番泻叶提取物对人肠上皮细胞生物学特性的影响

目的研究番泻叶提取物对人肠上皮细胞生物学特性的影响, 方法应用MTT法观察番泻叶提取物对体外培养人肠上皮细胞生长的影响,用流式细胞术观察番泻叶提取物(5g·L^1)作用6wk后细胞增殖周期的变化,并用光镜和透射电镜观察长期番泻叶提取物作用下细胞形态学的变化。结果大剂量番泻叶提取物(>25g·L^1)可致体外培养的人肠上皮细胞全部死亡,中等剂量(5g·L^1)明显抑制细胞的生长(P<0.0001),且呈剂量依赖关系,其IC_(50)为7g·L^1;小剂量(0.5g·L^(-1))对细胞的生长无明显影响(P>0.05),用番泻叶提取物(5g·L^1)持续作用细胞6wk后,可见其S期细胞数减少,G_2期细胞数增加,DI增高为1.11;光镜下见细胞贴壁差,生长缓慢,胞质中中毒颗粒增多;电镜下见细胞有明显空泡变性,凋亡细胞及凋亡小体多见,偶见病理性核分裂相。结论番泻叶提取物对人肠上皮细胞生长的影响呈剂量依赖性,大剂量可致细胞生长延缓或死亡,小剂量无明显影响,长期使用番泻叶提取物可使细胞增殖减慢,凋亡增加,异倍体DNA含量升高,促使细胞发生恶性转化。

双歧杆菌粘附素对脂多糖和H_2O_2调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的研究双歧杆菌分泌型粘附素对脂多糖(LPS)和H2O2体外调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法用3H-TdR掺入法、流式细胞仪和荧光染色等方法观察肠上皮细胞增殖和凋亡的情况。结果100 μg/L LPS对细胞增殖和凋亡均有促进作用,200 μmol/L H2O2可抑制肠上皮细胞增殖,促进凋亡。丫啶橙荧光染色见细胞核染色质致密浓染或裂解成碎片。预先经双歧杆菌分泌型粘附素处理后,LPS组细胞增殖和凋亡率均显著下降,H2O2组细胞凋亡明显减少。结论在体外,双歧杆菌分泌型粘附素能抑制LPS和H2O2对肠上皮细胞的损害作用,维持肠上皮细胞增殖与凋亡的平衡。

巴豆提取物对人肠上皮细胞生物学特性的影响

目的研究巴豆提取物对人肠上皮细胞生物学特性的影响。方法应用MTT法观察巴豆提取物对体外培养的人肠上皮细胞生长的影响。采用递增剂量(4mg·L 1～40mg·L^1)巴豆提取物作用细胞6wk后,用流式细胞术观察细胞增殖周期变化,同时用光镜和透射电镜观察细胞形态学的改变。结果大剂量巴豆提取物(80mg·L^1)可致培养的人肠上皮细胞全部死亡,中等剂量(20mg·L 1～40mg·L^1)明显抑制细胞的生长1.3,5,7d时OD值依次为:(20mg·L^1)0.040±0.003,0.081±0.012,0.147±0.022,0.0240±0.016;(40mg·L^1)0.033±0.004,0.056±0.012,0.104±0.010,0.189±0.006;对照为0.031±0.008,0.096±0.012,0.173±0.009,0.300±0.016,P<0.01-0.0001),且呈剂量依赖关系,其IC_(50)为52mg·L^1;小剂量(4mg·L^1)对细胞的生长无明显影响(1、3、5、7d时OD值依次为:0.053±0.005,0.089±0.009,0.166±0.002,0.262±0.008,P>0.05),用递增剂量(4mg·L^1～40mg·L^1)巴豆提取物持续作用细胞6wk后,可见其G_1—S期进程加快,G_1期细胞的数分数由0.604减少为0.584,S期细胞的数分数由0.302增加为0.336,P>0.05,DI增高为1.15;光镜下见细胞体积变小,核大质少,核浆比例失调;电镜下可见宽大突起的细胞膜,表面微绒毛丰富,长短不一,胞核明显增大,核仁增多,并可见病理性核分裂相。结论巴豆提取物对人肠上皮细胞生长的影响呈剂量依赖性,大剂量可致细胞生长延缓或死亡,小剂量无明显影响。长期使用递增剂量巴豆提取物可诱导细胞增殖加快,异倍体DNA含量增加,促使细胞发生恶性转化。

