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锦鲤疱疹病毒RAA-LFD检测方法的建立
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作者 吕晓楠 徐立蒲 +4 位作者 张文 王小亮 王静波 王姝 曹欢 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期374-378,425,共6页
为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5&#... 为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'端分别标记Biotin、FAM荧光基因。采用方阵法对RAA反应时间和温度等条件优化,结果显示,该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对KHV目的基因片段的有效扩增,并且扩增产物结果可直接观察,由此初步建立了KHV的RAA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,建立的RAA-LFD检测方法与鲤浮肿病毒(CEV)、鲫造血器官坏死病毒(CHNV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙虹彩病毒(BIV)等常见水生动物病原核酸均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品p EASY-KHV的检测限为50拷贝/μL,与行业标准常规PCR的敏感性相当。重复性试验结果显示,该方法对5份p EASY-KHV的检测结果均一致;对室温放置7 d的p EASY-KHV检测结果也均一致。采用该方法和常规PCR对60份临床样品检测,结果显示二者的阴性、阳性符合率以及总符合率均为100%。本研究首次建立了用于检测KHV的RAA-LFD方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作方便,可用于KHV的临床样品检测,为KHV现地检测提供了一种简便、快捷的技术手段。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 重组酶介导扩增 侧向流试纸条 快速检测
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Preliminary Study on Effects of Anthraquinone Extract of Polygonum cuspidatum on KHV
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作者 Zhuoyu WANG Ming CHEN +4 位作者 Bingkun YANG Changyou LIU Chanjuan CHEN Lihe FAN Yongjun WANG 《Asian Agricultural Research》 2022年第1期72-76,共5页
[Objectives]To study the toxic effect and antiviral activity of anthraquinone extract of Polygonum cuspidatum on infection of Koi herpes virus(KHV).[Methods]The MTT method and CPE microscopy were used to detect the co... [Objectives]To study the toxic effect and antiviral activity of anthraquinone extract of Polygonum cuspidatum on infection of Koi herpes virus(KHV).[Methods]The MTT method and CPE microscopy were used to detect the common carp brain(CCB)cytotoxicity of the P.cuspidatum anthraquinone extract in 48 h.Eight groups of different concentrations of the P.cuspidatum anthraquinone extract 1.96,3.91,7.28,15.63,31.25,62.5,125,250μg/mL experimental groups and a control group without drug effect were set up.After determining the maximum non-toxic range of the P.cuspidatum anthraquinone extract,the viral replication inhibition test was carried out.[Results]The concentration of the P.cuspidatum anthraquinone extract 31.25μg/mL was recognized as the maximum non-toxic concentration.The survival rate of CCB cells was higher than 80%,and the toxic dose(CC50)of the drug for 50%cell death was(72.67±2.12)μg/mL.The maximum inhibition rate of the P.cuspidatum anthraquinone extract was 78.63%±5.47%at a concentration of 31.25μg/mL,and the 50%effective drug dose(IC50)for inhibiting the virus was(13.67±0.47)μg/mL,and the therapeutic index(TI)was 5.48±0.49.In the direct virus killing test,the highest virus inhibition rate was 32.21%.[Conclusions]Under the experimental conditions,it can be concluded that the P.cuspidatum anthraquinone extract has high anti-KHV activity,and at the same time.It is expected to lay a theoretical foundation for the research of P.cuspidatum anthraquinone extract against KHV. 展开更多
