期刊文献+
共找到16篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
Cloned s-Lap Gene Coding Area, Expression and Localization of s-Lap/GFP Fusion Protein in Mammal Cells
1
作者 SONGYi-shu SONGZhi-yu +4 位作者 LIHong-jun WuYin BAOYong-li TANDa-peng LIYu-xin 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2005年第3期298-300,共3页
s-Lap is a new gene sequence from pig retinal pigment epithelial(RPE) cells, which was found and cloned in the early period of apoptosis of RPE cells damaged with visible light. We cloned the coding area sequence of t... s-Lap is a new gene sequence from pig retinal pigment epithelial(RPE) cells, which was found and cloned in the early period of apoptosis of RPE cells damaged with visible light. We cloned the coding area sequence of the novel gene of s-Lap and constructed its recombinant eukaryotic plasmid pcDNA3.1-GFP/s-lap with the recombinant DNA technique. The expression and localization of s-lap/GFP fusion protein in CHO and B_~16 cell lines were studied with the instantaneously transfected pcDNA3.1-GFP/s-lap recombinant plasmid. ~s-Lap/GFP fusion protein can be expressed in CHO and B_~16 cells with a high rate expression in the nuclei. 展开更多
关键词 s-lap gene Fusion protein Mammal cell EXPRESSION LOCALIZATION
下载PDF
s-lap/GFP融合蛋白在Hela细胞中的表达与定位 被引量:1
2
作者 宋忆淑 宋志宇 +2 位作者 费向东 贺冰 李玉新 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-41,共3页
目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s-... 目的 :观察 s- lap/ GFP融合蛋白在 Hela细胞中的表达及定位。方法 :根据 s- lap基因的编码区序列 ,应用 PCR技术突变其 3′末端终止密码子 ,并通过基因重组技术将其与 GFP基因融合 ,构建 s- lap/ GFP重组质粒 ;采用脂质体转染法 ,将 s- lap/ GFP融合基因转入 Hela细胞中 ,用荧光显微镜观察其表达。结果 :s- lap/ GFP重组质粒序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜显示 ,在转染 GFP基因的 Hela细胞中 ,荧光呈网状均匀分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染 s- lap/ GFP融合基因的 Hela细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 :s- lap/ GFP融合蛋白可在人 Hela细胞中表达 ,并主要定位于细胞核。 展开更多
关键词 s-lap/GFP融合蛋白 重组融合蛋白质类/遗传学 基因融合/方法 HELA细胞
下载PDF
RPE细胞光损伤相关新基因s-lap编码区克隆及s-lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞中的表达与定位 被引量:1
3
作者 宋忆淑 李玉新 +2 位作者 费向东 鲍永利 谭大鹏 《眼科新进展》 CAS 2005年第1期11-13,共3页