一氧化氮在结肠黏膜上皮细胞氧化损伤中的作用观察

目的探讨一氧化氮(NO)在结肠黏膜上皮细胞氧化损伤中的作用及褪黑素的影响。方法利用FeSO4+H2O2产生羟自由基损伤结肠黏膜上皮细胞,观察L-精氨酸、L-NAME对模型中NO合成的影响及相应细胞损伤程度的改变,并观察褪黑素对该过程的影响。实验检测指标包括乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、NO和黏液含量。结果模型组大鼠结肠黏膜上皮细胞MDA和LDH水平增高,CAT、GSHPX、SOD和黏液含量减少,NO水平增高与结肠黏膜上皮细胞氧化损伤相关,L-精氨酸和L-NAME通过促进或抑制NO合成,显著加重或减轻这种氧化损伤。褪黑素可逆转羟自由基及NO引起的氧化损伤。结论NO直接参与羟自由基对结肠黏膜上皮细胞的氧化损伤,褪黑素通过直接清除羟自由基和NO及可能形成的过氧化亚硝基阴离子,对大鼠结肠黏膜氧化损伤具有保护作用。

Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对人LECs增生、迁移及ECM合成的抑制作用

背景 白内障囊外摘出术后晶状体囊残留的晶状体上皮细胞（LECs）的生物学行为改变是后发性白内障的主要病理改变.Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔具有抑制细胞骨架的重构、迁移、黏附及纤维化等作用,但对LECs的作用尚不清楚.目的 探讨盐酸法舒地尔对人LECs株HLEB-3细胞增生、迁移的作用及其对细胞外基质（ECM）合成的影响.方法 常规培养HLEB-3细胞,对照组细胞仍进行常规培养,药物组培养液中加入不同浓度的盐酸法舒地尔,使其终浓度分别为10、20、40和60 μmol/L,分别于培养后12、24和48 h采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测各组细胞的增生情况,计算不同剂量盐酸法舒地尔对细胞增生的抑制率;分别于处理后12、24、36和48 h采用Transwell小室迁移实验检测各组的迁移细胞数;并于上述时间点采用ELISA法检测各组细胞上清中Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ）、纤维连接蛋白（FN）的质量浓度及细胞内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）质量浓度,对各组间的检测结果进行比较.结果 不同浓度盐酸法舒地尔组HLEB-3细胞增生抑制率均明显高于对照组,随着盐酸法舒地尔浓度的增加,HLEB-3细胞增生抑制率明显增加,组间总体差异有统计学意义（F浓度=966.727,P=0.000）;随着盐酸法舒地尔作用时间的延长,HLEB-3细胞增生抑制率明显增加,总体比较差异有统计学意义（F时间=280.428,P=0.000）.Transwell小室迁移实验显示,实验后48 h,对照组穿过聚碳酸酯膜的细胞数为（29.20±1.28）个,10、20、40和60 μmol/L盐酸法舒地尔组迁移的细胞数分别为（24.40±1.33）、（17.00±1.10）、（14.60±0.68）和（6.60±1.29）个,随着盐酸法舒地尔浓度的增加,HLEB-3细胞的迁移数逐渐减少,差异有统计学意义（F=57.34,P＜0.05）.随着盐酸法舒地尔浓度的增加和作用时间的延长,细胞上清液中COL-Ⅰ和FN质量浓度逐渐降低,差异均有统计学意义（COL-Ⅰ：F浓度=143.992,P=0.000;F时间=113.745,P=0.000.FN：F浓度=81.761,P=0.000;F时间=69.602,P=0.000）;细胞内α-SMA质量浓度逐渐下降,差异均有统计学意义（F浓度=78.156,P=0.000;F时澡 =65.162,P=0.000）.结论 盐酸法舒地尔可抑制体外培养HLEB-3的增生、迁移及ECM的合成,其作用呈剂量和时间依赖性.

