雪菊化学成分分析、提取、鉴定及其生物活性研究进展

对目前国内外在雪菊(Coreopsis tinctoria)的有效化学成分分析、提取、鉴定及其生物活性等方面的研究进展进行综述,并提出一些建议,旨在为雪菊的深入研究和开发利用提供参考。

GC-MS对昆仑雪菊挥发油成分的研究

目的研究昆仑雪菊挥发油的化学成分,为其质量评价提供科学依据。方法用挥发油提取器提取昆仑雪菊中的挥发油。采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术并结合计算机检索分析挥发油成分。结果从昆仑雪菊挥发油中鉴定出了22种成分。用面积归一化法测定挥发油中各种成分的相对质量分数,占总峰面积的92.66%。主要成分为苧烯(63.23%)、3-蒈烯(7.05%)、β-对繖花烃(5.23%)等。22种化合物均为首次从昆仑雪菊的挥发油中得到。结论该实验系统分析了昆仑雪菊中挥发油的组成和相对含量,该法简便、快速、灵敏度高,为其进一步的开发利用提供了理论依据。

分光光度法测定新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量

目的建立一种简单、快速的方法,测定昆仑雪菊中总黄酮的含量,以期为昆仑雪菊质量控制和开发利用提供科学依据。方法以芦丁为标准品,采用分光光度法测定新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量。结果芦丁浓度与吸光度的线性关系方程为:A=0.011 09C+0.010 12(r=0.999 7),表明芦丁在21.340～59.752μg/ml范围内线性关系良好,测得雪菊中总黄酮的含量为12.28%。结论分光光度法简便、可靠、准确。可作为新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量测定方法。

电感耦合等离子体质谱法分析菊花茶中微量元素含量及其溶出特性

目的建立电感耦合等离子体质谱法（inductively coupled plasma-mass spectrometry,ICP-MS）同时测定菊花茶中16种微量元素含量的分析方法,并分析其溶出特性。方法以黄山贡菊、昆仑雪菊、杭白菊、胎菊4种市售菊花茶为原料,采用ICP-MS测定其中Mn、Cu、Zn、Ni、As等微量元素的含量,并按照传统的菊花茶饮用方法对不同浸泡时间及冲泡次数条件下黄山贡菊和昆仑雪菊的元素溶出特性进行研究。使用圆白菜标准参考物质（GBW10014）评价分析方法的准确度。结果 4种菊花茶中12种金属元素含量差异显著（P〈0.05）,其中K、Fe、Se、Cd、Hg含量差异较大;Pb、Cr、Cd、Hg、As重金属元素都未超标;随冲泡次数的增加,菊花茶中微量元素的溶出量与其呈负指数降低;延长浸泡时间有助于营养元素的溶出。实验表明相关系数r均大于0.9986,检出限为1.443E-05~7.325E-03μg/m L,误差率都在1%~10%之间,具有良好的精密度和准确度。结论本研究可为茶饮料的科学加工方法提供可靠的实验依据。

响应面优化超声辅助提取昆仑雪菊原花青素的工艺研究

以昆仑雪菊为原料,采用响应面法优化昆仑雪菊中原花青素超声波辅助提取条件。通过单因素试验和Box-Behnken Design试验研究超声功率、料液比、不同乙醇体积分数提取溶剂、盐酸用量4个变量对昆仑雪菊原花青素响应值的影响程度。结果表明,最优工艺参数为超声功率为35W、料液比为1∶20、乙醇体积分数60%vol、盐酸用量为3.5mL。昆仑雪菊原花青素平均提取率为1.76%,与理论预测值相比,其相对误差约为0.03%,且重复性很好,说明提取工艺稳定可靠。

