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LDH增强dsRNA对稻瘟病抑制效果的研究
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作者 陈盼 夏胜格 +3 位作者 兰莹 周彤 梁友 赵弘巍 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1070-1076,共7页
[目的]本文旨在研究层状复合氢氧化物(LDH)对dsRNA抑制稻瘟病的增强效果。[方法]比较层状复合氢氧化物(LDH)与不同比例dsRNA混合的负载效率,筛选合适的负载比。用不同浓度LDH处理稻瘟病菌孢子,考察LDH对稻瘟病菌孢子发育的影响。使用不... [目的]本文旨在研究层状复合氢氧化物(LDH)对dsRNA抑制稻瘟病的增强效果。[方法]比较层状复合氢氧化物(LDH)与不同比例dsRNA混合的负载效率,筛选合适的负载比。用不同浓度LDH处理稻瘟病菌孢子,考察LDH对稻瘟病菌孢子发育的影响。使用不同浓度的dsRNA-LDH处理稻瘟病菌孢子,检测dsRNA-LDH对稻瘟病菌孢子附着胞形成的抑制作用。使用稻瘟病菌侵染水稻,考察LDH增强dsRNA防治稻瘟病的效果。[结果]在100 ng·μL^(-1)浓度条件下LDH不仅不影响稻瘟病菌孢子发育,而且还可以增强dsRNA稳定性及其对稻瘟病菌孢子附着胞形成的抑制作用。与清水处理孢子的对照组相比,dsRNA-LDH处理组的水稻发病症状明显减弱。[结论]LDH可以明显增强dsRNA对稻瘟病的防治效果。dsRNA-LDH具有开发成为高效绿色环保RNAi药剂的潜力和价值。 展开更多
关键词 稻瘟病 层状复合氢氧化物 喷雾诱导的基因沉默 RNAi药剂
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黑爪异鲵LDH同工酶谱系的研究 被引量:12
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作者 徐晋麟 马学海 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1996年第2期182-188,共7页
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对黑爪异鲵12种组织的LDH同工酶谱系进行了研究,酶谱呈5带型,但在雄性肝中出现了LDH-C带,在精巢中未发现,相对迁移率为B>A>C。 经比较分析,其ldh-C基因表达的组织特异性和性别特异性... 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对黑爪异鲵12种组织的LDH同工酶谱系进行了研究,酶谱呈5带型,但在雄性肝中出现了LDH-C带,在精巢中未发现,相对迁移率为B>A>C。 经比较分析,其ldh-C基因表达的组织特异性和性别特异性不仅证实黑爪异鲵是小鲵科中一个较原始的类群,且表明ldh-C基因这种表达调控方式在进化中为鱼类与鸟类。哺乳类之间的一种过渡类型。 展开更多
关键词 黑爪异鲵 两栖纲 小鲵科 乳酸脱氢酶 同功酶
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两种泥鳅不同核质关系下LDH同工酶基因表达的研究 被引量:4
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作者 赵振山 吴清江 +3 位作者 熊传喜 和法德 高贵琴 罗宇良 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期167-173,共7页
采用聚丙烯酰胺不连续系统凝胶电泳方法分析了泥鳅和大鳞副泥鳅不同杂交组合不同核质关系下胚胎发育阶段(0-145h)中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的分化表达谱式,LDH同工酶的基因表达随细胞质、细胞核不同及胚胎发育各个时期... 采用聚丙烯酰胺不连续系统凝胶电泳方法分析了泥鳅和大鳞副泥鳅不同杂交组合不同核质关系下胚胎发育阶段(0-145h)中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的分化表达谱式,LDH同工酶的基因表达随细胞质、细胞核不同及胚胎发育各个时期具有不同的个体发育谱式。以泥鳅卵子为细胞质的Ⅰ、Ⅱ两组,杂交组(Ⅱ)LDH同工酶基因在受精后3min至原肠中期雄核基因参与表达与调控,部分基因位点比本交组(Ⅰ)启动与表达的时间要早,两组的管家酶主要来自细胞质。以大鳞副泥鳅为细胞质的Ⅲ、Ⅳ两组,各酶均以细胞质调控为主,其管家酶与泥鳅有很大不同。并具体分析和讨论了不同核质关系下LDH同工酶基因的表达和调控的时空顺序。 展开更多
关键词 泥鳅 大鳞副泥鳅 不同核质关系 ldh同工酶 基因表达
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应用体外重组PCR技术构建Ppdc-ldh融合基因 被引量:2
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作者 高年发 王勇 +2 位作者 高强 张健 张淼 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第6期28-31,共4页