关键词 Polygonum cuspidatum koi herpes virus(khv) Antiviral effect
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重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流动试纸条快速检测锦鲤疱疹病毒 被引量:5
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作者 楚馨 冯梓钊 +3 位作者 姜有声 王浩 吕利群 许丹 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期866-873,共8页
为建立一种快速、灵敏并适用于临床检测Ⅲ型鲤疱疹病毒(CyHV-3,KHV)的方法,实验根据KHV SphI-5基因的保守序列片段设计引物及探针,采用重组酶聚合酶扩增技术结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测KHV。重组酶聚合酶扩增技术(RPA)具恒温扩增... 为建立一种快速、灵敏并适用于临床检测Ⅲ型鲤疱疹病毒(CyHV-3,KHV)的方法,实验根据KHV SphI-5基因的保守序列片段设计引物及探针,采用重组酶聚合酶扩增技术结合侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测KHV。重组酶聚合酶扩增技术(RPA)具恒温扩增及高灵敏度特点,简化了设备要求的同时又能做到高效检测病毒,再结合侧向流动试纸条(LFD)将RPA结果快速地可视化,提高了该疾病的检测效率。结果表明,在38℃的最适反应温度下,采用RPA-AGE技术仅需10min便可检测出病原的目标片段,结合LFD方法仅需5min便可将RPA结果通过试纸条可视化呈现。研究研发的KHV RPA-LFD检测方法简单、快捷,可为实验条件有限的养殖场快速诊断需求提供技术支撑。 展开更多
关键词 快速检测 重组酶聚合酶扩增技术 侧向流动试纸条 锦鲤疱疹病毒
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锦鲤疱疹病毒胸苷激酶基因的生物信息学分析
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作者 陈莉 周广彪 +4 位作者 郑耿东 温尔英 陈文婉 吴松浩 利光辉 《安徽农业科学》 CAS 2023年第16期90-94,共5页
[目的]探究锦鲤疱疹病毒胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK)基因编码蛋白的生物学特性及结构功能特征。[方法]采用生物信息学软件对胸苷激酶蛋白的理化性质、亲/疏水性、结构域及二级结构和三级结构进行预测分析。[结果]TK蛋白编码224个氨基... [目的]探究锦鲤疱疹病毒胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK)基因编码蛋白的生物学特性及结构功能特征。[方法]采用生物信息学软件对胸苷激酶蛋白的理化性质、亲/疏水性、结构域及二级结构和三级结构进行预测分析。[结果]TK蛋白编码224个氨基酸,不稳定系数较大,属于不稳定蛋白;且该蛋白不含有信号肽及跨膜结构,位于膜外;结构域位于2-175氨基酸残基区域,与其他病毒氨基酸序列比对分析,锦鲤疱疹病毒TK基因与鲤科疱疹病毒亲缘关系较近。[结论]对锦鲤疱疹病毒TK基因的分析,为深入研究锦鲤疱疹病毒的特性及分子机制,采取更有效的精准防控措施提供了基础保障,也为下一步的研究计划提供了方向。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 胸苷激酶 生物信息学
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锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白基因的PCR扩增与序列分析 被引量:12
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作者 谭爱萍 邹为民 +6 位作者 赵飞 姜兰 陈信廉 劳海华 简清 陆小萏 罗理 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期880-884,共5页
为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段。将所得基因片段... 为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段。将所得基因片段克隆到pMD18-T Simple Vector载体中,获得重组质粒T-KMEP;酶切鉴定后进行序列测定,并采用氨基酸亲水性分析软件TMpred对其编码氨基酸序列进行分析;在对该片段所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,获得重组表达载体pBV-KMEP1和pBV-KMEP2。所获得的基因片段大小为771bp,该基因片段与GenBank中已登录的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性为100%,是一个完整的开放阅读框,所编码的蛋白由256个氨基酸组成,分子量为28.2kD,等电点(PI)为8.65。该序列含有4个跨膜区,可构成主要抗原决定簇。结果显示所获得的目的基因片段就是锦鲤主要囊膜蛋白全基因。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 主要囊膜蛋白基因 序列分析 原核表达载体