昆仑雪菊黄酮提取物体外抗氧化活性试验

为了研究昆仑雪菊黄酮提取物(KFE)体外抗氧化活性,采用超声法提取昆仑雪菊中黄酮,乙醇浓度95%、温度40℃、时间15 min,提取3次。经过测定1 g昆仑雪菊粉末中含有0.125 g黄酮。分别用普鲁士蓝还原法、水杨酸法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法以及硫代巴比妥酸法测定不同浓度下KFE的还原能力,对羟自由基(·OH)、超氧阴离子(O^(2-))、DPPH自由基的清除能力以及对脂质过氧化的抑制率。结果表明,KFE还原能力随浓度上升而增强,但弱于维生素C;对羟自由基清除能力在110 g/mL最强,清除率为18.72%,高于维生素C;清除超氧阴离子的能力弱;DPPH自由基清除能力在302.5 g/mL最强,清除率为94.47%;脂质体系抗氧化能力在605 g/mL最强,抑制率为54.22%。结果表明,KFE具有一定的抗氧化活性。

昆仑雪菊通过NOS/NO途径改善高脂饮食诱导低氧环境大鼠海马组织的损伤

目的研究高脂饮食对低氧环境大鼠海马组织的影响及昆仑雪菊干预效果与机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为低氧对照(H)组、低氧高脂饮食(HH)组、昆仑雪菊干预低氧(XJH)组、昆仑雪菊干预低氧高脂饮食(XJHH)组。进行造模与昆仑雪菊提取液干预,实验周期为一周。光学显微镜观察海马病理变化,TBA比色法检测海马组织丙二醛含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶活力,硝酸还原酶法检测硝酸盐/亚硝酸盐(NOx)水平、荧光实时定量RT-PCR检测海马NOS mRNA水平。结果与H组比,HH组SOD升高(P<0.05),MDA降低(P<0.05),iNOS mRNA升高(P<0.05),XJH组NO、MDA均升高(P<0.05),eNOS mRNA水平降低(P<0.05),nNOS mRNA升高(P<0.05);与HH组比,XJHH组MDA升高(P<0.05),nNOS mRNA升高(P<0.05)。结论①低氧环境可对大鼠海马产生损伤,集中在CA1区,高脂饮食加重此反应,原因为高脂饮食上调iNOS mRNA表达。②昆仑雪菊可减轻高脂饮食诱导的低氧环境大鼠海马的病理损伤,机制可能与上调nNOS mRNA表达介导的保护作用有关。

反相高效液相色谱法测定昆仑雪菊中木犀草素的含量

目的：建立昆仑雪菊中木犀草素的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法测定，色谱柱：Waters XBridge C18（4．6 mm ×250 mm，5μm），流动相 A：乙腈；B：2％冰醋酸；C：水；梯度洗脱程序：0 min，A∶B （15∶85）；10 min，A∶B （20∶80）；15 min，A∶B（35∶65）；30 min，A∶B（15∶85），柱温35℃，检测波长350 nm，流速1．0 mL/min。结果木犀草素在0．1～1．0μg/mL浓度范围内线性关系良好（r ＝0．9999），平均回收率为94．90％，RSD为0．69％。结论该方法简便，结果准确，可以用于昆仑雪菊中木犀草素的含量测定。

超声-微波协同萃取法提取昆仑雪菊中总黄酮的研究

采用超声-微波协同萃取法,从新疆昆仑雪菊中提取黄酮并以芦丁为标准品,用分光光度法测定了其中总黄酮的含量。芦丁浓度与吸光度的线性关系方程为:A=0.01109C+0.01012(r=0.9997),表明芦丁在21.340～59.752μg/mL范围内线性关系良好,测得雪菊中总黄酮的含量为14.25%。该方法简便、可靠、准确,可作为该提取物的质量控制标准。

超声提取-高效液相色谱法测定新疆昆仑雪菊中绿原酸的含量

以新疆昆仑雪菊为研究对象,以绿原酸为考察指标,以甲醇浓度、超声功率、超声时间和料液比为考察单因素,应用L9（34）正交试验优化超声提取工艺,并用高效液相色谱法（HPLC）测定雪菊中绿原酸的含量。最佳提取工艺条件是：80%甲醇溶液,超声时间为60min,超声功率为300 W,料液比为1∶25,在此条件下绿原酸的提取量为9.9810mg/g。采用Agilent TC-C18色谱柱（150×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.5%冰乙酸溶液（40∶60,V/V）,流速为1.0mL/min,检测波长326nm。结果表明,绿原酸在0.01728-0.1210μg线性关系良好,平均加标回收率为108.16%,相对标准偏差（RSD）为1.10%（n=5）。