利用重组PCR技术连接分别从干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)ATCC334中扩增的乳酸脱氢酶基因(ldh)和运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)CP4中扩增的丙酮酸脱羧酶基因启动子(Ppdc)片段,构建了Ppdc-ldh融合基因。并将其克隆到pMD19-T载体... 利用重组PCR技术连接分别从干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)ATCC334中扩增的乳酸脱氢酶基因(ldh)和运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)CP4中扩增的丙酮酸脱羧酶基因启动子(Ppdc)片段,构建了Ppdc-ldh融合基因。并将其克隆到pMD19-T载体上,再转化到大肠杆菌DH5α中,得到阳性克隆质粒pT-Ppdc-ldh。序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框,具有起始密码子GTG和终止密码子TAA,启动子的-35区和-10区序列与起始密码子之间的距离没有改变,可以插入到原核表达载体中进行表达。 展开更多
关键词 重组PCR Ppdc-ldh融合基因 干酪乳杆菌 运动发酵单胞菌
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谷氨酸棒杆菌ldh基因的敲除 被引量:2
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作者 伍展红 郑穗平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期107-111,共5页
谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态... 谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC 13032感受态细胞。分别在卡那霉素抗性平板及10%蔗糖平板上进行两次筛选,利用PCR方法鉴定,成功获得ldh基因缺失的谷氨酸棒杆菌突变株ATCC 13032-Δldh。应用荧光定量PCR检测,ATCC 13032-Δldh中的ldh基因在转录水平与野生型菌株ATCC 13032相比,相对表达量为0。ldh基因的敲除对菌株的生长造成了一定的影响。 展开更多
关键词 ldh基因 基因敲除 谷氨酸棒杆菌 荧光定量PCR
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内蒙古白绒山羊LDH-A基因cDNA的克隆与特性分析 被引量:1
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作者 王志钢 其布日 +1 位作者 包婵婵 旭日干 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期2813-2819,共7页
【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了... 【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了内蒙古白绒山羊LDH-A基因全长cDNA序列。该基因cDNA全长1 649 bp,包含一个996 bp的ORF和642 bp的3′UTR。SMART分析表明ORF编码的蛋白质具有Ldh_1_N domain和Ldh_1_C domain,Psite分析表明有L-乳酸脱氢酶活性位点,PSORT程序分析将其定位于细胞质中。LDH-A基因在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。【结论】内蒙古白绒山羊LDH-A基因编码的蛋白具有典型的乳酸脱氢酶结构,cDNA核苷酸序列与牛的LDH-A基因(NM_174099.2)具有较高的同源性。在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。 展开更多
关键词 内蒙古白绒山羊 ldh-A 基因克隆 表达模式分析
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Mg2Al-Cl-LDH载体转染细胞的研究
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作者 刘莉 林嘉鹏 +3 位作者 吴阳升 汪立芹 田永芝 黄俊成 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1102-1106,共5页
