桑黄酮G通过调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制胃癌细胞的生长、迁移和侵袭

目的探讨桑黄酮G(KG)对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用和分子机制。方法通过CCK-8实验、细胞克隆形成实验、裸鼠背部成瘤和Ki-67免疫组织化学染色评估不同浓度KG对胃癌细胞增殖与生长的影响;应用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒、Western blotting分析凋亡相关蛋白表达和Tunel染色评估KG对胃癌细胞凋亡的影响;使用Transwell迁移和侵袭实验与Western blotting分析基质金属蛋白酶表达检测KG对胃癌细胞迁移和侵袭的作用;利用免疫印迹技术和rescue实验验证PI3K/AKT/mTOR通路在KG调控胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。结果KG以浓度依赖性抑制胃癌细胞的增殖和减少细胞形成克隆数(P<0.05);KG上调凋亡细胞比例,促进cleaved caspase-3、Bcl2-Bax表达并下调Bcl2水平(P<0.05);KG干扰胃癌细胞的迁移和侵袭,并且抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达(P<0.05)。机制验证显示,KG抑制PI3K/AKT/mTOR通路的激活,且PI3K/AKT/mTOR通路的激活剂IGF-1逆转了KG对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论KG至少部分是通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的激活影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

桑白皮中抗病毒活性成分桑酮G的含量测定

目的建立高效液相色谱法测定桑白皮中抗病毒活性成分桑酮G的含量。方法采用反相高效液相色谱法,Kromasil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-0.5%冰醋酸水（65∶35）,流速为1.0mL.min^-1,检测波长为280nm,柱温为38℃。结果桑酮G在0.025-0.5μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9998）,平均回收率为99.47%,RSD为1.85%（n=6）。结论本方法简便、准确,重现性好,适用于桑白皮中抗病毒活性成分桑酮G含量的测定。

桑黄酮G对缺血性中风大鼠血脑屏障的保护作用

目的探讨桑黄酮G(kuwanon G,KG)对缺血性中风大鼠脑水肿和血脑屏障(BBB)的影响。方法 2018年10月至2019年9月选取45只250~300 g SPF级雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组、缺血性中风模型组(模型组)和治疗组,利用单侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAo)模型,术前3 d假手术组、模型组给予无菌水灌服,治疗组给予KG灌服,术后连续灌服7 d,通过神经功能评分检测各组大鼠的脑损伤程度,利用检测大脑含水量评估各组大鼠脑水肿程度,利用蛋白质印迹法(western blotting)检测各组大鼠脑组织中胞质紧密粘连蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、紧密连接蛋白(claudin-5)和基质金属蛋白-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)蛋白的表达。结果与假手术组相比[6 h(0.30±0.48)、1 d(0.30±0.48)、3 d(0.30±0.48)、7 d(0.30±0.48),模型组(6 h(15.20±1.14)、1 d(14.60±1.17)、3 d(15.50±0.85)、7 d(15.60±1.08)]神经功能明显受损;治疗组[6 h(14.80±1.03)、1 d(13.20±1.03)、3 d(12.10±1.2)、7 d(9.40±1.27)]神经功能虽受损,但经桑黄酮G治疗后神经功能显著恢复,在第7天尤为显著(P<0.001)。与假手术组[1 d(73.83±0.91)%、2 d(73.89±0.82)%、3 d(73.89±0.82)%、7 d(74.97±0.38)%]相比,模型组[1 d(81.71±1.12)%、2 d(84.98±0.39)%、3 d(83.54±0.84)%、7 d(80.84±1.22)%]脑水肿明显,在术后2天脑水肿最严重;治疗组[1 d(76.85±2.41)%、2 d(77.81±1.69)%、3 d(76.87±1.97)%、7 d(76.55±1.27)%]脑水肿亦明显,但经治疗后脑水肿明显减轻(P<0.001)。相比假手术组ZO-1(0.52±0.15)、Occludin(0.52±0.15)、Claudin-5(0.89±0.06)、MMP-9(0.42±0.02),模型组ZO-1(0.21±0.05)、Occludin(0.38±0.07)、Claudin-5(0.41±0.07)蛋白的表达明显下降,MMP-9(0.86±0.14)显著上升;经桑黄酮G治疗后ZO-1(0.51±0.10)、Occludin(0.89±0.04)、Claudin-5(0.75±0.04)的表达明显上升,而MMP-9(0.28±0.06)的表达显著减少(P<0.001)。结论 KG通过调节MCAo大鼠紧密连接蛋白和基质金属蛋白的表达,保护BBB完整性,从而发挥神经保护作用。

