原位定量评价组织工程研究中细胞生长状态的新方法

目的探讨一种能原位定量评定细胞在高分子聚合物载体上生长情况的方法。方法采用CFDA-AM和PI双染结合激光扫描共聚焦显微镜技术,用平均荧光强度代表细胞数量,对组织工程骺软骨中骨骺软骨细胞在聚乳酸载体上1、2及3周时的死活细胞数量进行评价。结果骨骺软骨细胞在聚乳酸载体上的530nm的平均荧光强度随时间逐渐增加,而603nm的荧光强度在第2周时有所增加,而到第3周时则无明显增加。与细胞在载体上重量增加的结果一致。结论首次采用的原位定量检测载体上死活细胞的方法是可行的,解决了在不透明载体上即不影响细胞和载体结构,而可以原位快速定量评定细胞生长的难题。

脉冲磁场处理对格氏李斯特菌钙离子跨膜行为的影响

研究了脉冲磁场处理后格氏李斯特菌细胞Ca^(2+)的跨膜行为,包括对该探针进行荧光光谱特性以及细胞负载研究,建立了格氏李斯特菌胞内钙离子荧光强度测定方法,同时采用激光共聚焦荧光显微镜检测不同脉冲数下受脉冲磁场处理的后格氏李斯特菌胞内钙离子荧光强度和浓度的变化。研究结果表明,Fluo-4/AM荧光探针自身的荧光强度较小,能成功负载于格氏李斯特菌中,可用于格氏李斯特菌胞内游离Ca^(2+)浓度的测定,且最优负载条件是负载浓度6μmol/L,负载时间60 min,负载温度37℃。经不同脉冲数的脉冲磁场处理后,格氏李斯特菌胞内Ca^(2+)浓度与菌落总数的变化呈较高的负相关性;LCSM观察发现,在一定脉冲数范围,胞内Ca^(2+)荧光强度随脉冲数的增加而增加,这说明脉冲磁场作用造成细胞生物膜通透性改变,使胞外大量Ca^(2+)跨膜进入胞内。由此推测,由脉冲磁场造成的细胞生物膜通透性的变化,导致胞内Ca^(2+)浓度的升高,这是脉冲磁场具有杀菌作用的重要原因。