生和形成。 展开更多
关键词 射血分数保留的心力衰竭 端粒缩短 基因敲除
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小白链霉菌中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建与优化
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作者 开朗 杨昊 +1 位作者 朱道君 陈旭升 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期10-17,共8页
小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为... 小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为利用代谢工程方法进一步提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,亟需建立基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法。为此,该文以S.albulus GS114为研究对象,以ε-聚赖氨酸合成酶基因pls为靶基因,构建了CRISPR-Cas9基因敲除系统,成功敲除了pls,编辑效率为100%。为进一步提高获得的敲除株数量,对S.albulus GS114结合转移条件进行了系统优化,获得的最优结合转移条件为:供受体比例1∶1,镁离子浓度30 mmol/L,55℃热激孢子10 min,培养20 h后覆盖抗生素。在最优转移条件下,结合转移效率达到2.5×10^(-8),较优化前提高了78%。该研究结果一方面为后续S.albulus的代谢工程改造提供了重要工具,另一方面为其他工业链霉菌构建CRISPR-Cas系统提供了重要参考。 展开更多
关键词 放线菌 小白链霉菌 CRISPR-Cas9系统 基因敲除
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基于“敲除策略”筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分
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作者 罗鑫 郑吴殷晓 +6 位作者 詹健婷 杨敬宇 马浩然 干国平 尤朋涛 叶晓川 刘丹 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第9期1387-1392,共6页
目的筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分。方法联合“敲除策略”与高效液相色谱(HPLC)检测对高良姜乙酸乙酯部位的组分(成分)进行分离,同时得到不含该组分(成分)的阴性样品;构建幽门螺杆菌感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)胃... 目的筛选高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎活性成分。方法联合“敲除策略”与高效液相色谱(HPLC)检测对高良姜乙酸乙酯部位的组分(成分)进行分离,同时得到不含该组分(成分)的阴性样品;构建幽门螺杆菌感染人胃黏膜上皮细胞(GES-1)胃炎模型,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8和IL-1β水平。结果总黄酮组分、不含二苯基庚烷的阴性组分、不含5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基)苯基-1-苯基-3-庚酮(DHPA)的阴性组分以及高良姜素(给药浓度8μg·mL^(-1)作用24 h),均能够显著降低幽门螺杆菌胃炎细胞上清液中IL-6水平;总黄酮组分浓度为16μg·mL^(-1)时可显著抑制幽门螺杆菌感染GES-1胃炎细胞IL-6、TNF-α、IL-8和IL-1β的释放。结论总黄酮组分是高良姜乙酸乙酯部位抗幽门螺杆菌胃炎的主要活性组分,该研究结果为进一步阐释高良姜抗幽门螺杆菌胃炎药效物质基础奠定了基础。 展开更多
关键词 高良姜 幽门螺杆菌胃炎 敲除 活性组分 活性成分
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RF knock-out extraction in HITFiL 被引量:1
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作者 石健 杨建成 +5 位作者 夏佳文 原有进 李杰 柴伟平 宋明涛 张小虎 《Chinese Physics C》 SCIE CAS CSCD 2012年第10期1004-1008,共5页