目的 克隆新基因s lap编码区序列 ,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法 分析s lapcDNA序列 ,建立视网膜色素上皮 (retinalpigmentep ithelium ,RPE)细胞光损伤模型 ,RT PCR克隆其编码区序列 ,构建了带有绿色荧... 目的 克隆新基因s lap编码区序列 ,研究其编码的蛋白质在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。方法 分析s lapcDNA序列 ,建立视网膜色素上皮 (retinalpigmentep ithelium ,RPE)细胞光损伤模型 ,RT PCR克隆其编码区序列 ,构建了带有绿色荧光蛋白的目的基因真核表达重组质粒 pcDNA3 .1 GFP/s lap ,转染B16黑色素瘤细胞 ,观察s lap/GFP融合蛋白在B16黑色素瘤细胞内的表达与定位。结果 s lapcDNA序列含有编码10 1个氨基酸的开放读码框架 ,有 2个可能的N 糖基化位点 ,1个可能的caseinkinaseII磷酸化位点和 2个可能的PKC磷酸化位点 ;成功地克隆了s lap蛋白编码区序列 ,构建了其真核表达载体 ,荧光显微镜观察 ,在转染 pcDNA3 .1 GFP质粒的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光呈网状分布于细胞浆内 ,而细胞核内低表达 ;在转染s lap/GFP融合基因的B16黑色素瘤细胞中 ,荧光均匀分布于整个细胞 ,尤其以细胞核内高表达。结论 新基因s lap编码的蛋白质可在B16黑色素瘤细胞中获得表达 ,并以细胞核内高表达。 展开更多
关键词 s-lap基因 克隆 s-lap/GFP 融合蛋白 基因表达 基因定位
下载PDF
基于LAPS系统的蛋白芯片表面修饰技术的对比研究 被引量:1
4
作者 周爽 贾芸芳 +1 位作者 孙晓轩 邢克礼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期215-220,共6页
采用3-氨基丙基-三甲氧基硅烷((3-aminopropyl)trimethoxysilane,APTES)和戊二醛(glutaraldehyde,GA)、左旋多巴(L-DOPA)修饰芯片载体表面,对两种不同修饰方法制备的蛋白质芯片进行对比研究。以XPS检测表面活化剂的修饰效果;将AFP抗体... 采用3-氨基丙基-三甲氧基硅烷((3-aminopropyl)trimethoxysilane,APTES)和戊二醛(glutaraldehyde,GA)、左旋多巴(L-DOPA)修饰芯片载体表面,对两种不同修饰方法制备的蛋白质芯片进行对比研究。以XPS检测表面活化剂的修饰效果;将AFP抗体固定在修饰后的片基上,加入AFP溶液,以蛋白探针的反应性作为监测指标,通过LPAS系统检测反应产生的光电流。结果显示,左旋多巴修饰硅片对蛋白固定效果较好,有较高的反应活性,检测范围较宽,但幅值较小。 展开更多
关键词 lapS 蛋白芯片 表面修饰
下载PDF
家蚕iap基因在原核表达系统中的表达 被引量:4
5
作者 李西波 陈劲频 +1 位作者 吴岩 王文兵 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第5期47-49,53,共4页
为研究IAP蛋白抑制细胞凋亡的作用,用PCR法扩增出家蚕iap基因的cDNA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-iap,并转化感受态细胞BL21,使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导IAP蛋白的表达,应用SDS-PAGE和Western Blotting法分析目... 为研究IAP蛋白抑制细胞凋亡的作用,用PCR法扩增出家蚕iap基因的cDNA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-iap,并转化感受态细胞BL21,使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导IAP蛋白的表达,应用SDS-PAGE和Western Blotting法分析目的蛋白,得到一条分子量约为38.8 kDa的特异表达条带,与表达产物的理论值相符。为进一步研究BmIAP蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 IAP蛋白 凋亡 原核表达
下载PDF
序列特异的三锌指多肽的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
6
作者 张书祥 马清钧 赵志虎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期406-409,共4页