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锦鲤疱疹病毒的检测与人工感染试验 被引量:14
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作者 周永灿 袁军法 +3 位作者 任武泽 刘荭 江育林 石正丽 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S2期249-252,共4页
基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测... 基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测序,结果表明与GenBank登记序列完全一致.用组织匀浆上清人工感染健康锦鲤,并从试验感染鱼组织中检测到KHV病毒DNA.该结果表明KHV或CNGV已经传播到我国,应引起重视. 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒(khv) 鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV) 人工感染 PCR检测
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金鱼鲤疱疹病毒Ⅱ型的分子诊断 被引量:26
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作者 李莉娟 罗杨志 +2 位作者 刘学芹 顾泽茂 袁军法 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期92-96,共5页
针对国内市场上流通的金鱼,开展CyHV-2的流行病学调查,并比较CyHV-2不同分离株的分子特征。结果显示:无明显临床症状的金鱼带毒率较高(13.89%),表明我国已有CyHV-2的分布。分子生物学研究显示,我国金鱼和异育银鲫来源的CyHV-2编码的解... 针对国内市场上流通的金鱼,开展CyHV-2的流行病学调查,并比较CyHV-2不同分离株的分子特征。结果显示:无明显临床症状的金鱼带毒率较高(13.89%),表明我国已有CyHV-2的分布。分子生物学研究显示,我国金鱼和异育银鲫来源的CyHV-2编码的解旋酶基因部分序列一致,表明异育银鲫来源的CyHV-2和金鱼来源的CyHV-2极可能为同一种病毒。同日本分离株(H.Fukuda)比较,我国金鱼来源的CyHV-2编码的DNA聚合酶基因片段序列同该毒株完全一致,但两者编码的衣壳体间三联蛋白和解旋酶各有1~2个氨基酸的差异,表明我国分布的CyHV-2同H.Fukuda毒株高度相似,但存在一定的差异。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒 锦鲤疱疹病毒 流行病学 金鱼
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进口锦鲤暴发病病原的nested-PCR鉴定 被引量:59
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作者 刘荭 史秀杰 +1 位作者 高隆英 江育林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期414-418,共5页
为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (... 为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (KHV)的 2对引物KHV9/ 5F和KHV9/ 5R ,KHV1和KHV2 ,用嵌套式聚合酶链式反应 (nested -PCR)在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为 4 12bp的特异性的DNA片段。将该片段的nested -PCR扩增产物纯化后 ,克隆、测序。用NCBI -Blast软件将测序结果在Genebank中进行搜寻、比较 ,结果发现与注册号为AF4 1180 3的KHV基因序列的一部分片段有 99%的同源性。因此初步判断这次锦鲤暴发性疾病是由KHV引起的 。 展开更多
关键词 锦鲤 暴发病 病原 nested-PCR鉴定 嵌套式聚合酶链式反应
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四川地区一株锦鲤疱疹病毒的分离鉴定及系统进化分析 被引量:5
9
作者 陈俊杰 李媛瑗 +5 位作者 阳瑞雪 汪开毓 耿毅 黄小丽 陈德芳 欧阳萍 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期141-148,共8页
2015年5月,四川某鲤养殖场暴发一种传染性疾病,导致鲤大面积死亡,死亡率高达80%。为研究此次疾病病因和流行规律,将病料进行解剖、细菌学检查、病理组织观察、PCR鉴定、病毒分离和系统进化分析。结果显示,发病鱼眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出... 2015年5月,四川某鲤养殖场暴发一种传染性疾病,导致鲤大面积死亡,死亡率高达80%。为研究此次疾病病因和流行规律,将病料进行解剖、细菌学检查、病理组织观察、PCR鉴定、病毒分离和系统进化分析。结果显示,发病鱼眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑,病鱼鳃严重坏死,肾脏肿大。细菌检查为阴性。组织病理学观察,病变最明显的是鳃和肾脏。病鱼鳃丝血管扩张充血,鳃小片呼吸上皮细胞肿胀、脱落。鳃丝基部的上皮细胞大量增生,层次增多。肾小管上皮细胞组织结构紊乱,细胞肿胀,管腔变狭小,有崩裂和坏死现象。提取病鱼的肾脏和鳃组织DNA为模板,针对世界动物卫生组织(OIE)推荐的检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的Sph基因进行PCR检测,出现特异性扩增产物。将病鱼的肾脏和肝脏组织研磨过滤灭菌后,腹腔注射20尾健康鲤,实验组表现为急性死亡(累积死亡率为90%),出现与自然发病鱼相同的症状。将组织匀浆接种到普通鲤脑细胞系(CCB),盲传3代后可稳定地观察到典型的细胞病变。细胞培养物染色超薄切片电镜观察结果显示,病毒为有囊膜的球状,病毒粒子直径为180~200 nm。对分离株的TK基因全长序列进行系统发育分析,证实该毒株属于KHV亚洲1型毒株。本研究首次报道我国西南地区养殖鲤中KHV感染引起大面积死亡,为KHV起源进化、分类以及疾病诊断和防控提供重要依据。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒 鲤疱疹病毒III型(Cy HV-3) 分离鉴定 系统进化分析