A compact facility for cancer therapy has been designed and is presently under construction. A slow beam extraction system using the RF-Knock Out method and 3rd-order resonance is adopted in the synchrotron of this fa... A compact facility for cancer therapy has been designed and is presently under construction. A slow beam extraction system using the RF-Knock Out method and 3rd-order resonance is adopted in the synchrotron of this facility. Eight sextupoles are used, four of them are for correcting the chromaticity and the rest for driving the 3rd-order resonance. In order to save the aperture of vacuum chamber, a 3-magnet bump is adopted during the extraction process. The extraction phase space map and the last 3 turns’ particle trajectory before extraction are given. The matching betatron functions with HEBT (high energy beam transport) are also presented. 展开更多
关键词 RF-knock out slow extraction 3rd order resonance cancer therapy
原文传递
目标成分敲出/敲入技术及其在食品功能领域的应用进展
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作者 王怡雯 苏安祥 +4 位作者 雍韵琪 姚丽 马宁 杨文建 胡秋辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第7期123-130,共8页
食品具有多种生物活性成分,并且有些成分间具有协同或拮抗作用,挖掘和发现有效活性成分是研究其健康功能的关键。目标成分敲出/敲入技术通过对比目标成分敲出/敲入前后食品功能的变化,从而可以高效研究目标成分对食品功能的贡献。中药... 食品具有多种生物活性成分,并且有些成分间具有协同或拮抗作用,挖掘和发现有效活性成分是研究其健康功能的关键。目标成分敲出/敲入技术通过对比目标成分敲出/敲入前后食品功能的变化,从而可以高效研究目标成分对食品功能的贡献。中药研究中常将两种及以上活性成分有机组合,可以发挥更好的功能效果,因此目标成分敲出/敲入技术在中药研究中应用较多,而在食品领域应用较少。随着化合物分离技术的不断成熟,已有食品中活性成分的研究应用了该项技术的思路,但该技术在食品领域并未得到系统的应用。本文概述了目标成分敲出/敲入技术发展、分析流程及在食品功能领域的应用进展,以期为目标成分敲出/敲入技术在食品功能研究领域的应用提供参考。 展开更多
关键词 功能食品 活性成分 成分敲出 成分敲入
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青枯雷尔氏菌温度相关致病基因yqhE功能研究
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作者 周大祥 杨俊年 +2 位作者 陈弘 殷幼平 熊书 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期141-148,共8页
不同温度下青枯雷尔氏菌表达谱PPI网络分析发现,yqhE可能是青枯雷尔氏菌新的温度相关致病基因。克隆青枯雷尔氏菌CBM613的yqh E基因,结果发现该基因长度为831 bp,共编码276个氨基酸。基因敲除结果显示,28℃培养的yqhE突变株较野生型菌... 不同温度下青枯雷尔氏菌表达谱PPI网络分析发现,yqhE可能是青枯雷尔氏菌新的温度相关致病基因。克隆青枯雷尔氏菌CBM613的yqh E基因,结果发现该基因长度为831 bp,共编码276个氨基酸。基因敲除结果显示,28℃培养的yqhE突变株较野生型菌株致病力降低,病程延长,但并未彻底丧失致病力。20℃和28℃培养的yqh E突变株维生素C的生物合成皆被抑制;与28℃相比,20℃培养下野生型菌株维生素C的合成能力降低。突变株在20℃和28℃培养下甲基乙二醛(MG)和丙二醛(MDA)明显积累,其中20℃积累更多;20℃培养的野生型菌株MG和MDA比28℃积累更多。维生素C的生物合成被抑制导致青枯雷尔氏菌自由基清除能力减弱与氧化应激反应增强,MG和MDA积累产生细胞毒性,上述结果可能与28℃培养的突变株致病力减弱,20℃培养的野生型菌株致病力丧失有关。综上结果表明yqhE是青枯雷尔氏菌温度相关致病基因。 展开更多
关键词 青枯雷尔氏菌 温度相关致病基因 yqhE 基因敲除 功能研究
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敲除LRRK2基因的PC12细胞移植对帕金森病大鼠的疗效
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作者 刘治华 韦丽萍 +5 位作者 田慧虹 蔡慧敏 聂坤 张玉虎 王丽娟 王丽敏 《医学研究杂志》 2023年第5期83-88,共6页