昆仑雪菊水提物对2型糖尿病小鼠血糖及胰岛素水平的影响

目的:探讨昆仑雪菊水提物对2型糖尿病小鼠的降糖作用。方法:将2型糖尿病小鼠50只,按随机数字表法分为吡格列酮组、阳性对照组,昆仑雪菊高、中、低剂量组,每组10只,另设正常对照组10只。正常对照组和阳性对照组每日以0.001 m L/kg灌服0.9%氯化钠溶液;昆仑雪菊高、中、低剂量组每日分别以0.4、0.2、0.1 g/kg浓度按0.01 m L/g体质量灌服昆仑雪菊水溶液;吡格列酮组按每日0.01 g/kg灌服吡格列酮水溶液,1次/d,连续35天。观察小鼠一般情况及餐前、餐后2小时血糖,血清胰岛素及胰岛素敏感指数。结果:昆仑雪菊可显著降低病鼠体质量及空腹血糖值,效果优于吡格列酮;而在降低2小时血糖和提高胰岛素敏感性方面与吡格列酮药效相当。结论:昆仑雪菊具有降低2型糖尿病小鼠血糖、胰岛素水平及改善小鼠胰岛素抵抗的作用。

昆仑雪菊挥发物GC-MS分析

比较了水蒸气蒸馏法和固相微萃取法对昆仑雪菊发挥性成分萃取能力和萃取物种类的区别。分别利用水蒸气蒸馏法(HD)和顶空―固相微萃取法(HS-SPME)对昆仑雪菊挥发物进行萃取富集,用气相色谱―质谱法分析测定。结果表明,两种方法共提取、鉴定出65种化合物,其中水蒸气蒸馏法鉴定出49个化合物,顶空固相微萃取方法鉴定出35个化合物;两种方法相同的化合物共19个,占水蒸气蒸馏法鉴定化合物的78%,占固相微萃取法鉴定化合物的91%。两种提取方法得到的挥发物组分有部分差异,因此同时采用两种方法能够更加全面、完整地对昆仑雪菊的挥发性组分进行分析。

昆仑雪菊中2个查尔酮化合物抗氧化活性构效关系

[目的]研究昆仑雪菊中2个查尔酮化合物的抗氧化活性的大小顺序,解释这2个化合物抗氧化活性产生差异的原因。[方法]采用密度泛函理论(DFT)方法在B3LYP/6-311++G(d,p)计算水平下对2个查尔酮化合物进行了电子结构、酚羟基氢键解离能、分子轨道能级差3个方面的数据分析。[结果]2个查尔酮化合物抗氧化活性的大小与分子结构中酚羟基数目及分子内氢键数目多少呈正相关,与酚羟基氢键解离能、分子轨道能级差呈负相关。[结论]理论模型预测结果与试验所测结果一致,解释了试验上2个化合物抗氧化活性大小差异的原因。

昆仑雪菊的红外光谱产地鉴别

利用红外光谱对新疆4个现有昆仑雪菊产区的雪菊花序进行分析研究。结果表明4个产地雪菊所含主体成分相近,其红外光谱在1735-1515 cm-1和1070 cm-1都有较强吸收峰,但不同样品在1735 cm-1,1636 cm-1和1517 cm-1附近峰形、峰强度存在一定差异,说明各产地雪菊所含油脂与黄酮类等成分相对含量不同。利用红外光谱分析鉴定不同产地昆仑雪菊药材,方法快速、简便,能够直接反映生长环境对雪菊化学成分的影响。

昆仑雪菊化学成分及功能活性研究进展

昆仑雪菊为药食两用的稀有高寒野生植物,含有多种有效活性成分,药理作用广泛,在清热解毒、活血化瘀、抗衰老及抗肿瘤等方面效果显著,具有独特的药用价值和广阔的开发应用前景。本文对昆仑雪菊的化学成分及功能活性进行了详细的综述,总结当下对昆仑雪菊的加工利用研究现状,以期为昆仑雪菊的深入研究和开发利用提供一定的参考。