MMPs抑制剂GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ及Ⅱ对人晶状体上皮细胞移行的抑制作用

背景 白内障术后残留晶状体上皮细胞（LECs）的增生、移行、上皮-间质转化等生物学行为与晶状体后囊膜混浊（PCO）的发生有关,基质金属蛋白酶（MMPs）参与细胞的移行过程.广谱MMPs抑制剂GM6001能抑制人LECs的移行,但特异性MMPs抑制剂,即MMP-2/9抑制剂Ⅰ和Ⅱ对LECs移行能力的影响及药物的安全性尚不明确. 目的 比较GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ和MMP-2/9抑制剂Ⅱ对LECs移行的抑制作用及其对细胞活性的影响.方法 对人LECs系进行培养和传代,取传至3～4代的细胞培养于6孔板中,当细胞生长融合至70％后改用无血清培养液作用12h,在培养液中分别加入不同浓度（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00、32.00、64.00、128.00μmol/L）GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ和MMP-2/9抑制剂Ⅱ,以基础培养液培养的细胞作为对照组,用200μl无菌枪头在细胞层中划出细胞裸露区,继续培养后24 h计算各组细胞移行的平均距离,计算各种药物对LECs移行的抑制率.在细胞活性的测定中,取传至第2代或第3代LECs,调整细胞密度至5＆#215;105/ml,以200 μl/孔接种至96孔板常规培养,分别加入128.00 μmol/LGM6001、64.00μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅰ和32.00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅱ,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用MTT法测定吸光度（A）值,分析并比较3种药物对LECs活性的影响,评估药物对细胞的毒性作用.结果 正常培养的LECs生长良好,贴壁生长的细胞呈梭形或多边形,排列不规则.随着GM6001、MMP-2/9抑制剂Ⅰ和MMP-2/9抑制剂Ⅱ浓度的增加,LECs移行距离逐渐缩短,总体比较差异有统计学意义（GM6001：F=248.647,P＜0.05;MMP-2/9抑制剂Ⅰ：F=357.125,P＜0.05;MMP-2/9抑制剂Ⅱ：F=396.374,P＜0.05）.将对照组细胞移行距离设为1,3种药物浓度为32.00 μmol/L时,GM6001组、MMP-2/9抑制剂Ⅰ组和MMP-2/9抑制剂Ⅱ组细胞的相对移行距离分别为0.478±0.091、0.294±0.088和0.191±0.081,总体比较差异有统计学意义（F=116.031,P＜0.01）,其中MMP-2/9抑制剂Ⅱ组中细胞移行距离明显低于GM6001组和MMP-2/9抑制剂Ⅰ组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.对照组、128.00 μmol/L GM6001组、64.00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅰ组和32.00 μmol/L MMP-2/9抑制剂Ⅱ组的A值分别为0.607±0.016、0.567±0.015、0.583±0.010和0.595±0.014,总体比较差异无统计学意义（F=1.403,P＞0.05）. 结论 3种MMPs抑制剂均可有效抑制体外培养的LECs的移行,且对细胞的生长活性无明显影响,其中MMP-2/9抑制剂Ⅱ的抑制作用最强。

三氟拉嗪对体外培养人晶状体上皮细胞增殖作用的实验研究

目的研究三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)对体外培养的人晶状体上皮细胞增殖作用的影响,为三氟拉嗪防治晶状体后囊混浊提供理论依据。方法不同浓度(2μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、8μg/ml)的TFP作用于传代培养的晶状体上皮细胞,于作用244、8、729、6 h后,用MTT比色法测定其抑制率;用流式细胞仪分析检测TFP诱导人晶状体上皮细胞的细胞周期的阻断。结果TFP对人晶状体上皮细胞的抑制呈明显的时间剂量依赖性,细胞周期分布显示TFP使细胞阻滞在G0/G1期。结论三氟拉嗪可抑制晶状体上皮细胞的生长增殖,其抑制后囊混浊的可能作用值得进一步研究。

谷氨酸对视神经脑膜上皮细胞的兴奋性毒性作用及其氧化应激机制

背景作为脑脊液－视神经屏障的主要细胞成分，视神经脑膜上皮细胞（MECs）直接与脑脊液相接触，脑脊液中的组分改变可影响MECs的功能，进而对视神经的功能产生不利影响。 目的探讨脑脊液中兴奋性神经递质谷氨酸对MECs功能的影响，为视神经疾病发病机制的研究提供新的线索。方法将培养的人MECs株制备成悬液并接种于96孔培养板中，密度为1×104/孔，分别在培养液中用添加100、200、400、600、800和1 000 μmol/L谷氨酸孵育12、24、36、48和72 h，未添加谷氨酸者作为正常对照组，采用MTS法测定各组MECs的增生率（吸光度A490）值。采用600 μmol/L谷氨酸分别孵育MECs 24 h和48 h，未添加谷氨酸者作为正常对照组，采用实时定量PCR法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）mRNA和热休克蛋白90（HSP90）mRNA的相对表达量；采用ELISA法检测细胞的总抗氧化能力（T-AOC），并通过荧光探针DCFH-DA观察细胞活性氧（ROS）的荧光强度。结果培养MECs生长良好，培养后72 h约80%细胞达到融合。不同浓度谷氨酸培养组随着谷氨酸浓度的增加及作用时间的延长细胞增生率逐渐下降，总体比较差异均有统计学意义（F浓度＝52.501，P〈0.001；F时间＝8.505，P〈0.001）。实验后24 h和48 h谷氨酸处理组细胞中SOD mRNA相对表达量均明显低于同时间点正常对照组，差异均有统计学意义（t＝20.278、t＝16.724，均P〈0.001）；谷氨酸作用MECs后24 h细胞中HSP90 mRNA相对表达量明显高于正常对照组，差异有统计学意义（t＝5.065，P＝0.002）。实验后24 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为（30.835±2.094）nmol/（min·L），低于正常对照组的（32.873±2.317）nmol/（min·L），但差异无统计学意义（t＝1.599，P＝1.414）；实验后48 h谷氨酸处理组细胞中T-AOC活性为（29.561±1.831）nmol/（min·L），低于正常对照组的（33.680±2.039）nmol/（min·L），差异有统计学意义（t＝3.682，P＝0.004）。谷氨酸处理组细胞中ROS荧光强于正常对照组，谷氨酸处理组处理后24 h及48 h细胞中ROS含量分别为48.110±1.712和40.982±1.853，均明显高于正常对照组的36.608±1.009和37.153±1.424，差异均有统计学意义（t＝14.178，P〈0.001；t＝4.012，P＝0.002）。结论谷氨酸可抑制体外培养MECs的增生，其对MECs的兴奋毒性作用与氧化应激刺激作用有关。