在获得单一锌指突变体的基础上 ,以小鼠转录因子Zif2 6 8的三锌指DNA结合区为模板 ,利用重叠 (Over lap)PCR技术 ,获得了关键氨基酸位点同时突变的三锌指突变体ZF12 3、2ZF12 3。ZF12 3、2ZF12 3分别克隆进pUC 18质粒 ,序列测定正确后 ,... 在获得单一锌指突变体的基础上 ,以小鼠转录因子Zif2 6 8的三锌指DNA结合区为模板 ,利用重叠 (Over lap)PCR技术 ,获得了关键氨基酸位点同时突变的三锌指突变体ZF12 3、2ZF12 3。ZF12 3、2ZF12 3分别克隆进pUC 18质粒 ,序列测定正确后 ,以pGEX 2T为表达质粒 ,在大肠杆菌JM10 9中实现了功能性的表达。经SDS PAGE分析 ,表达出了分子量 34 0kD的融合蛋白 ,扫描分析其含量在 2 0 %左右。菌体经超声波破碎后 ,对可溶性融合蛋白进行了纯化得到了游离的目的蛋白 ,为进一步的DNA结合特性分析、杂交转录因子的构建等奠定了基础。 展开更多
关键词 锌指蛋白 重桑PCR 表达 纯化 大肠杆菌
下载PDF
同时稳定抑制X连锁凋亡抑制蛋白和生存素表达对胰腺癌细胞上皮-间质转化及侵袭性的影响 被引量:2
7
作者 宰红艳 易小平 +2 位作者 李宜雄 江春 吕新生 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期883-888,共6页
目的:探讨同时抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(survivin)后,对胰腺癌Panc-1细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭性的影响,并初步探讨其机制。方法:在前期实验构建的胰腺癌Panc-1-XS细胞(XIAP和survivin同时稳定抑制)中,运用Transwell小... 目的:探讨同时抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(survivin)后,对胰腺癌Panc-1细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭性的影响,并初步探讨其机制。方法:在前期实验构建的胰腺癌Panc-1-XS细胞(XIAP和survivin同时稳定抑制)中,运用Transwell小室实验及划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力;半定量Western印迹分别检测钙黏蛋白-E(E-cadherin,上皮标志物)、锌指转录因子(Slug)蛋白(间质标志物)及第10号染色体同源丢失性磷酸酶——张力蛋白基因(PTEN)和磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)蛋白的表达情况。结果:Panc-1-XS细胞侵袭和迁移能力显著下降,同时伴随E-cadherin蛋白表达显著上调及Slug蛋白显著下调,即出现间质-上皮转化(MET);PTEN蛋白表达上调、P-Akt蛋白表达下调。结论:同时抑制XIAP和survivin表达,能部分逆转胰腺癌Panc-1细胞EMT表型,显著减弱其侵袭和迁移能力;此调控过程可能通过PTEN/PI3K/Akt途径实现。 展开更多
关键词 胰腺癌 凋亡抑制蛋白 上皮-间质转化 侵袭性 PTEN/PI3K/Akt
下载PDF
大仓鼠β_2肾上腺素受体基因的套叠PCR法多点突变研究 被引量:5
8
作者 王迪 黄园园 +2 位作者 杨曙明 于洪峡 杨啸枫 《生命科学研究》 CAS CSCD 2008年第1期45-49,共5页
对大仓鼠β2肾上腺素受体蛋白(β2 adrenergic receptor,β2AR)进行立体结构与疏水性分析.利用套叠PCR法对β2AR基因进行多点突变,将保守跨膜域疏水氨基酸突变为正电荷亲水氨基酸,成功构建分别带有7个与3个突变氨基酸的原核突变表达载体... 对大仓鼠β2肾上腺素受体蛋白(β2 adrenergic receptor,β2AR)进行立体结构与疏水性分析.利用套叠PCR法对β2AR基因进行多点突变,将保守跨膜域疏水氨基酸突变为正电荷亲水氨基酸,成功构建分别带有7个与3个突变氨基酸的原核突变表达载体.探讨了套叠PCR的反应条件,为β2AR基因在体外的高量表达提供基础. 展开更多
关键词 β2肾上腺素受体基因 G蛋白偶联受体 套叠PCR 突变
下载PDF
胰岛激活蛋白B聚体的各亚基克隆及表达的初步研究
9
作者 潘煦文 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第3期252-258,共7页
研究将百日咳杆菌用B-G培养基活化后再在改良的S-S培养基上液体培养,用CTAB-NaCl法提取百日咳杆菌的基因组DNA。经PCR扩增出胰岛激活蛋白B聚体的四个亚基基因,分别将其克隆于pGEX-6p-1载体上,并探讨了在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达IA... 研究将百日咳杆菌用B-G培养基活化后再在改良的S-S培养基上液体培养,用CTAB-NaCl法提取百日咳杆菌的基因组DNA。经PCR扩增出胰岛激活蛋白B聚体的四个亚基基因,分别将其克隆于pGEX-6p-1载体上,并探讨了在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达IAP B聚体各亚基的可能性。通过控制诱导表达温度,S2,S3均可以实现可溶表达,以GST亲和层析得到的S2终产物0.4 mg/L培养物,S3为0.6 mg/L培养物。S4表达虽是可溶性的,但由于融合蛋白的等电点近于7,多步纯化易损失。S5的表达量太低,有待进一步分析。 展开更多