昆仑雪菊活性成分的高效液相色谱测定方法改良及不同品系成分的测定

采用改良的高效液相色谱方法,以贡菊为对照,测定了不同品系昆仑雪菊中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及槲皮苷的含量。结果表明,较适宜的高效液相色谱条件为Alitima HP C18 5μm色谱柱(250mm×4.6 mm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1 m L·min-1,检测波长为350 nm,柱温40℃,进样量5μL。不同品系的昆仑雪菊与贡菊主要活性成分相似,但其含量差异显著。用该方法测得昆仑雪菊和贡菊中的绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸及槲皮苷的含量均高于药典规定的含量标准,其中昆仑雪菊中绿原酸、木犀草苷和槲皮苷的含量显著高于供试贡菊。

保健型袋泡山苦茶的工艺研究

以昆仑雪菊、山苦茶、麦冬、冰糖为原料研制保健型袋泡山苦茶。结果表明,昆仑雪菊添加量0.5 g,冰糖添加量2.5 g,麦冬添加量3.0 g,山苦茶添加量2.0 g时,产品感官品质最佳。用250 m L开水浸泡3 min时口感最佳,该茶是一种口感柔和、补肾益气、凝神助眠的营养复合保健茶。

昆仑雪菊黑米保健酒的研制

昆仑雪菊富含多种天然生物活性成分。以昆仑雪菊和黑米为主要原料研制昆仑雪菊黑米保健酒,产品营养丰富,保健效果显著。通过单因素实验和正交试验确定最佳工艺条件:雪菊提取液添加量20%、甜酒曲添加量1.0%、酿酒酵母添加量0.1%、发酵时间7 d。

基于网络药理学的昆仑雪菊总黄酮对食管癌细胞的抗瘤作用

目的探讨昆仑雪菊总黄酮对食管癌的抗瘤作用及可能的分子机制。方法用不同浓度的雪菊总黄酮提取物与Eca 109细胞共孵育后,光镜观察Eca 109细胞形态的变化,噻唑蓝(MTT)法检测雪菊总黄酮对Eca 109细胞的生长抑制作用;应用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)及在线《人类孟德尔遗传》(OMIM)数据库查找雪菊总黄酮成分、靶点及食管癌的相关靶点信息,Cytoscape3.2.6软件进行网络构建、分析及可视化工作,构建雪菊总黄酮-靶点-食管癌网络模型,通过DAVID网站进行关键靶点的日本京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果光镜及MTT结果显示,雪菊总黄酮明显抑制了Eca 109细胞的生长;通过TCMSP数据库找到总黄酮2个主要活性化合物的78个靶点;通过OMIM数据库找到食管癌相关靶点并进行扩展,取高于2倍平均节点度的靶点共141个;将化合物及食管癌靶点映射交集后找到表皮生长因子(EGFR)、Bcl-2、TP53、GSK3B等13个关键靶点,KEGG通路富集分析显示,雪菊总黄酮对食管癌的抗瘤作用可能与影响细胞分裂增殖、凋亡、血管生成等生物学过程有关。进一步通过Western blot进行细胞实验的验证结果表明,雪菊总黄酮明显下调了Bcl-2的表达,诱导了细胞的凋亡。结论雪菊总黄酮对食管癌的抗瘤作用是多靶点、多途径的,PI3K/Akt信号通路可能发挥关键作用。

响应面法优化新疆昆仑雪菊多糖提取工艺研究

本论文以多糖得率为指标,结合超声波辅助提取及响应面实验Box-Behnken设计的方法,探讨了液料比、超声时间、提取温度等参数对昆仑雪菊多糖得率的影响。研究结果表明:在液料比为60∶1(m L/g),超声时间为53min,提取温度为68℃的条件下提取两次,昆仑雪菊多糖得率最高可达9.85%,与理论预测值10.07%相比,其相对误差约为2.18%。