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福建地区2株猪嵴病毒VP1基因的克隆及遗传进化分析 被引量:1
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作者 张永军 胡永浩 《安徽农业科学》 CAS 2016年第14期149-151,共3页
[目的]调查猪嵴病毒在福建地区腹泻猪群中的流行和变异情况。[方法]根据Gen Bank中登陆的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKo V)结构蛋白VP1基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从某猪场采集腹泻小肠样品中扩增猪嵴病毒VP1基因,将扩增... [目的]调查猪嵴病毒在福建地区腹泻猪群中的流行和变异情况。[方法]根据Gen Bank中登陆的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKo V)结构蛋白VP1基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从某猪场采集腹泻小肠样品中扩增猪嵴病毒VP1基因,将扩增后的目的片段克隆后进行序列测定。应用生物信息学软件,将获得的2株猪嵴病毒VP1和Gen Bank的猪嵴病毒株VP1基因序列进行对比分析。[结果]猪嵴病毒CH/FJNP/12L/2015与匈牙利株K-30-HU/2008/HUN(GQ249161)的核苷酸同源性最高,为88.1%,氨基酸同源性为95.3%。CH/FJNP/12W1/2015与越南株714441/CAOLANH-VH/2012-2-21(KT266058)的核苷酸同源性最高,为88.2%,氨基酸同源性为96.1%,同源重组分析显示,2株毒株均无明显同源重组发生。[结论]频繁的畜禽国际贸易,以及如今便捷的现代化交通工具,人们生活提供方便的同时,也加速了猪嵴病毒毒性的传播。 展开更多
关键词 猪嵴病毒 VP1 基因 同源性
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国内新发D种库布病毒L蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 米日古丽·买吐送 常晓冉 +6 位作者 张群 章凡 胡俊英 张芷源 张福慧 王倩颖 王新平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期893-900,共8页
根据从病牛体内分离的国内首株D种库布病毒(Kobuvirus,KoV)的基因组序列,应用RT-PCR技术扩增出L蛋白基因片段,并将其克隆到原核表达载体中,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-KoV-L。将重组质粒转化到BL21(DE3)中,通过大肠杆菌表达系统诱导表... 根据从病牛体内分离的国内首株D种库布病毒(Kobuvirus,KoV)的基因组序列,应用RT-PCR技术扩增出L蛋白基因片段,并将其克隆到原核表达载体中,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-KoV-L。将重组质粒转化到BL21(DE3)中,通过大肠杆菌表达系统诱导表达重组蛋白GST-L。以纯化的重组蛋白作为免疫原,与弗式佐剂混合乳化后免疫BALB/c小鼠,采集血清效价较高小鼠的脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经过筛选和4次亚克隆获得3株能够稳定分泌抗L蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,3F3和4G10单抗的亚型为IgG1,4F5单抗亚型为IgG2a。特异性和稳定性试验结果显示,获得的3株单克隆抗体均可以特异性检出D种KoV抗原。利用蛋白截断技术与Western blot方法确定了3株单抗识别的抗原表位区域。进一步通过肽扫描法和间接ELISA方法确定了3F3、4F5和4G10单克隆抗体的抗原表位分别为L蛋白氨基酸序列中的^(97)RICAKTLPGPWHS^(107)、^(105)GPWHSKLTKAERIF^(118)和^(13)ERPFHYSLPKPSS^(25)部位。本研究首次获得了抗D种KoV的3株单克隆抗体,并确定了其抗原表位位点,该结果为库布病毒感染的诊断方法建立、致病机制以及L蛋白功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 D种库布病毒 kobuvirus L蛋白 单克隆抗体 AiV-D 抗原表位
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猪嵴病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:9
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作者 李淞 朱玲 +4 位作者 周远成 吴云飞 陈蕾 徐志文 郭万柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1150-1153,共4页
根据GenBank中猪嵴病毒(porcine kobuvirus)3D-RNA聚合酶基因序列设计并合成了1对特异性引物,建立了一种猪嵴病毒RT-PCR检测方法。反应产物测序结果与GenBank中猪嵴病毒SH-W-CHN/2010/China株比较,基因序列同源性为93%。利用该方法对猪... 根据GenBank中猪嵴病毒(porcine kobuvirus)3D-RNA聚合酶基因序列设计并合成了1对特异性引物,建立了一种猪嵴病毒RT-PCR检测方法。反应产物测序结果与GenBank中猪嵴病毒SH-W-CHN/2010/China株比较,基因序列同源性为93%。利用该方法对猪蓝耳病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、链球菌、猪巴氏杆菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性;敏感性试验表明,该方法最低能检测到的病毒核酸含量为1pg。利用所建立的RT-PCR方法检测采集自我国四川地区123份临床样品,结果阳性率为59.3%,表明猪嵴病毒在四川地区猪群中流行率较高。 展开更多
关键词 猪嵴病毒(porcine kobuvirus) 3D-RNA聚合酶 RT-PCR
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A Comprehensive Review on Human Aichi Virus 被引量:6
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作者 Enrique Rivadulla Jesús L.Romalde 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2020年第5期501-516,共16页
Although norovirus,rotavirus,adenovirus and Astrovirus are considered the most important viral agents transmitted by food and water,in recent years other viruses,such as Aichi virus(AiV),have emerged as responsible fo... Although norovirus,rotavirus,adenovirus and Astrovirus are considered the most important viral agents transmitted by food and water,in recent years other viruses,such as Aichi virus(AiV),have emerged as responsible for gastroenteritis outbreaks associated with different foods.AiV belongs to the genus Kobuvirus of the family Picornaviridae.It is a virus with icosahedral morphology that presents a single stranded RNA genome with positive sense(8280 nucleotides)and a poly(A)chain.AiV was first detected from clinical samples and in recent years has been involved in acute gastroenteritis outbreaks from different world regions.Furthermore,several studies conducted in Japan,Germany,France,Tunisia and Spain showed a high prevalence of AiV antibodies in adults(between 80%and 99%),which is indicative of a large exposure to this virus.The aim of this review is to bring together all the discovered information about the emerging pathogen human Aichi virus(AiV),discussing the possibles routes of transmission,new detection techniques and future research.Although AiV is responsible for a low percentage of gastroenteritis outbreaks,the high seroprevalence shown by human populations indicates an evident role as an enteric agent.The low percentage of AiV detection could be explained by the fact that the pathogen is more associated to subclinical infections.Further studies will be needed to clarify the real impact of AiV in human health and its importance as a causative gastroenteritis agent worldwide. 展开更多
关键词 Human Aichivirus(AiV) kobuvirus PICORNAVIRIDAE GASTROENTERITIS
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