关键词 可溶性表达 胰岛激活蛋白 B聚体 GST融合蛋白
下载PDF
截短型潜态相关肽对TGF-β诱导HSC-T6细胞增殖的影响
10
作者 于洋 曹雅男 +3 位作者 宋旭东 苏晓男 史嘉翊 吴丹 《牡丹江医学院学报》 2020年第4期7-9,22,共4页
目的原核表达并纯化重组截短型TGF-β潜态相关肽(latency associated peptide,LAP),观察其对转化生长因子TGF-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)诱导的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响。方法LAP各个片段... 目的原核表达并纯化重组截短型TGF-β潜态相关肽(latency associated peptide,LAP),观察其对转化生长因子TGF-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)诱导的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响。方法LAP各个片段重组蛋白小量培养经IPTG诱导表达,并通过Ni^2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE电泳检测。通过MTT法检测浓度分别为2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL LAP-B对TGF-β诱导的HSC-T6细胞增殖作用的影响。结果成功诱导表达可溶性截短型重组蛋白LAP-B,大量培养后经镍柱亲和纯化获得目的蛋白,经SDS-PAGE检测为LAP截短型重组蛋白。MTT检测LAP-B在2~64μg/mL浓度范围内能抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖,并随着LAP-B蛋白浓度增加HSC-T6细胞增殖抑制越显著。结论成功诱导表达及纯化截短型重组蛋白LAP-B,LAP-B抑制了TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖,为后续研究LAP的抗肝纤维作用提供实验基础。 展开更多
关键词 TGF-β潜态相关肽(lap) 原核表达 蛋白纯化 增殖
下载PDF
奶牛LAP基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的瞬时表达 被引量:1
11
作者 曹随忠 袁曦 +2 位作者 栾红雨 余树民 刘宗平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期521-524,共4页
根据GenBank上发表的牛舌抗菌肽(Lingual antimicrobial peptide,LAP)基因cDNA序列设计1对特异引物,从患乳腺炎的奶牛乳腺组织中以RT-PCR方法扩增LAP基因片段,将其克隆到pMD19-T Simple载体中测序。重组质粒经EcoRⅠ+BamHⅠ双酶切回收... 根据GenBank上发表的牛舌抗菌肽(Lingual antimicrobial peptide,LAP)基因cDNA序列设计1对特异引物,从患乳腺炎的奶牛乳腺组织中以RT-PCR方法扩增LAP基因片段,将其克隆到pMD19-T Simple载体中测序。重组质粒经EcoRⅠ+BamHⅠ双酶切回收目的基因片段,亚克隆入增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中构建重组融合表达质粒pEGFP-LAP,将其脂质体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察到融合表达的绿色荧光蛋白,采用RT-PCR检测到LAP基因在COS-7细胞中转录。pEGFP-LAP重组表达质粒的成功构建为进一步研究奶牛LAP基因的表达特性及利用基因工程技术防治奶牛乳腺炎奠定了基础。 展开更多
关键词 奶牛 Β-防御素 lap基因 绿色荧光蛋白 真核表达
原文传递
凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的作用 被引量:7
12
作者 杜冀晖 张厚德 +4 位作者 雷萍 苏卓娃 麦丽文 郑芳 龚非力 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期794-798,共5页