MsrB1基因对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用

背景 氧化应激被认为是年龄相关性白内障发生的主要因素之一,研究表明蛋氨酸亚砜还原酶B1（MsrB1）对于保护晶状体细胞抵抗氧化应激具有重要作用,然而,MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）的凋亡影响的机制尚不十分清楚.目的 探讨MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人LECs凋亡及其细胞周期分布的影响.方法人LECs细胞系SRA01/04在DMEM中进行培养,不同浓度的H2O2（200、400、600、800和1 000μmol/L）加入培养基分别处理细胞12、24和36 h以选择最适浓度和作用时间.细胞分为正常对照组、MsrB1 siRNA转染组（将MsrB1 siRNA Lipofectamine 2000质粒转染入LECs）、H2O2诱导组（200μmol/L作用LECs 24 h）和MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组（转染MsrB1 siRNA脂质质粒后用H2O2处理细胞）.采用MTT法检测不同浓度H2O2诱导后人LECs 12、24和36 h细胞的存活率,并筛选H2O2处理作用最适的浓度和时间,用于进一步的细胞凋亡诱导实验;Real-time PCR法检测MsrB1 siRNA转染后24 h各组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达水平;采用Hoechst33528染色法观察各组细胞的细胞核形态变化;采用碘化丙啶（PI）染色法,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和不同细胞周期的细胞比例.结果 正常对照组、H2O2诱导组、MsrB1 siRNA转染组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达值为1.063±0.058、1.013±0.049和0.235±0.024,MsrB1 siRNA转染组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达值明显低于正常对照组和H2O2诱导组,差异均有统计学意义（t=31.744、35.807,均P＜0.001）.不同浓度H2O2处理后24 h细胞活力最低,以200 μmol/LH2O2处理后24 h为诱导人LECs凋亡的浓度和时间点.Hoechst 33528染色显示,H2O2诱导组可见部分细胞核收缩,MsrB1 siRNA转染组可见少数收缩变小的细胞核,MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组收缩变小的细胞核多于H2O2诱导组.流式细胞术检测结果显示,正常对照组的凋亡细胞占（1.36±0.35）％,而MsrB1siRNA转染组占（3.26±0.31）％,H2O2诱导组和MsrBl siRNA转染联合H2O2诱导组细胞的凋亡率明显上升,分别为（5.13±0.59）％和（8.73±0.48）％.细胞周期检测结果表明,H2O2诱导组细胞周期阻滞在G2/M期.MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组人LECs G1期所占比例为（52.78±1.68）％,明显高于H2O2诱导组的（44.99±1.37）％,而G2/M期细胞比例为（34.97±2.31）％,明显低于H2O2诱导组的（42.39±1.41）％,差异均有统计学意义（t=6.224、-6.213,均P＜0.01）.结论 MsrB1基因通过调节细胞周期的细胞分布减少H2O2诱导的人LECs的凋亡.

术中应用紫杉醇防治兔后发性白内障

目的研究紫杉醇(Taxol)防治兔后发性白内障形成的效果及其对兔眼的毒性作用。方法40只兔眼行白内障囊外摘除术。行单纯白内障囊外摘除术为对照组,手术时在0.3 ml灌注液中加入紫杉醇于晶状体囊袋内进行水分离(分三种浓度:4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml)为用药组。定期进行临床观察。术后3个月对后囊混浊行裂隙灯照相,用光镜观察晶状体后囊的形态学变化。用透射电镜观察角膜的形态学变化。结果术后3个月用药组晶状体后囊透明度优于对照组,对照组后囊混浊评分和发生率高于用药组,对照组后囊混浊评分5只为3,高于用药组(0只为3)(P<0.05)。对照组晶状体后囊前覆盖一层晶状体上皮细胞。用药组晶状体后囊前无明显晶状体上皮细胞增殖,角膜组织无明显病理改变,角膜细胞核膜边界完整。结论紫杉醇可能为预防后发性白内障较为安全、有效的药物。