为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达... 为探讨Mg2Al-Cl-LDH颗粒作为基因转染载体的可能性以及最优的转染体系和转染时间,为后续的基因治疗、创面修复、转基因技术等试验打下基础,自制Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒,与增强型荧光蛋白质基因eGFP结合后,转染入细胞,观察转染后细胞表达的绿色荧光蛋白质,计算转染率。结果表明Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒直径在100 nm左右,结构为六边形。200μg/ml的纳米颗粒浓度下细胞活性为87%,达到500μg/ml时细胞活性快速降至44%;DNA与LDH的质量比为4/50时转染率达到11.17%,质量比为10/50时,转染效率为3.93%;DNA与LDH作用时间在15 min时转染率为6.93%,30 min时反而下降至4.8%;转染细胞培养24 h时转染率达到17.4%,72 h后下降至3.7%。纳米颗粒的分子较小,比较容易被细胞膜胞吞,并且Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒能有效地与eGFP质粒相结合;在DNA与LDH质量比4/50的情况下,结合能力最高;最佳结合时间为15 min;转染时间在48 h时效果最好。HEK 293T细胞对Mg2Al-Cl-LDH纳米颗粒的最优耐受浓度为200μg/ml;同样条件下C2C12细胞的转染效率比HEK 293T细胞的转染效率高。 展开更多
关键词 Mg2Al-Cl-ldh纳米颗粒 基因转染 载体
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多房棘球蚴LDH基因的克隆表达及免疫原性研究 被引量:1
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作者 何顺伟 李洪清 +2 位作者 李晓燕 赵瑞雪 魏晓星 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期967-971,共5页
目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中,构... 目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中,构建重组表达质粒pET15b-EmLDH,转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测重组蛋白的表达形式,Ni-IDA树脂亲和层析纯化重组蛋白。通过Western blotting法鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,ELISA法检测泡型包虫病患者(57例)、囊型包虫病患者(33例)和正常人(50例)血清,初步评价EmLDH重组蛋白的免疫诊断效果。结果成功克隆了EmLDH基因并表达纯化出相应的重组蛋白。Western blotting结果显示,EmLDH重组蛋白可被泡型和囊型包虫病患者血清识别,而不被正常人血清识别。ELISA结果显示,EmLDH重组蛋白对泡型和囊型包虫病患者血清的诊断敏感性分别为84.21%和84.85%。结论 EmLDH重组蛋白具有较高的免疫原性,对包虫病具有较好的免疫诊断价值。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 ldh基因 克隆 表达 免疫原性
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pCR3.1-bvLDH-C′_4的构建及在体内外的表达
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作者 常建军 杨颖 彭景楩 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期28-33,共6页
精子特异性乳酸脱氢酶 (LDH C4)在精子的运动和存活等生理活动中起着重要的作用。研究表明 ,LDH C4接种鼠、兔等能够降低动物的生育率。通过RT PCR方法从布氏田鼠睾丸总RNA中克隆出编码抗原决定簇的LDH C4基因片断 ;采用T A克隆的方法... 精子特异性乳酸脱氢酶 (LDH C4)在精子的运动和存活等生理活动中起着重要的作用。研究表明 ,LDH C4接种鼠、兔等能够降低动物的生育率。通过RT PCR方法从布氏田鼠睾丸总RNA中克隆出编码抗原决定簇的LDH C4基因片断 ;采用T A克隆的方法将其插入到pCR3 1载体中构建重组载体pCR3 1 bvLDH C′4,测序结果表明克隆的基因片断与已知小鼠相应片断有 83 %的序列同源。通过质脂体法转染HeLa细胞 ,RT PCR证实其可在mRNA水平有效表达 ;通过肌肉接种BALB c小鼠 ,RT 展开更多
关键词 ldh-C4 布氏田鼠 基因疫苗 质脂体转染法 精子特异性乳酸脱氢酶 基因表达 pCR3.1-bvldh-C4′
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猪肺炎支原体乳酸脱氢酶基因的克隆、表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立 被引量:5
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作者 姚睿玉 何启盖 +1 位作者 周锐 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期511-515,531,共6页