目的探讨X-相关凋亡抑制蛋白(XIAP)和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用,以及转染胞浆表达型Smac基因靶向下调XIAP对化疗药物诱导的胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及... 目的探讨X-相关凋亡抑制蛋白(XIAP)和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用,以及转染胞浆表达型Smac基因靶向下调XIAP对化疗药物诱导的胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及胞浆染色分析细胞XIAP表达变化,Western blot分析XIAP、Smac、Caspase-3表达水平;构建pEGFP-N1/Smac真核表达载体并转染胰腺癌Panc-1细胞,流式细胞术检测转染Smac基因前后Panc-1细胞的凋亡敏感性。结果与BXPC-3细胞相比,Panc-1对顺铂或5-FU介导的凋亡具有较强抵抗性,Western blot分析显示Panc-1细胞高表达XIAP,在化疗药物作用下化疗敏感细胞BXPC-3胞浆内XIAP水平下降明显多于Panc-1细胞,而且凋亡的BXPC-3细胞释放入胞浆内的成熟Smac蛋白水平明显高于Panc-1细胞。转染胞浆表达型Smac基因至化疗抵抗Panc-1细胞,可明显下调其XIAP表达水平,促进效应Caspase-3分子活化,显著提高顺铂、5-FU诱导的细胞凋亡率。结论胰腺癌细胞XIAP的表达水平下调与其化疗敏感性有关,XIAP是克服化疗抵抗的重要靶分子,而上调Smac活性蛋白的胞浆表达作为一种有效调节信号,通过拮抗XIAP的凋亡抑制作用协同化疗药物促进胰腺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 X-相关凋亡抑制蛋白 Smac/DIABIO 胰腺癌 细胞凋亡
原文传递
凋亡抑制蛋白抑制剂的设计、合成及体外活性初步评价 被引量:2
13
作者 顾为 谭祖磊 +4 位作者 李斐 汤立合 陶林 苏瑞斌 聂爱华 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期1-10,共10页
目的设计并合成凋亡抑制蛋白(IAPs)小分子抑制剂。方法基于对Smac和Caspase-9分别与XIAP-BIR3结合位点的分析,辅以分子对接实验,设计并合成两类结构的化合物;采用荧光极化各向异性(FPA)竞争试验法测定合成的目标化合物对XIAP和cIAP1的... 目的设计并合成凋亡抑制蛋白(IAPs)小分子抑制剂。方法基于对Smac和Caspase-9分别与XIAP-BIR3结合位点的分析,辅以分子对接实验,设计并合成两类结构的化合物;采用荧光极化各向异性(FPA)竞争试验法测定合成的目标化合物对XIAP和cIAP1的抑制活性。结果合成两类结构共16个新类肽化合物,其结构经MS和1H-NMR谱确证;荧光极化各向异性(FPA)竞争试验结果显示,噻唑烷环衍生物Ⅱ对XIAP-BIR3和cIAP1-BIR3具有显著的抑制活性,其中,化合物Ⅱf抑制XIAP-BIR3和cIAP-BIR3的IC50值分别为0.29、0.055μmo.lL-1。结论发现了新的IAPs抑制剂,并得出初步构效关系,为进一步的结构优化奠定了基础。 展开更多
关键词 凋亡抑制蛋白 抑制剂 荧光极化各向异性(FPA)竞争试验法 设计 合成
原文传递
人IL35-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO/DG44细胞中的稳定表达 被引量:2
14
作者 唐静 高闻达 +4 位作者 张青 张大为 陈洋 何波 刘全胜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期109-115,共7页
本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4(Fc)融合基因真核表达载体,稳定转染CHO/DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应(PCR)从脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的人髓性白血病细胞株KG-IcDNA文库中克隆EBI3和IL-12... 