丹参酮对大鼠睑板腺上皮细胞增生、分化及脂质合成的影响

目的观察不同剂量丹参酮的2种主要单体成分隐丹参酮和丹参酮ⅡA对体外原代培养的SD大鼠睑板腺上皮细胞增生、分化及其脂质合成的影响。方法取清洁级2月龄SD大鼠,分离取出双眼睑板腺组织并与3T3滋养细胞共培养5d。隐丹参酮和丹参酮ⅡA用二甲基亚砜(DMSO)配制成不同浓度,按照培养液中添加的隐丹参酮和丹参酮ⅡA浓度不同将混合培养的细胞分为0.125μmol/L药物组、0.250μmol/L药物组、0.500μmol/L药物组、1.250μmol/L药物组和2.500μmol/L药物组,分别加入相应浓度的隐丹参酮或丹参酮ⅡA处理细胞48h,溶剂对照组仅加入相应体积的DMSO溶剂。采用免疫荧光染色法测定睑板腺组织冰冻切片和睑板腺细胞克隆细胞中角蛋白14(K14)和p63的定位和表达;采用实时荧光定量PCR法检测睑板腺细胞克隆中K16、细胞增生相关抗原(Ki67)及CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的基因表达情况;采用结晶紫染色和油红O染色法分别评估睑板腺上皮细胞的克隆形成率和脂质合成情况。结果睑板腺细胞体外原代培养至第4~5天可见克隆形成,至培养第7天克隆面积明显增大,克隆细胞中p63和K14蛋白表达阳性。与溶剂对照组比较,0.500μmol/L隐丹参酮组、1.250μmol/L隐丹参酮组和2.500μmol/L隐丹参酮组Ki67mRNA相对表达量明显升高,0.500μmol/L丹参酮ⅡA组和1.250μmol/L丹参酮ⅡA组细胞中Ki67mRNA相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);不同浓度隐丹参酮或丹参酮ⅡA组细胞中K16和C/EBPαmRNA相对表达量总体比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。睑板腺细胞克隆内未见油红O染色,克隆边缘交界处细胞团出现堆积状油红O阳性染色。1.250μmol/L隐丹参酮组睑板腺细胞平均克隆形成率为(2.55±0.20)%,高于溶剂对照组的(2.05±0.13)%,差异有统计学意义(t=4.379,P<0.05);1.250μmol/L丹参酮ⅡA组睑板腺细胞的平均克隆形成率为(2.25±0.20)%,与溶剂对照组比较差异无统计学意义(t=1.616,P>0.05)。结论隐丹参酮和丹参酮ⅡA可以促进睑板腺细胞增生,但不影响睑板腺上皮细胞的分化及脂质合成。隐丹参酮可促进睑板腺细胞体外克隆的形成。

腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在晶状体上皮细胞中的表达

目的研究Ⅱ型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 2，rAAV2）载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因（enhanced green fluorescent protein，ECFP）对体外培养兔晶状体上皮细胞的转染和表达情况，为rAAV携带目的基因防治后囊膜混浊提供理论依据。方法组织块培养法体外培养兔晶状体上皮细胞。rAAV2-EGFP，按感染复数（multiplicity of infection，MOI）为10^3、10^4、10^5、4×10^5、10^6转染传2代细胞，转染后第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天在倒置荧光显微镜下观察晶状体上皮细胞中EGFP表达的阳性情况，记录200个细胞中EGFP阳性表达所占的百分比。当EGFP表达稳定后用激光共聚焦显微镜照相。用倒置显微镜观察rAAV转染对细胞生长和形态的影响。结果当MOI=10^3、10^4时，转染后第72小时晶状体上皮细胞中EGFP开始表达，当MOI=10^5、4×10^5、10^6时，转染后第24小时便可见EGFP阳性表达。随着MOI值的增大及时间的延长，EGFP表达效率逐渐增高，转染后第8-第9天达到高峰并维持，此时，MOI=10^3、10^4、10^5、4×10^5、10^6的转导效率分别为16％、41％、55％、86％、94％。对照组和转染组细胞的生长和形态特征无明显改变。结论腺相关病毒载体可以携带报告基因稳定转染晶状体上皮细胞，并且转染效率高，因而腺相关病毒携带目的基因防治后囊膜混浊是可行的。