目的探究经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞移植至帕金森病模型大鼠右侧纹状体的治疗效果及作用机制。方法用CRISPR/Cas9单载体慢病毒转染PC12细胞构建敲除LRRK2基因的细胞株,Western blot法检测敲除效率;颈背部皮下注... 目的探究经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞移植至帕金森病模型大鼠右侧纹状体的治疗效果及作用机制。方法用CRISPR/Cas9单载体慢病毒转染PC12细胞构建敲除LRRK2基因的细胞株,Western blot法检测敲除效率;颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型,通过立体定向注射移植敲除LRRK2基因的PC12细胞至帕金森病大鼠右侧纹状体,移植1周后采用旷场实验、爬杆实验检测对大鼠的运动功能的改变,用Western blot法、免疫组化检测纹状体区凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax以及酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化探索经CRISPR/Cas9单载体慢病毒敲除LRRK2基因的PC12细胞对PD模型大鼠运动症状改善的作用机制。结果右侧纹状体PC12细胞移植治疗1周后,与帕金森病组大鼠比较,移植敲除LRRK2基因的PC12细胞的PD大鼠的旷场实验运动总路程延长、运动平均速度增大及爬杆试验评分降低(P<0.05);右侧纹状体中TH的表达量增多(P<0.05);右侧状体区中细胞凋亡的发生率降低(P<0.05),且上述指标的改善程度均高于移植正常PC12细胞的帕金森病大鼠(P<0.05)。结论经过LRRK2敲除的PC12细胞移植后对帕金森病模型大鼠的运动功能有更好的疗效,其潜在的作用机制可能是减少移植区中细胞凋亡的发生率来增强其疗效,基因修饰LRRK2的细胞移植有望成为帕金森病运动功能的治疗手段之一。 展开更多
关键词 LRRK2 基因敲除 帕金森病 细胞凋亡
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基于CRISPR/Cas9技术构建GP73基因敲除小鼠模型及表型验证
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作者 徐艺心 甄兰 +2 位作者 黄庆 莫运海 吴飞翔 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第1期107-111,共5页
目的:基于CRISPR/Cas9技术构建高尔基体73(GP73)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法:利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,造成GP73基因蛋白读码框移码,使其功能缺失,针对GP73基因外显子4设计sgRNA靶位点,体外转录获... 目的:基于CRISPR/Cas9技术构建高尔基体73(GP73)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法:利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,造成GP73基因蛋白读码框移码,使其功能缺失,针对GP73基因外显子4设计sgRNA靶位点,体外转录获得sgRNA,与编码Cas9的mRNA混合后通过受精卵显微注射方法获得F0代阳性敲除小鼠,通过繁育及基因型鉴定获得GP73基因敲除纯合子小鼠(GP73-/-小鼠)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肝、肾、皮下脂肪、棕色脂肪组织中GP73 mRNA表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清GP73蛋白水平。结果:与野生型(WT)小鼠相比,GP73-/-小鼠肝、肾、皮下脂肪、棕色脂肪组织GP73 mRNA及蛋白表达水平降低,血清GP73蛋白水平降低(均P<0.05)。结论:基于CRISPR/Cas9技术成功构建了GP73基因敲除小鼠。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 GP73 基因敲除 基因型鉴定
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miR-148a-3p调控血管生成的体内外表型鉴定
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作者 黄瑾 韩文卿 +1 位作者 李鑫 陈骁俊 《组织工程与重建外科》 CAS 2023年第6期525-529,540,共6页
目的明确miR-148a-3p调控血管生成的表型。方法提取miR-148a基因敲除小鼠的原代组织,结合免疫组织化学染色,探究miR-148a敲除对血管生成的影响;通过miRNA mimic转染,在人脐静脉血管内皮细胞(hUVECs)中过表达miR-148a-3p,结合Matrigel基... 目的明确miR-148a-3p调控血管生成的表型。方法提取miR-148a基因敲除小鼠的原代组织,结合免疫组织化学染色,探究miR-148a敲除对血管生成的影响;通过miRNA mimic转染,在人脐静脉血管内皮细胞(hUVECs)中过表达miR-148a-3p,结合Matrigel基质胶管腔形成实验、细胞迁移实验、荧光定量PCR实验等,从敲除和过表达两方面明晰miR-148a-3p对血管生成的作用。结果与同窝对照相比,miR-148a基因敲除小鼠的骨骼组织存在H型血管分布异常。离体实验得到了相似的趋势,miR-148a敲除胎鼠的跖骨具有明显更强的血管形成能力。通过miR-148a-3p mimic过表达血管内皮细胞中的miR-148a-3p表达水平,发现miR-148a-3p过表达不影响hUVECs的增殖能力,但可通过抑制其迁移能力干扰血管生成,影响伪足形成、管腔形成等过程。结论miR-148a-3p可抑制体内外血管生成,包括细胞出芽、迁移、管腔形成等生物学过程。 展开更多