本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4(Fc)融合基因真核表达载体,稳定转染CHO/DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应(PCR)从脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的人髓性白血病细胞株KG-IcDNA文库中克隆EBI3和IL-12p35cDNA,重叠PCR法连接2个片段,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVECTM-TOPO载体上,对新构建的IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO真核表达载体并进行酶切、测序、PCR鉴定;脂质体法转染CHO/DG44细胞;RT-PCR检测转染结果,采用a-MEM-培养基筛选实验组细胞,对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)的加压筛选,ProteinG-Agarose纯化阳性克隆培养上清,免疫印迹检测目的蛋白表达。结果显示IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO表达载体稳定转染CHO/DG44细胞并获得阳性克隆;SDS-PAGE电泳得到一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG4抗体特异结合。本实验获得了能够稳定表达具有稳定结构的IL35-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞株。 展开更多
关键词 IL-35-IgG4(Fc)融合蛋白 重叠PCR 稳定转染 CHO/DG44细胞 MTX诱导的基因扩增
原文传递
水稻线粒体延伸因子OsEF-Tu基因的克隆及表达
15
作者 喻博伦 程钢 +4 位作者 王春台 刘学群 刘海青 杨梦醒 谭艳平 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期213-218,共6页
[目的]克隆水稻线粒体基因Os EF-Tu并进行表达。[方法]RT-PCR分别扩增Os EF-Tu基因c DNA的5’端和3’端序列,重叠PCR克隆Os EF-Tu的c DNA序列。生物信息学分析Os EF-Tu基因,构建水稻线粒体基因Os EF-Tu原核表达载体并转化BL21(DE3),IPT... [目的]克隆水稻线粒体基因Os EF-Tu并进行表达。[方法]RT-PCR分别扩增Os EF-Tu基因c DNA的5’端和3’端序列,重叠PCR克隆Os EF-Tu的c DNA序列。生物信息学分析Os EF-Tu基因,构建水稻线粒体基因Os EF-Tu原核表达载体并转化BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白。[结果]Os EF-Tu蛋白与多个高等植物线粒体延长因子EF-Tu蛋白具有同源性,p GEX-4T1-Os EF-Tu重组子构建成功并表达出带有GST标签的Os EF-Tu融合蛋白。[结论]水稻Os EF-Tu在高等植物中较为保守,原核表达Os EF-Tu融合蛋白在28℃诱导条件下包涵体中表达量高。 展开更多
关键词 水稻 线粒体蛋白 OsEF-Tu 原核表达 重叠PCR
原文传递
TGF-β潜态相关肽编码序列的原核表达载体构建及表达产物的纯化与鉴定
16
作者 于洋 史嘉翊 +6 位作者 柏合 仲崇琦 宋旭东 陈培剑 黄珍 曹雅男 吴丹 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期2164-2170,共7页
转化生长因子β(TGF-β)是促肝纤维的细胞因子,TGF-β潜态相关肽(LAP)和TGF-β的活化有关。本研究提取人血液中总RNA,逆转录转为c DNA,以此为模板PCR目的片段,构建原核表达载体pET28a-LAP-B、pET28a-LAP-F,并在不同诱导温度、IPTG浓度... 转化生长因子β(TGF-β)是促肝纤维的细胞因子,TGF-β潜态相关肽(LAP)和TGF-β的活化有关。本研究提取人血液中总RNA,逆转录转为c DNA,以此为模板PCR目的片段,构建原核表达载体pET28a-LAP-B、pET28a-LAP-F,并在不同诱导温度、IPTG浓度、诱导时机下进行诱导表达,筛选最佳诱导条件,通过镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,获得的蛋白通过SDS-PAGE及Western blot鉴定,并检测重组蛋白的浓度。结果表明,LAP全长及截短型原核表达载体构建成功,筛选最佳诱导条件为37℃培养4 h,OD_(600)值为0.8时降温至16℃,加入0.3 mmol/L(LAP-B)/0.45 mmol/L(LAP-F)IPTG诱导16 h,大量培养后通过镍柱纯化和透析得到重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot鉴定为LAP全长及截短型重组蛋白,并测得LAP-B、LAP-F重组蛋白浓度分别为637.6μg/mL、126.6μg/m L。本实验成功得到LAP全长及截短型重组蛋白,为研究LAP对TGF-β促纤维化作用的影响提供了实验基础。 展开更多
关键词 TGF-β潜态相关肽(lap) 蛋白表达 纯化 纤维化 载体构建
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部