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锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF81基因的克隆及生物信息学分析 被引量:14
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作者 周井祥 李新伟 +2 位作者 王好 吕文亮 朱霞 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1780-1786,共7页
为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF81蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF81基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF81基因的结... 为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF81蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF81基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF81基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的3株KHV构建系统进化树。结果显示,获得了长771 bp的ORF81基因,编码256个氨基酸;预测ORF81基因的理论分子量为28 246.50 u,等电点为8.404;疏水性大于亲水性;信号肽切割部位最可能位于29位的S(丝氨酸);有4个跨膜区;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,不存在N-糖基化位点、存在6个O-糖基化位点和11个磷酸化位点;系统进化树分析显示,与锦鲤疱疹病毒以色列株属同一分支。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 ORF81基因 克隆测序 生物信息学分析
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利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因 被引量:8
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作者 孟庆峰 张琼 +6 位作者 宋战昀 肖成蕊 刘阳 蔡阳 张艳 钱爱东 王伟利 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期316-318,330,共4页
为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合... 为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)多靶基因PCR检测方法,本实验将KHV接种鲤鱼鳍条细胞,收获病变细胞悬液,提取DNA,根据GenBank中登录的KHV基因序列及出入境检验检疫行业标准推荐的基因(ORF7),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和ORF7基因进行PCR检测。通过优化后的反应体系进行特异性、敏感性试验和样品检测。结果表明:3对引物能够分别特异性扩增出409bp、292bp和484bp片段;敏感性试验表明对TK基因检测的敏感性高于Sph和ORF7基因,其最低检测量为1.9×106copies/μL;采用优化的3个PCR方法对8个有临床症状的样品进行检测,其中3份样品的3个基因PCR扩增结果均为阳性。因此,本研究选取的3个基因均可用于KHV的检测及确证实验。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 PCR 检测
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锦鲤疱疹病毒潜伏感染实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:6
12
作者 陈俊杰 李媛媛 +4 位作者 阳瑞雪 古晶晶 汪开毓 耿毅 欧阳萍 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期310-314,共5页
为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立... 为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的鱼中得到的15份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;30份无任何临床症状鱼中的6份被检测为阳性,阳性率为20%。本试验中建立的水生动物疱疹病毒潜伏感染快速检测方法,可为潜伏感染KHV的临床检测提供一种快速、敏感和特异的检测手段,可为KHVD的分子流行病学调查和预防提供参考。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒(khv) 潜伏感染 实时荧光定量PCR(Real—TimePCR)
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锦鲤疱疹病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:14