关键词 miR-148a-3p 血管生成 基因敲除小鼠 表型鉴定 H型血管
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FKBP38蛋白对子宫内膜癌前期病变的影响及其机制研究
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作者 闫云静 穆云萍 +2 位作者 王帅 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1320-1325,共6页
目的构建子宫特异敲除FKBP38小鼠模型,探究FKBP38对于小鼠子宫内膜癌前期病变的影响及其作用机制。方法通过胚胎注射法使小鼠FKBP38基因上携带loxP位点,构建转基因小鼠模型。在此基础上,以在子宫特异表达的孕酮受体启动子Pgr-Cre小鼠介... 目的构建子宫特异敲除FKBP38小鼠模型,探究FKBP38对于小鼠子宫内膜癌前期病变的影响及其作用机制。方法通过胚胎注射法使小鼠FKBP38基因上携带loxP位点,构建转基因小鼠模型。在此基础上,以在子宫特异表达的孕酮受体启动子Pgr-Cre小鼠介导FKBP38条件性敲除,以获得FKBP38子宫特异敲除小鼠模型Pgr-Cre;FKBP38^(fl/fl)。通过PCR及Western blot对子宫特异敲除FKBP38小鼠进行鉴定;通过苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)检测小鼠子宫敲除FKBP38后组织病理性变化;通过Western blot技术检测小鼠子宫敲除FKBP38后对mTOR通路的影响。结果小鼠子宫特异敲除FKBP38后子宫中FKBP38蛋白表达水平明显降低,与同年龄同窝小鼠相比,差异有统计学意义(P<0.01)。在己烯雌酚刺激下,小鼠18月龄时,子宫特异敲除FKBP38小鼠中16.7%(1/6)发生复杂性非典型性增生(complex atypical hyperplasia,CAH),33.3%(2/6)发生简单性增生(simple hyperplasia,SH)。此外,子宫特异敲除FKBP38小鼠子宫中AKT、S6及4E-BP-1蛋白的磷酸化水平明显升高。结论子宫特异敲除FKBP38小鼠子宫中FKBP38蛋白明显降低,表明小鼠子宫特异敲除模型构建成功。此外,子宫特异敲除FKBP38后,小鼠发生SH以及CAH,表明FKBP38可能与子宫内膜癌癌前病变相关。这可能与FKBP38调控mTOR通路关键性蛋白Akt、S6及4E-BP-1蛋白的磷酸化相关。 展开更多
关键词 FKBP38 子宫内膜癌 条件性敲除 Cre/loxP重组酶系统 转基因小鼠 MTOR
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LNG接收站BOG压缩机平稳运行的工艺优化
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作者 吴桂良 杨向东 +1 位作者 王洪昌 陈营 《低碳化学与化工》 CAS 北大核心 2023年第6期177-182,共6页
液化天然气(LNG)接收站蒸发气(BOG)压缩处理工艺中,滴液或重组分在BOG低压机入口过滤器滤网上凝结,导致压差升高甚至触发压缩机跳车;低压机与高压机串联操作时负荷匹配性差,极易引发压缩机频繁跳停。针对上述问题,以某LNG接收站为例,通... 液化天然气(LNG)接收站蒸发气(BOG)压缩处理工艺中,滴液或重组分在BOG低压机入口过滤器滤网上凝结,导致压差升高甚至触发压缩机跳车;低压机与高压机串联操作时负荷匹配性差,极易引发压缩机频繁跳停。针对上述问题,以某LNG接收站为例,通过理论及模拟计算与现场运营经验相结合的方法,从工艺设计源头出发,对低压机入口分液罐工艺尺寸参数、低压机和高压机串联操作工艺进行了设计优化。其中,入口分液罐设计尺寸的工艺优化,提高了对BOG中携带的液滴或重组分的分离效果,避免了液滴或重组分在过滤器滤芯处富集导致的压差高报警或压缩机跳车;在串联的低压机和高压机之间增设具有一定缓冲时间的BOG缓冲罐,可有效平衡气体负荷变化,降低了两台压缩机串联操作的难度,减少了因负荷不匹配导致的频繁跳车。优化后,该接收站BOG处理系统长时间平稳运行。 展开更多
关键词 LNG接收站 BOG低压机 高压机 入口分液罐 BOG缓冲罐
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VEGFB基因敲除对动脉粥样硬化的作用研究
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作者 王珍珍 许艳薇 +3 位作者 杨帅 童凌琳 陈阳 陈仁金 《徐州医科大学学报》 CAS 2023年第11期795-799,共5页