桑白皮抗炎活性成分的分离及抗炎机制研究

目的:研究桑白皮中抗炎的活性物质并初步确定其抗炎机制。方法:利用硅胶柱层析等方法分离抗炎活性物质并利用波谱分析进行结构鉴定;以RAW264.7细胞为研究对象,构建LPS诱导体外炎症模型,利用ELISA法研究活性成分桑根酮-O和桑根酮-C对炎症细胞因子肿瘤坏死因子-a(TNF-a),白细胞介素-1b(IL-1B),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-10(IL-10)的作用;利用免疫蛋白印迹(Western blot)法研究了桑根酮-O和桑根酮-C对RAW264.7细胞i NOS、COX-2和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达的影响。结果:从桑白皮中分离获得2种抗炎活性物质,经波谱鉴定为桑根酮-O和桑根酮-C。体外抗炎结果表明:能够下调促炎症因子TNF-a、IL-1B、IL-6的合成,上调抑炎因子IL-10的合成,并抑制了RAW264.7细胞中i NOS、COX-2、p-ERK蛋白的表达。结论:桑根酮-G和桑根酮-O均具有一定的抗炎作用,其抗炎机制可能调节促炎因子合成,以及NF-κB和COX-2蛋白表达有关。

响应曲面法优化桑白皮中3个成分的提取工艺

目的:建立同时测定桑巴皮中桑酮G、桑酮H和桑辛素含量的高效液相色谱法,采用响应曲面法对该3个成分的提取工艺进行优化。方法:分别以桑酮G、桑酮H、桑辛素的提取含量作为响应值,以乙醇体积分数、提取温度、提取时间为主要考察因素,在单因素试验基础上采用中心组合设计试验,确定3个成分的最佳提取工艺。结果:同时提取桑白皮中桑酮G、桑酮H和桑辛素的最佳工艺为乙醇体积分数68%,提取温度74℃,提取时间110 min,液料比14∶1,该工艺桑酮G得率为7.09 mg·g^-1,桑酮H得率为1.74 mg·g^-1,桑辛素得率为1.69 mg·g^-1,与预测值相比,相对误差分别为0.30%、0.41%、0.42%。结论:采用响应曲面法优化得到同时提取桑白皮中桑酮G、桑酮H、桑辛素的工艺科学合理,可用于扩大生产。

HPLC双波长法同时测定桑白皮水提物中6个成分的含量

目的:建立HPLC双波长法同时测定桑白皮水提物中桑皮苷A、绿原酸、单宁酸、桑根酮D、桑酮G、桑根酮C等6个主要成分的含量。方法:色谱柱为Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈为流动相A,0.2%甲酸水溶液为流动相B,梯度洗脱;检测波长:270 nm(单宁酸、桑根酮D、桑酮G、桑根酮C)、320 nm(桑皮苷A、绿原酸);柱温:30℃;流速:1.0 mL·min^(-1);进样量:20μL。结果:桑皮苷A、绿原酸、单宁酸、桑根酮D、桑酮G、桑根酮C分别在3.24~647.20μg·mL^(-1)、3.22~643.60μg·mL^(-1)、2.50~588.80μg·mL^(-1)、3.28~656.80μg·mL^(-1)、3.19~637.20μg·mL^(-1)、3.10~619.60μg·mL^(-1)质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r>0.999);加样平均回收率分别为99.18%、99.06%、98.96%、98.76%、98.99%、98.90%(n=9),其RSD分别为0.45%、0.33%、0.59%、0.36%、0.47%、0.49%。结论:该方法的准确度、重复性、耐用性均良好,适合用于桑白皮水提物中桑皮苷A等6个主要成分的定量测定。

基于HPLC法评价不同产地桑白皮中桑酮G、桑酮H的含量

目的建立高效液相色谱法测定桑白皮中桑酮G、桑酮H的含量,对不同产地桑白皮含量进行分析.方法采用Agilent Eclipse XDB C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)为流动相.柱温30℃,检测波长265nm,进样体积10μl.结果桑酮G在浓度0.13-3.44μg,y=2×10^(6)x+4.315×103线性关系良好,R1=0.9999,桑酮H在浓度0.13-3.36μg,y=8.249×10^(5)x-6.281×10^(3)线性关系良好,R2=0.9999,桑酮G回收率在96.5%-98.0%、桑酮H回收率在95.7%-99.2%;重复性、稳定性、精密度RSD值均在2%以下.结论本方法操作简便、准确,可作为桑白皮中桑酮G、桑酮H含量测定的检测方法,含量结果显示不同产地桑白皮中桑酮G、桑酮H二者之和含量在2.13%-19.92%,表明不同产地差异较大.