白细胞介素-6对糖尿病小鼠角膜缘干细胞活化的促进作用和角膜上皮愈合的加速作用

背景白细胞介素（IL）-6既介导炎症反应过程又在损伤修复中发挥重要作用，但其具体机制及其在糖尿病角膜组织损伤修复中的作用值得探讨。目的探讨IL-6在正常和糖尿病小鼠角膜缘干细胞活化和角膜上皮修复过程中的作用及其机制。方法正常6～8周龄C57BL/6小鼠52只，采用随机数字表法随机分为正常对照鼠32只和糖尿病模型鼠20只，采用50 mg/kg链脲佐菌素连续腹腔内注射5 d的方法诱导建立小鼠糖尿病模型。正常对照小鼠和糖尿病模型小鼠均行角膜上皮刮除术，然后分别于刮除后即刻和48 h结膜下注射IL-6或等容量PBS，采用荧光素染色法评价随时间延长的角膜上皮的愈合情况。体外培养小鼠角膜上皮干/祖细胞（TKE2细胞系），采用结晶紫染色法评估不同质量浓度IL-6处理后细胞克隆率（CFE），并与空白对照组进行比较；采用免疫荧光检测法和Western blot法检测细胞和小鼠再生上皮中干细胞标志物ΔNP63、Ki67的表达以及关键转录因子STAT3磷酸化水平；采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测小鼠角膜再生上皮中IL-6的mRNA及蛋白水平。结果角膜荧光素染色检查显示，正常对照小鼠和糖尿病模型小鼠PBS注射组与IL-6注射组注射后24、48和72 h残留角膜上皮缺损面积占原始缺损面积的百分比随角膜上皮损伤后时间延长均明显缩小，同时间点IL-6注射组角膜上皮缺损面积均明显小于PBS注射组，组间总体差异均有统计学意义（正常对照组：F分组＝19.982，P〈0.01；F时间＝589.350，P〈0.01；糖尿病组：F分组＝25.411，P〈0.01；F时间＝334.807，P〈0.01）。空白对照组及10、20、50、100 ng/ml IL-6处理组CFE分别为（13.23±1.12）%、（15.87±1.30）%、（21.69±1.62）%、（25.33±1.28）%和（18.67±1.54）%，随着IL-6质量浓度的增加CFE逐渐增加，总体比较差异有统计学意义（F＝35.547，P〈0.01）。50 ng/ml IL-6处理5、10、15、30和60 min细胞中ΔNP63、Ki67和p-STAT3蛋白的相对表达量随着处理时间的延长均逐渐增加，各时间点细胞中ΔNP63、Ki67和p-STAT3蛋白的相对表达量均明显高于空白对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。糖尿病组和正常对照组小鼠角膜上皮刮除后24 h的再生上皮中IL-6 mRNA相对表达量分别为0.45±0.21和1.00±0.16，糖尿病组小鼠角膜再生上皮中IL-6 mRNA相对表达量较正常对照组小鼠下降56%，差异有统计学意义（t＝3.42，P＝0.03），糖尿病小鼠角膜上皮刮除后48 h的再生上皮中IL-6蛋白质量浓度为（257±12）ng/μl，明显低于正常对照组小鼠的（323±17）ng/μl，差异有统计学意义（t＝5.60，P〈0.01）。结论IL-6能够通过激活STAT3信号通路促进正常和糖尿病小鼠角膜缘干细胞的活化和增生，进而促进角膜上皮修复，而封闭内源性IL-6则会延迟小鼠角膜上皮的修复。

液相色谱—质谱联用导向的黄葵胶囊肾保护活性物质研究

目的:本研究旨在发现黄葵胶囊肾保护活性物质。方法:采用组分制备结合液相色谱—质谱联用(LC/MS)导向筛选技术,快速发现黄葵胶囊中具有肾保护活性的物质,在盐酸阿霉素损伤HK-2细胞模型上验证其活性,并检测这些活性物质对损伤HK-2细胞中丙二醛(MDA)含量、ATP含量、线粒体耗氧率的影响。结果:筛选发现黄葵胶囊中四个组分具有肾保护活性,运用LC/MS分析推测出15个黄酮类化合物,其中鉴定出金丝桃苷、杨梅素、槲皮素、芦丁和异槲皮素五个化合物。验证结果表明,金丝桃苷、杨梅素、槲皮素、芦丁对损伤HK-2细胞的保护作用呈一定的量效关系,均能降低损伤细胞MDA含量、升高ATP含量、提高线粒体耗氧率,其中金丝桃苷能降低MDA含量,槲皮素和芦丁能升高ATP含量,杨梅素能提高线粒体耗氧率。结论:金丝桃苷、杨梅素、槲皮素、芦丁可能是黄葵胶囊中潜在的肾保护活性物质,其保护作用可能与抗脂质过氧化、减轻线粒体损伤有关。