根据GenBank中的猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(LDH)基因序列设计1对引物,PCR扩增LDH基因,首先将扩增片段连接到克隆载体pMD18-T上,然后连接到表达载体pGEX-KG上,经测序正确后诱导表达。重组质粒在大肠杆菌中表达的目的蛋白以可溶性蛋白和包涵... 根据GenBank中的猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(LDH)基因序列设计1对引物,PCR扩增LDH基因,首先将扩增片段连接到克隆载体pMD18-T上,然后连接到表达载体pGEX-KG上,经测序正确后诱导表达。重组质粒在大肠杆菌中表达的目的蛋白以可溶性蛋白和包涵体2种形式存在。将超声波破碎的诱导菌液高速离心,其上清用Glutathione Sepharose 4B bead亲和层析纯化。用猪肺炎支原体的标准阳性血清对纯化蛋白作Western-blot检测,出现目的条带;以纯化蛋白为抗原建立了检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA方法,该方法具有较好的稳定性和重复性,较高的特异性与敏感性。用建立的ELISA方法与中国兽医药品监察所研制的IHA试剂盒同时检测120份临床血清,二者总符合率为92.5%。用建立的ELISA方法检测了671份临床送检不同年龄阶段的猪血清,结果显示断奶前仔猪猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopnenmoniae,MHP)感染率为44.3%,保育猪为3.0%,育肥猪为17.44%,种猪为73.41%,这初步反映了猪喘气病在各个年龄阶段的感染率。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 乳酸脱氢酶基因 抗体检测ELISA 诊断
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高原鼠兔脑组织中精子特异性乳酸脱氢酶的作用 被引量:3
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作者 许利娜 魏莲 +3 位作者 汪洋 李筱 魏琳娜 魏登邦 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期431-437,共7页
高原鼠兔对高原低氧环境有很强的适应性。研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)基因在高原鼠兔脑组织中表达,为阐明LDH-C4在高原鼠兔脑组织中的作用,应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定了Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中的表达水平... 高原鼠兔对高原低氧环境有很强的适应性。研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)基因在高原鼠兔脑组织中表达,为阐明LDH-C4在高原鼠兔脑组织中的作用,应用荧光定量PCR和Western blot方法,测定了Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中的表达水平;应用对精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)特异性的抑制剂(N-isopropyl oxamate),通过肌肉注射后,研究抑制剂对高原鼠兔脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP含量的影响。结果表明,在mRNA和蛋白水平,Ldh-c基因在高原鼠兔脑组织中均有表达,相对表达水平分别为0.38±0.05和0.74±0.13;当肌肉注射1 m L 1 mol/L的抑制剂30 min后,血液中抑制剂浓度为0.08 mmol/L;与对照组相比,抑制剂组脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP含量显著下降,抑制剂对LDH、乳酸和ATP的抑制率分别为30.78%、46.47%和21.04%。结果表明,精子特异性乳酸脱氢酶基因在高原鼠兔脑组织中表达。LDH-C4通过催化无氧糖酵解过程,为其脑组织生命活动提供至少20%的ATP,可能使高原鼠兔减小在低氧环境中对氧气的依赖,增强对低氧环境的适应能力。 展开更多
关键词 高原鼠兔 脑组织 ldh-c基因 N-isopropyl oxamate 乳酸脱氢酶活力
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GSTM1基因多态性与白血病关系的研究 被引量:3
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作者 李娟 朱俊芳 +2 位作者 张炜 刘蓓 马海珍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期318-321,共4页