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作者 范万红 刘荭 +3 位作者 岳志芹 吕建强 何俊强 江育林 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期785-788,722,共5页
研究建立并完善了Taqman实时荧光定量PCR检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法。首先通过选取KHV病毒TK基因的保守序列(GenBank AB182940),利用PRIMER EXPRESS 2.0设计引物和探针。其中Taqman探针的5’端标记FAM,3’端标记TAMRA。然后利用梯度... 研究建立并完善了Taqman实时荧光定量PCR检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法。首先通过选取KHV病毒TK基因的保守序列(GenBank AB182940),利用PRIMER EXPRESS 2.0设计引物和探针。其中Taqman探针的5’端标记FAM,3’端标记TAMRA。然后利用梯度稀释的阳性样品克隆质粒进行定量PCR反应,制作标准曲线,得到病毒拷贝数与Ct值的关系为:Ct=-3.45 lgX+42.73(相关系数R2=0.989)。通过试验检测得到实时荧光定量PCR对KHV的灵敏度为32个病毒核酸拷贝数,同时,设计的引物和探针对于鱼类细胞系和其它鱼类病毒没有扩增反应,表现出较好的特异性。实验结果表明,实时荧光定量PCR检测KHV的方法,具有特异性好、灵敏度高的特点,可以缩短检测时间,提高检测速度,非常适合口岸进出口检验检疫的要求。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 实时荧光定量PCR 检测
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锦鲤疱疹病毒环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:5
14
作者 陈俊杰 汪开毓 +6 位作者 周立新 王定国 曹成易 耿毅 尹立子 陈德芳 欧阳萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期390-393,共4页
为建立一种快速检测锦鲤疱疹病毒(CyHV-3)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据Gen Bank中登录的CyHV-3 Sphi基因编码区序列设计了LAMP特异性引物,经反应体系和反应条件优化,建立了检测CyHV-3的LAMP方法。结果表明,本研究建立的LAMP... 为建立一种快速检测锦鲤疱疹病毒(CyHV-3)的环介导等温扩增方法(LAMP),本研究根据Gen Bank中登录的CyHV-3 Sphi基因编码区序列设计了LAMP特异性引物,经反应体系和反应条件优化,建立了检测CyHV-3的LAMP方法。结果表明,本研究建立的LAMP检测方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鱼疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为13.9拷贝/μL,灵敏度高。使用LAMP方法和普通PCR方法对四川地区的15个检测点采用鱼鳃拭子非致死性采集的临床样品进行检测,阳性检出率均为31.40%(27/86)。表明本实验建立的该检测方法具有高灵敏度、高特异性、快速和简便的特性,适用于临床上对锦鲤疱疹病毒病的快速诊断。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 锦鲤疱疹病毒
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锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白ORF59的克隆、分析及其主要B细胞表位区的原核表达 被引量:11
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作者 柯浩 刘振兴 +2 位作者 林敏 孟轩 陈棠堂 《南方水产》 2010年第4期56-62,共7页
从感染锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的锦鲤(Cyprinus carpiokoi)肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHVORF59基因。该基因全长411bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3kDa,等电点(PI)6.91,有12个潜在的O糖基化位点。此研究克... 从感染锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的锦鲤(Cyprinus carpiokoi)肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHVORF59基因。该基因全长411bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3kDa,等电点(PI)6.91,有12个潜在的O糖基化位点。此研究克隆的KHVORF59基因第130位碱基由G突变为A,使其编码的第44位氨基酸由Ala突变为Thr。采用DNAStar程序,在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上,预测了KHVORF59蛋白主要B细胞表位,并将其区段的编码序列与KHVORF59完整编码序列分别克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,转入大肠杆菌Rosetta菌株,IPTG诱导表达。SDS-PAGE及WesternBlot分析显示,pET32a-ORF59S可以高效表达,表达的截短KHVORF59蛋白主要以可溶性形式存在,采用HisBindResin填料,层析纯化了该截短蛋白。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 囊膜蛋白 B细胞表位 原核表达
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锦鲤疱疹病毒双基因检测方法的研究 被引量:3
