pM CLacⅠ/Neo质粒的构建和基因突变研究的新策略

目的：构建一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机制的质粒载体。方法和结果：设计并构建一种具两个ｌａｃⅠ突变靶基因的突变研究载体：ｐ Ｍ Ｃ ＬａｃⅠ／ Ｎｅｏ 质粒。在该质粒中，一个ｌａｃⅠ靶基因受 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子的驱动而使其在人和哺乳动物细胞内能表达，而另一个ｌａｃⅠ靶基因则不能表达。将所获得的ｐ Ｍ Ｃ ＬａｃⅠ／ Ｎｅｏ 质粒经酶切鉴定后，再进行如下功能鉴定：一是分析两个ｌａｃⅠ靶基因在大肠杆菌细胞内的功能状态，结果显示这两个ｌａｃⅠ基因在 Ｄ Ｈ５α宿主菌内功能正常；二是将其导入 Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３ 细胞内，分析两个靶基因是否能模拟哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态。结果表明其中一个ｌａｃⅠ靶基因在 Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３ 细胞中处于转录表达状态。结论：本研究构建了一种新型的突变研究载体，位于该载体上的两个ｌａｃⅠ靶基因能模拟人和哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态。

lacⅠ 靶基因突变子的一种正向选择系统的建立

目的：建立一种能正向选择ｌａｃⅠ靶基因突变子的选择系统。方法：比较了分别携带有ｌａｃⅠ－ ／ｌａｃＺα型质粒和ｌａｃⅠ＋ ／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌在ＬＢ完全培养基、以葡萄糖为碳源的Ｍ９ 基本培养基和以乳糖为碳源的Ｍ９／Ｌ基本培养基内的生长情况。结果：组成型ＤＨ１０Ｂ菌在Ｍ９／Ｌ固体培养基中只需培养２３ ｈ 便可观察到生长，而诱导型ＤＨ１０Ｂ菌则需培养８８ ｈ 才可观察到生长，但在ＬＢ和Ｍ９ 培养基内两者的生长速度却相同；当将少量的组成型ＤＨ１０Ｂ菌与大量的诱导型ＤＨ１０Ｂ菌混合接种于Ｍ９／Ｌ固体培养基上培养时， Ｍ９／Ｌ固体培养基能从约２．７×１０６ 的ｌａｃⅠ＋ 型ＤＨ１０Ｂ菌中将少量的ｌａｃⅠ－ 型ＤＨ１０Ｂ菌筛选出来。结论：本研究建立了一种在特定时间内只选择生长携带有ｌａｃⅠ－ ／ｌａｃＺα型质粒的ＤＨ１０Ｂ菌落。

基于pSPORT1质粒的转基因小鼠家系的建立

目的：建立在基因组中整合有ｐＳＰＯＲＴ１质粒的转基因小鼠家系，为体内基因突变研究提供有效的动物模型。