目的:探讨白血病患者GSTM1基因多态性与白血病疗效及主要生物学特征的关系。方法:采用巢式PCR检测GSTM1基因型,比较不同基因型患者第1疗程的缓解率及发病时的主要生物学特征。结果:GSTM1非缺失基因型患者第1疗程的缓解率及部分缓解率与G... 目的:探讨白血病患者GSTM1基因多态性与白血病疗效及主要生物学特征的关系。方法:采用巢式PCR检测GSTM1基因型,比较不同基因型患者第1疗程的缓解率及发病时的主要生物学特征。结果:GSTM1非缺失基因型患者第1疗程的缓解率及部分缓解率与GSTM1缺失基因型无显著性差异(χ~2=0.290,P=0.590);GSTM1基因型与患者性别、年龄,初诊时白细胞数、血红蛋白水平、血小板数、脾脏肿大无相关性(P>0.05);用Log-rank法对GSTM1缺失基因型的AML与ALL组比较结果显示,AML与ALL组患者的生存率之间无统计学差异(χ~2=2.043,P=0.153);GSTM1未缺失基因型患者初诊时血清乳酸脱氢酶浓度与GSTM1缺失基因型比较有统计学差异(P=0.001)。结论:GSTM1基因型与白血病患者第1疗程的缓解及部分缓解率无相关性,GSTM1基因型与患者血清乳酸脱氢酶浓度有关。 展开更多
关键词 白血病 GSTM1基因 ldh
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不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义 被引量:5
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作者 李博 张朵 +5 位作者 曾健 富显果 柯龙凤 颜水堤 严爱贞 兰风华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第4期445-450,共6页
为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基... 为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一. 展开更多
关键词 不育症 睾丸特异性乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶C4 DHPLC 基因突变
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缺氧环境对PC12细胞损伤及HIF-1 mRNA表达水平的影响 被引量:14
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作者 姚娟 马慧萍 +3 位作者 杨燕 樊鹏程 景临林 贾正平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期162-166,共5页
目的探讨缺氧环境对PC12细胞的损伤作用及其初步机制。方法建立PC12细胞缺氧模型;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法检测正常及缺氧环境对PC12细胞的增殖;PC12细胞缺氧培养0,2,4,8,12,24和48 h后测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,L... 目的探讨缺氧环境对PC12细胞的损伤作用及其初步机制。方法建立PC12细胞缺氧模型;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法检测正常及缺氧环境对PC12细胞的增殖;PC12细胞缺氧培养0,2,4,8,12,24和48 h后测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH);用Real-time RT-PCR检测HIF-1 mRNA的表达水平。结果缺氧培养24 h,48 h后PC12细胞增殖受到抑制(P<0.05,P<0.01);PC12细胞缺氧培养2、4、8 h后培养液中的LDH活性从2~8 h逐渐增高,8 h达到最高值(P<0.01),8 h后逐渐下降;PC12缺氧培养0~4 h HIF-1 mRNA的表达水平逐渐增高,4 h达到最高,4~48 h逐渐降低。结论缺氧环境可引起PC12细胞损伤,缺氧8 h损伤最严重。缺氧导致HIF-1基因表达水平提高,4 h时达到峰值。 展开更多
关键词 PC12细胞 缺氧损伤 MTT 乳酸脱氢酶 HIF-1mR-NA 基因表达
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运动发酵单胞菌定点整合质粒的构建 被引量:1
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作者 邹少兰 洪解放 +3 位作者 马媛媛 张一婷 张鲲 张敏华 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期42-47,共6页
运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)是目前发现的乙醇发酵能力最强的微生物之一,被认为是进行大规模乙醇生产的潜在菌种,但其可利用的碳源范围窄.对其进行分子生物学基础研究和基因工程改造的工作早在上世纪八、九十年代就开始了,但基... 运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)是目前发现的乙醇发酵能力最强的微生物之一,被认为是进行大规模乙醇生产的潜在菌种,但其可利用的碳源范围窄.对其进行分子生物学基础研究和基因工程改造的工作早在上世纪八、九十年代就开始了,但基于其独特的生物学特性,至今遗传操作手段仍不成熟.以大肠杆菌(E.coli)pBR328为出发质粒,分段插入带Z.mobilis乳酸脱氢酶基因ldh、分别作为左右同源臂、1.5 kb大小的DNA片段,构建了Z.mobilis定点整合型质粒pBR328-ldhR-ldhL(6 239 bp),此质粒两同源臂片段即ldhR和ldhL的中间有稀有酶切位点NotI和SfiI,以方便插入待整合片段.经NotI位点插入1 216 bp氯霉素抗性基因cml,将相应质粒pBR328-ldhR-cml-ldhL以环型和线型形式分别电击转化Z.mobilis ZM4菌株,都成功筛选到了ZM4 ldh::cml菌株,证明此定点整合质粒是方便可用的,为对Z.mobilis的定点遗传操作提供了很好的基础. 展开更多