16
作者 孟庆峰 刘阳 +4 位作者 刘金华 宋战昀 吕文雪 王伟利 钱爱东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期53-55,67,共4页
为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)双基因检测方法,本研究根据KHV聚合酶基因(Sph)和胸苷激酶基因(TK)的保守序列设计2对引物,建立两基因同时检测的PCR方法。结果表明,利用双基因同时检测KHV,可以同时特异扩增出570 bp和155 bp片段,而与鲤春病毒... 为建立锦鲤疱疹病毒(KHV)双基因检测方法,本研究根据KHV聚合酶基因(Sph)和胸苷激酶基因(TK)的保守序列设计2对引物,建立两基因同时检测的PCR方法。结果表明,利用双基因同时检测KHV,可以同时特异扩增出570 bp和155 bp片段,而与鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒和鲤鱼疱疹病毒无扩增反应。而且所建立的双基因检测方法对临床样品的检测结果与单一PCR方法比较符合率为100%。为进一步研究KHV以及诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 TK基因 Sph基因 检测
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锦鲤疱疹病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用 被引量:4
17
作者 孟庆峰 吕文雪 +3 位作者 单晓枫 陈东升 王伟利 钱爱东 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期339-342,354,共5页
为建立快速有效的锦鲤疱疹病毒病检疫方法,根据锦鲤疱疹病毒(KHV)聚合酶基因(Sph)的保守序列设计1对引物和相应的TaqMan探针,建立了一种快速检测锦鲤疱疹病毒病荧光PCR方法。用建立的检测方法对细胞培养物进行检测,并与常规PCR对比,结... 为建立快速有效的锦鲤疱疹病毒病检疫方法,根据锦鲤疱疹病毒(KHV)聚合酶基因(Sph)的保守序列设计1对引物和相应的TaqMan探针,建立了一种快速检测锦鲤疱疹病毒病荧光PCR方法。用建立的检测方法对细胞培养物进行检测,并与常规PCR对比,结果荧光PCR灵敏度高于普通PCR,能检出的最低拷贝数为1.6×102/μL。应用该方法对样品进行检测,结果表明:所建立的荧光PCR检测方法4 h内可报告检测结果。该方法具有快速、灵敏、特异及重复性好等特点,适用于锦鲤疱疹病毒的快速检疫。 展开更多
关键词 锦鲤疱疹病毒 荧光定量PCR 检测
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锦鲤疱疹病毒病简述 被引量:5
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作者 段宏安 周毅 +5 位作者 徐晔 姚燕林 丁超 曹洁 范广宇 孟祥龙 《中国动物检疫》 CAS 2015年第6期48-52,共5页
锦鲤疱疹病毒病是一种危害严重,尚无有效治疗方法的高致病性传染病。本文汇集大量科研成果,从病原学、流行病学、病理学三个角度对该病毒的特性进行简述,在此基础上,推荐了实验室检测技术,提出了防控建议。
关键词 锦鲤疱疹病毒病 khv 病原学 流行病学 病理学 预防与控制 检测技术
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鲤疱疹病毒3型T分离株主要免疫原性蛋白的鉴定 被引量:1
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作者 郑树城 王庆 +4 位作者 李莹莹 王英英 曾伟伟 任燕 石存斌 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第2期68-72,共5页
为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus carpio ha... 为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)抗CyHV-3阳性血清进行Western blotting分析和液相色谱串联质谱鉴定。结果表明,透射电镜下可观察到大量完整囊膜包裹或只有裸露核衣壳的CyHV-3颗粒,Western blotting结果显示抗CyHV-3阳性血清与多种病毒蛋白具有明显特异性免疫反应,质谱鉴定表明其中4种免疫原性蛋白分别为ORF92、ORF66、ORF72和ORF81,其中ORF66和ORF72为首次鉴定的具有免疫原性衣壳蛋白。本研究将为CyHV-3血清学诊断方法的建立、亚单位疫苗或DNA疫苗的研制提供更多候选抗原。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒3型 锦鲤疱疹病毒 免疫原性 免疫蛋白质组学 衣壳蛋白
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淡水鱼病毒性疾病的研究进展 被引量:4
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作者 吕文雪 孟庆峰 +1 位作者 钱爱东 王伟利 《中国农学通报》 CSCD 2012年第8期77-81,共5页
为了更好地预防和治疗淡水鱼病毒病。综述了淡水鱼病毒病的研究情况。主要介绍了锦鲤疱疹病毒病、鲤春病毒血症、传染性胰腺坏死病毒病、传染性造血器官坏死症、病毒性出血性败血症等疾病的流行情况、国内外研究进展、病原学的研究、疾... 为了更好地预防和治疗淡水鱼病毒病。综述了淡水鱼病毒病的研究情况。主要介绍了锦鲤疱疹病毒病、鲤春病毒血症、传染性胰腺坏死病毒病、传染性造血器官坏死症、病毒性出血性败血症等疾病的流行情况、国内外研究进展、病原学的研究、疾病的诊断与防治、并对淡水鱼病毒病研究中存在的问题进行了分析和探讨。旨在为淡水鱼病毒病的深入研究提供理论基础和科学依据。 展开更多
关键词 淡水鱼 病毒病 锦鲤疱疹病毒 研究进展
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