目的为探究血管内皮生长因子B(VEGFB)基因在动脉粥样硬化中的作用,构建ApoE-/-/VEGFB-/-双敲小鼠模型进行研究。方法实验共分为4组:高脂饮食ApoE-/-/VEGFB-/-组(WD-ApoE-/-/VEGFB-/-)、普通饮食ApoE-/-/VEGFB-/-组(Chow-ApoE-/-/VEGFB-... 目的为探究血管内皮生长因子B(VEGFB)基因在动脉粥样硬化中的作用,构建ApoE-/-/VEGFB-/-双敲小鼠模型进行研究。方法实验共分为4组:高脂饮食ApoE-/-/VEGFB-/-组(WD-ApoE-/-/VEGFB-/-)、普通饮食ApoE-/-/VEGFB-/-组(Chow-ApoE-/-/VEGFB-/-)、高脂饮食ApoE-/-组(WD-ApoE-/-)和普通饮食ApoE-/-组(Chow-ApoE-/-)。每周测定小鼠体重和血脂变化,对主动脉进行油红O染色,取心脏进行冰冻切片油红O及H-E染色,分析小鼠主动脉斑块沉积变化。结果WD-ApoE-/-/VEGFB-/-组体重、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白显著高于WD-ApoE-/-组;主动脉大体油红O染色结果显示:相较于ApoE-/-小鼠,ApoE-/-/VEGFB-/-小鼠主动脉脂质斑块面积显著增加。冰冻切片油红O染色结果显示:相较于ApoE-/-小鼠,ApoE-/-/VEGFB-/-小鼠主动脉根部脂质斑块面积显著增加。冰冻切片H-E染色结果显示:相较于ApoE-/-小鼠,ApoE-/-/VEGFB-/-小鼠主动脉根部斑块坏死面积显著增加。结论VEGFB-/-可以通过增加主动脉脂质斑块沉积,增加斑块坏死面积,促进动脉粥样硬化的进展。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子B 基因敲除 动脉粥样硬化 APOE-/-小鼠 油红O染色
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红钢3号高炉安全快速停炉实践 被引量:1
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作者 张波 李晓东 《四川冶金》 CAS 2023年第3期13-17,共5页
介绍了红钢3号高炉在无预休风、未充分洗炉情况下,使用炉顶洒水枪降料面停炉的操作实践。通过“停炉前控制改善用料和精准负荷调控,加盖面焦时采用边缘布焦矩阵并控料线下料,以及降料面过程分阶段调控和合理出铁管理”等技术手段,高炉... 介绍了红钢3号高炉在无预休风、未充分洗炉情况下,使用炉顶洒水枪降料面停炉的操作实践。通过“停炉前控制改善用料和精准负荷调控,加盖面焦时采用边缘布焦矩阵并控料线下料,以及降料面过程分阶段调控和合理出铁管理”等技术手段,高炉克服了洒水不均、顶温偏差大、频繁爆震等困难,历时11 h20 min安全降料面至风口区域,实现安全快速降料面停炉。 展开更多
关键词 高炉 降料面 停炉 安全快速 爆震
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利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻Pi21基因的效率分析 被引量:19
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作者 王芳权 范方军 +4 位作者 李文奇 朱金燕 王军 仲维功 杨杰 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期469-478,共10页
利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2... 利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2同时突变的效率为78.57%,突变效率较高。通过对靶位点进行测序,发现靶位点突变类型较多,包括碱基缺失、碱基插入、碱基缺失后插入其他碱基和大片段DNA缺失等类型。对突变株系进行氨基酸预测,发现大部分株系都存在移码突变现象而使基因突变彻底,少数株系表现为部分氨基酸的缺失或变异。成功敲除了水稻Pi21基因,并对突变效率和类型进行了分析,为进一步验证Pi21基因功能、培育广谱抗稻瘟病的水稻新品系奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 稻瘟病 Pi21 基因敲除
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大肠杆菌ptsG基因敲除及其缺陷株生长特性研究 被引量:26
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作者 韩聪 张惟材 +1 位作者 游松 黄留玉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期16-20,共5页
在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中... 在大肠杆菌磷酸转移酶系统中 ,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCBGlc转运入细胞。利用代谢工程技术构建ptsG基因缺陷株 ,有望降低葡萄糖的摄取速率 ,减少乙酸累积 ,促进菌体生长。运用PCR技术 ,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源 ,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段。经电转化 ,将外源DNA片段分别转入EscherichiacoliDH5α、JM10 9中。在Red重组酶的作用下 ,外源DNA片段与染色体上同源区域重组 ,将基因ptsG敲除 ,构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM10 9P。在LB培养基中 ,ptsG基因缺陷株的生长状况与亲株无明显差异。在含有葡萄糖的LB培养基中 ,DH5αP、JM10 9P的最高菌密度分别是对照菌株DH5α、JM10 9的 3 4 7倍和 4 2 5倍 ,ptsG基因缺陷株对葡萄糖的摄入量也明显高于对照菌株。重组蛋白肿瘤坏死因子 (TNF)在DH5αP、JM10 9P中的表达量分别占全菌蛋白的2 4 3%、2 0 8% ,A6 0 0 分别为 8 2 8、7 6 2 ,TNF在缺陷株中单位体积的表达量明显高于对照菌株。以上结果说明 ,大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和表达外源蛋白的能力 ,在大肠杆菌高密度发酵研究方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 ptsG基因 缺陷株 生长特性 基因敲除 代谢工程