关键词 运动发酵单胞菌 定点整合质粒 ldh基因 cml基因 定点整合
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野桑蚕乳酸脱氢酶基因的克隆与表达分析
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作者 武安泉 张永亮 赵锦慧 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第10期131-134,共4页
为了研究野桑蚕乳酸脱氢酶基因的功能,选择野桑蚕5龄3日幼虫的组织及不同发育时期的个体,利用PCR技术对野桑蚕乳酸脱氢酶基因进行克隆,得到野桑蚕乳酸脱氢酶基因开放阅读框长度为996bp,没有内含子,只有1个外显子。该基因编码的蛋白含有... 为了研究野桑蚕乳酸脱氢酶基因的功能,选择野桑蚕5龄3日幼虫的组织及不同发育时期的个体,利用PCR技术对野桑蚕乳酸脱氢酶基因进行克隆,得到野桑蚕乳酸脱氢酶基因开放阅读框长度为996bp,没有内含子,只有1个外显子。该基因编码的蛋白含有331个氨基酸残基,等电点为6.76,分子量为36.35kD。氨基酸序列分析表明,该蛋白高度保守,亚细胞定位预测分析表明该蛋白主要定位于细胞质中。转录表达分析表明,该基因在野桑蚕5龄3日幼虫的组织(马氏管、中肠、表皮、脂肪体、丝腺、血液、精巢和卵巢)及不同发育时期的个体(卵、幼虫、蛹和蛾)中均有表达,且表达量趋于一致。表明乳酸脱氢酶基因在野桑蚕的生命活动中可能具有重要的生理功能。 展开更多
关键词 野桑蚕 乳酸脱氢酶基因 克隆 表达
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川西高原黑唇鼠兔乳酸脱氢酶C基因cDNA的克隆及序列分析
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作者 贺庆华 徐亚欧 +2 位作者 郑玉才 陈锋 张文磊 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第5期2270-2273,共4页
[目的]为研究以鼠兔LDH-C4为靶蛋白的节育型鼠药奠定基础。[方法]采用简并引物PCR克隆得到黑唇鼠兔LDH-C基因的EST序列,再根据EST序列采用RACE技术克隆出基因的开放阅读框(ORF)全长,和3’UTR序列。[结果]整个cDNA全长1 498 bp,其中ORF长... [目的]为研究以鼠兔LDH-C4为靶蛋白的节育型鼠药奠定基础。[方法]采用简并引物PCR克隆得到黑唇鼠兔LDH-C基因的EST序列,再根据EST序列采用RACE技术克隆出基因的开放阅读框(ORF)全长,和3’UTR序列。[结果]整个cDNA全长1 498 bp,其中ORF长996 bp,编码332个氨基酸,3’UTR长486 bp。ORF序列比对显示LDH-C基因在大的分类单位上均很保守。系统树分析显示黑唇鼠兔的LDH-C基因和灵长类及偶蹄目的遗传距离较近,和啮齿目较远。[结论]成功的克隆得到了黑唇鼠兔的LDH-C基因的cDNA序列。 展开更多
关键词 ldh-C基因 RACE EST 序列分析
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养殖密度对银鲳幼鱼生长、代谢酶活力及其相关基因表达的影响 被引量:11
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作者 倪嘉豪 朱晓静 +4 位作者 季益平 周彬 王亚军 徐善良 王丹丽 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期54-64,共11页
采用为期40d的饲养试验,探讨养殖密度(30尾·m^(–3)、60尾·m^(–3)和90尾·m^(–3))对初始平均体质量为(3.88±0.72)g的银鲳幼鱼生长、肝脏和肾脏中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)的酶活力以及... 采用为期40d的饲养试验,探讨养殖密度(30尾·m^(–3)、60尾·m^(–3)和90尾·m^(–3))对初始平均体质量为(3.88±0.72)g的银鲳幼鱼生长、肝脏和肾脏中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)的酶活力以及相应基因mRNA表达的影响。