莱菔硫烷激发的细胞自噬潮对离体人晶状体囊上细胞增生的抑制作用

背景 研究已证实莱菔硫烷（SFN）为一种有效的化学预防剂，能调控生物体不同的分子机制以抑制细胞的无序生长。自噬是人体细胞维持自身内环境的生物过程，探讨SFN对晶状体上皮细胞（LECs）生物学行为的影响及其与细胞自噬的关系有助于为后发性白内障（PCO）的预防和靶向治疗提供新的思路。目的 探讨SFN诱导人LECs凋亡的直接作用及其激发细胞自噬潮的作用机制。方法 将离体24 h内的人供体眼行常规白内障超声乳化手术，取出的完整晶状体囊袋置于含体积分数2%胎牛血清的EMEM中培养，建立PCO囊袋模型。按照分组分别于培养基中添加0（空白对照组）、1、10和100 μmol/L SFN培养30 d，观察各组晶状体囊袋上细胞的生长情况，并采用免疫荧光技术检测细胞中F-actin和Vimentin的表达。用含5%胎牛血清的EMEM培养晶状体上皮细胞系FHL124，将培养的细胞分为空白对照组1、10、30和100 μmol/L SFN处理组，行乳酸脱氢酶（LDH）释放试验以测定各组细胞LDH释放的百分率；采用划痕试验检测各组细胞划痕面积的变化以评估细胞迁移能力；透射电子显微镜下观察各组细胞中自噬囊泡的超微结构及数量；采用Western blot法检测SFN组、SFN＋3-MA组和3-MA处理的细胞自噬活动特异蛋白LC3的相对表达。结果 各不同质量浓度SFN组晶状体囊袋上细胞覆盖率总体比较差异有统计学意义（F＝48.57，P〈0.01）。10 μmol/L SFN组明显低于空白对照组和1 μmol/L SFN组。免疫荧光检测技术表明空白对照组增生细胞中F-actin和Vimentin染色阳性，增生的细胞排列致密，随着SFN质量浓度升高，F-actin和Vimentin阳性细胞密度下降，100 μmol/L SFN组未发现F-actin和Vimentin阳性细胞。空白对照组及1、10、30和100 μmol/L SFN组细胞LDH释放量（A值）分别为0.19±0.03、0.39±0.06、0.56±0.07、0.68±0.08和0.89±0.09，其中10、30、100 μmol/L SFN组细胞LDH释放量均明显高于空白对照组，随着SFN质量浓度升高，细胞LDH释放量逐渐增加，均明显高于其相邻的低质量浓度组，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。随着SFN质量浓度的升高，划痕面积减少率呈下降趋势，10、30、100 μmol/L随着SFN质量浓度升高，划痕面积的减少均明显低于其相邻的低质量浓度组，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。空白对照组、SFN组、SFN＋3-MA组和3-MA细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达的灰度值分别为0.423±0.003、14.543±0.024、0.668±0.024和0.576±0.056，SFN＋3-MA和3-MA组LC3-Ⅱ蛋白表达的灰度值均明显低于SFN组，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。空白对照组及1、10和100 μmol/L SFN组间自噬小体数量分别为4.07±0.32、4.13±0.34、9.21±0.53和21.02±1.34，其中10和100 μmol/L SFN组细胞中自噬小体数量均明显高于空白对照组及1 μmol/L SFN组，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论SFN可以激发人LECs自噬潮，从而抑制离体人晶状体囊上LECs的增生，促进LECs的死亡。本研究结果有望成为预防和治疗PCO的新药。

三种不同材料人工晶状体的囊膜生物相容性比较

背景研究表明，后囊膜混浊（PCO）的发生与人工晶状体（IOLs）的材料有关，然而不同材料的IOLs对PCO发生率的影响存在争议。目的研究不同材料IOLs表面人晶状体上皮细胞（LECs）的黏附、增生、上皮-间充质转化（EMT）和相关细胞因子分泌情况，探讨不同材料IOLs的囊膜生物相容性。方法将人LECs系HLE—B3细胞分别接种于疏水性丙烯酸酯（AcrysofSA60AT）IOLs、硅凝胶（Crystalens）IOLs、聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）IOLs的表面培养6h和24h，观察不同IOLs表面黏附的细胞数目及其形态；采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测IOLs表面细胞的增生反应；采用免疫荧光技术检测不同IOLs表面人LECs间质细胞标志物a-平滑肌肌动蛋白（0【-SMA）的表达，计算IOLs表面人LECs的EMT转化率；采用ELISA法检测不同材料IOLs表面细胞培养液中转化生长因子-β2（TGF—β2）、白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及MMP-9的质量浓度。结果细胞接种于不同材料IOLs并培养6h，AcrysofIOLs和CrystalensIOLs表面黏附的细胞以多边形和椭圆形为主，而PMMAIOLs表面黏附的细胞形态以纺锤形为主；培养后24h，IOLs表面细胞全部伸展，AcrysofIOLs和CrystalensIOLs表面黏附的细胞为多边形，长梭形细胞增多，PMMAIOLs表面细胞呈典型的纤维纺锤样细胞，部分细胞聚集成团。培养后24hAcrysofIOLs、CrystalensIOLs和PMMAIOLs表面的增生相对细胞数A值分别为0．2384±0．0071、0．1781±0．0066和0．1589±0．0069，总体比较差异均有统计学意义（F=475．947，P=0．000），其中AcrysofIOLs表面的细胞数明显多于CrystalensIOLs和PMMAIOLs，差异均有统计学意义（均P〈0．001）。AcrysofIOLs、CrystalensIOLs和PMMAIOLs表面人LECs的EMT转化率分别为（9．99±3．80）％、（17．33±5．71）％和（84．16±10．48）％，组间总体比较差异有统计学意义（F=127．411，P=0．000），其中PMMAIOLs表面人LECs的转化率明显高于CrystalensIOLs和AcrysofIOLs，差异均有统计学意义（均P〈O．001）。ELISA检测结果显示，AcrysofIOLs、CrystalensIOLs和PMMAIOLs细胞培养液中TGF—β2、IL-6、MMP-2和MMP-9质量浓度的比较差异均无统计学意义（F=0．846、0．947、0．255、0．922，均P〉O．05）。结论在临床上常用的3种材料的IOLs中，疏水性丙烯酸酯的囊膜生物相容性最佳。