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黄连解毒汤对高脂饮食apoE^(-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应影响的研究 被引量:23
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作者 马雅銮 王蓓蓓 +7 位作者 韩俊燕 李蕊 张卫梅 李彤 陈冰 苏静 王宪波 曾辉 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1520-1525,共6页
目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。... 目的观察黄连解毒汤对高脂饮食喂养的apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠全身和主动脉血管局部免疫反应的影响。方法以8只野生型C57BL6小鼠为野生普食组,24只apoE-/-小鼠随机分为apoE-/-普食组、apoE-/-高脂组、apoE-/-高脂加中药组,每组8只。普食组与高脂组分别给予普食和高脂饮食4周。ApoE-/-高脂加中药组同时给予黄连解毒汤5 g/(kg·d)灌胃,其他小鼠采用等量纯净水灌胃。4周后,检测血脂水平、外周血单核细胞比例及其表面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和清道夫受体CD36的表达;检测主动脉病理变化和主动脉血管局部细胞因子表达水平;进一步采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激检测血浆细胞因子的水平。结果 (1)与野生普食组比较,apoE-/-普食组TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组TC和LDL-C水平显著增高(P<0.05);apoE-/-高脂组与apoE-/-高脂加中药组血脂各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与野生普食组比较,apoE-/-普食组外周血单核细胞比例无明显变化,TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠外周血单核细胞比例及TLR4表达水平显著增多(P<0.05);与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组外周血单核细胞比例及其表面TLR4表达显著降低,清道夫受体CD36表达水平亦显著降低(P<0.05)。(3)LPS刺激3 h后,与野生普食组比较,apoE-/-普食组血浆TNF-α和IL-10表达显著增加(P<0.05);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组小鼠血浆IL-12、TNF-α、MCP-1和IL-10表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组MCP-1表达显著下调,而IL-10水平进一步显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)与野生普食组比较,apoE-/-普食组主动脉血管壁炎症因子IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1βmRNA水平显著升高,抑炎因子IL-10亦显著升高(P<0.05,P<0.01);与apoE-/-普食组比较,apoE-/-高脂组主动脉血管壁不仅IFN-γ、MCP-1、TNF-α和IL-1β水平进一步显著升高,且抑炎因子IL-12、IL-10和TGF-β亦显著升高(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤干预4周后,与apoE-/-高脂组比较,apoE-/-高脂加中药组主动脉血管壁炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-1β和IL-12显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论高脂饮食引发apoE-/-小鼠全身性炎症反应和血管局部炎症反应,血管局部炎症反应程度超过全身性炎症反应。黄连解毒汤干预后能够减轻炎症反应,并且对血管局部的作用更为显著,同时增强全身抗炎反应。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 APO E基因敲除小鼠 高脂血症 单核细胞 细胞因子
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