结果显示:1)60尾·m^(–3)组银鲳幼鱼的增重率和特定生长率分别为(235.19±10.23)%和(4.03±0.10)%,显著高于30尾·m^(–3)组(p<0.05),而与90尾·m^(–3)组无显著性差异(p>0.05);2)90尾·m^(–3)组银鲳幼鱼的酶活力变化最显著,30尾·m^(–3)组的变化幅度最小,60尾·m^(–3)组介于两者之间;3)肝脏和肾脏中LDH、ALT、AST酶活力均呈先升高后降低的趋势,其中肝脏中LDH、ALT、AST酶活力高峰分别出现在6h、10d和10d,是初始值的2倍、4.3倍和2倍,肾脏中3种酶活力峰值则分别出现在1d、3d和5d,是初始值的2.1倍、2.2倍和3.1倍;4)AST、ALT、LDH等3种酶基因mRNA表达量变化规律与各自酶活力变化规律一致。综上所述,养殖密度60尾·m^(–3)时可促进银鲳幼鱼生长,90尾·m^(–3)高密度养殖会导致银鲳幼鱼额外能量的需求增加,糖异生相关基因mRNA表达量上调使肝脏、肾脏中AST、ALT、LDH酶活力显著升高,最终出现生长变慢的情况。 展开更多
关键词 银鳍幼鱼 养殖密度 代谢酶 谷草转氨酶、谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶的基因表达
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Fas/FasL/Caspase-9凋亡基因多态性和环境危险因素的交互作用与腰椎间盘突出症的关系 被引量:4
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作者 袁启令 李新友 +3 位作者 刘亮 蔡永松 叶茂林 张银刚 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期349-356,共8页
目的探讨凋亡相关基因、环境危险因素及其交互作用在腰椎间盘突出症(LDH)中的病因学角色。方法采用病例-对照研究方法,选取128例住院的LDH患者和132例年龄和性别与之匹配的正常对照者,采集外周静脉血样并提取DNA。利用基质辅助激光解... 目的探讨凋亡相关基因、环境危险因素及其交互作用在腰椎间盘突出症(LDH)中的病因学角色。方法采用病例-对照研究方法,选取128例住院的LDH患者和132例年龄和性别与之匹配的正常对照者,采集外周静脉血样并提取DNA。利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析法检测Fas-1377G/A rs2234767、Fas-670G/A rs1800682、Fas rs2147420、Fas rs2296603、Fas rs7901656、Fas rs1571019、FasL-844C/T rs763110、CASP-9-1263A〉G rs4645978,CASP-9-712C〉T rs4645981三个基因9个多态性位点基因型。采用非条件Logistic回归模型分析Fas、FasL和CASP-9基因的多态性与LDH患病风险的相关性。采用多因素Logistic回归模型评价腰椎负荷、睡床类型、业余运动、业余活动等环境危险因素与凋亡相关基因的交互致病效应。结果年龄、性别在病例组和对照组中的分布差异无统计学意义,均衡性较好;而腰椎负荷、体重指数、睡床类型、业余运动、业余活动在病例组和对照组中差异存在统计学意义(P〈0.05)。关联分析发现,FasL-844C/T(rs763110)、CASP-9-1263A〉G(rs4645978)的多态性和LDH存在显著关联,FasL-844C/T TT基因型、CASP-9-1263A〉G GG基因型可能是腰椎间盘突出症的高风险基因型。环境-基因交互作用分析发现,FasL-844TT基因型和腰椎负荷3-4级交互作用机制在LDH发生中为超相乘模型,CASP-9-rs4645978GG基因型和腰椎负荷3-4级交互作用机制在LDH发生中为次相乘模型。结论 FasL、CASP-9基因和腰椎负荷及其交互作用在LDH发病机制中发挥重要作用。提示LDH的患病风险可能由环境危险因素和遗传易感基因共同决定,不同基因型和同一环境因素或不同环境因素的交互作用机制不同。 展开更多
关键词 腰椎间盘突出症 凋亡基因 基因多态性 环境因素 交互作用
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精子特异性乳酸脱氢酶-C4的研究进展 被引量:3
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作者 熊永忠 兰风华 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2003年第8期607-610,共4页
LDH C4是避孕疫苗研制中最有特征性的精子特异性抗原之一。LDH C基因在生精细胞激活而在体细胞受抑制 ,存在LDH C启动子、多种转录因子、CpG岛甲基化等多种因素在转录水平上发挥基因调节作用。针对LDH C4的高水平抗体能有效阻断受精 ,... LDH C4是避孕疫苗研制中最有特征性的精子特异性抗原之一。LDH C基因在生精细胞激活而在体细胞受抑制 ,存在LDH C启动子、多种转录因子、CpG岛甲基化等多种因素在转录水平上发挥基因调节作用。针对LDH C4的高水平抗体能有效阻断受精 ,而天然LDH C4经过化学修饰后显示高度免疫原性 ,能诱导同种异体免疫性不孕。 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶 精子 基因调节 避孕疫苗
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