白三烯D4在体外对A549肺泡上皮细胞增殖及迁移的影响

目的：观察炎症介质白三烯D4（LTD4）对人肺泡上皮细胞株A549细胞增殖及迁移的影响.方法：以免疫荧光染色鉴定A549细胞上半胱氨酰白三烯（CysLT）受体的表达;以不同浓度（0.01～100 nmol/L）的CysLT受体激动剂LTD4处理A549细胞不同时间后,以MTr还原法检测细胞活性反映细胞增殖,以改良的划痕法观察细胞迁移的变化.结果：A549细胞表达CysLT1受体及CysLT2受体.0.01 ～100 nmol/L LTD4处理A549细胞24 ～72 h,细胞增殖无明显变化（均P＞0.05）;100nmol/L LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞活性分别为不加LTD4处理的A549细胞的（103.00±4.46）％、（107.00±9.45）％、（105.00±9.02）％,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.虽然0.01 ～ 100 nmol/L LTD4处理的第1个24h内A549细胞的修复速率远高于第2个及第3个24h内的细胞修复速率,但同一时间段组间差异无统计学意义（均P＞0.05）.100 nmol/L的LTD4处理A549细胞24、48、72 h后,细胞迁移率分别为不加LTD4处理的A549细胞的1.15、1.21、1.06倍（均P＞0.05）,说明LTD4处理后细胞迁移亦无明显变化.结论：在体外给予0.01 ～ 100 nmol/L LTD4处理72 h,不影响A549细胞的增殖及迁移.

兔角膜上皮的CFTR分泌通路与细胞内钙信号释放的关联研究

摘要背景 研究表明角膜上皮中的囊性纤维跨膜电导调节因子（CFTR）是重要的阴离子和水分泌通道，CFTR激动剂可促进泪液分泌，对干眼的治疗具有一定的意义。曾有研究认为CFTR通路是cAMP-PKA依赖通路而没有钙信号参与。然而，升高cAMP并不能促进角膜上皮CFTR通路的分泌，钙信号在角膜上皮CFTR分泌通道中是否发挥作用尚不清楚。 目的 从生理学角度探讨CFTR在兔角膜上皮分泌功能的实现与钙信号之间的关系。 方法 采用计算机随机数字分配法将16只健康新西兰白兔随机分为2个组，每组各8只。动物全身麻醉下取双眼角膜，然后处死。角膜上皮面朝向正向电流方向置于尤氏小室，奇数组兔右眼角膜仅给予单纯ATP刺激（ATP刺激组），左眼角膜用CFTR特异性抑制剂CFTRinh-172预处理后给予ATP刺激（CFTRinh-172预处理组）；偶数组兔右眼角膜用于原代角膜上皮细胞培养并采用激光扫描共焦显微镜进行单个细胞胞质内钙离子荧光强度测定，左眼角膜组织用细胞内钙离子螯合剂BMPTA/AM预处理后给予ATP刺激（BMPTA/AM预处理组），采用短路电流装置记录各组兔角膜上皮的短路电流变化。 结果 ATP刺激组、CFTRinh-172预处理组和BMPTA/AM预处理组角膜上皮电流值分别为（5.73±1.36）、（1.30±0.95）和（2.47±0.55）μA/cm2，CFTRinh-172预处理组和BMPTA/AM预处理组角膜上皮电流值均低于单纯ATP刺激组，差异均有统计学意义（t＝11.201、5.508，均P〈0.001）。单细胞的细胞内钙离子检测发现，ATP刺激后细胞内钙离子荧光强度迅速升高至ATP刺激前的3.25倍。 结论 ATP可引起兔角膜上皮细胞分泌增加，CFTRinh-172抑制整个CFTR通路中ATP促发的角膜短路电流，而BMPTA/AM消除了细胞内游离的钙离子，提示兔角膜上皮细胞分泌的CFTR通道功能的实现与细胞内钙信号释放有关。

中药有效成分逆转肝癌顺铂耐药机制的研究进展

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,也是全球癌症相关死亡的主要原因。顺铂是临床上治疗肝癌的一线化疗药物,然而不良反应和耐药性是顺铂治疗肝癌的两大挑战,因此一些天然产物作为潜在的抗癌药物和增敏剂引起了广大学者的密切关注。中药有效成分联合顺铂可发挥协同增效、降低化疗不良反应等作用来更好地抗肝癌。从逆转细胞凋亡受阻、调控细胞自噬、降低化疗药物浓度、诱导DNA损伤和抑制上皮–间充质转化5个方面综述中药有效成分逆转肝癌顺铂耐药的机制,以期为未来减轻临床肝癌顺铂耐药、提高肝癌患者的生存质量和治疗效果提供参考。