子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

Ⅰ型子宫内膜癌中miRNA Let-7的表达及意义

目的 检测Ⅰ型子宫内膜癌(endometrioid adenocarcinoma,EA)组织中miRNA Let-7的表达,并探讨其与患者临床病理特征及预后的关系;方法 选取我院2016年1月至2022年12月期间,经病理确诊和根治手术切除的EA患者59例作为病例组,及同期因子宫肌瘤或肌腺瘤切除的15例子宫组织作为对照组;收集肿瘤患者的临床病理参数及术后随访资料,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miRNA Let-7的表达以及在不同临床病理特征间的差异;采用Kaplan-Meier法分析不同miRNA Let-7表达水平与患者生存时间关系、Cox回归模型对影响EA预后的危险因素进行分析;结果 74例检测样本中,病例组的miRNA Let-7表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(t=3.232,P<0.05);且病例组中,复发患者的miRNA Let-7表达明显低于未复发患者;绘制miRNA Let-7预测EA发生的ROC曲线分析显示,当约登指数最大时,对应的miRNA Let-7值为0.831,其诊断灵敏度为0.881,特异度为0.95;EA患者中miRNA Let-7的表达与肿瘤的临床分期、肌层浸润、淋巴结转移及复发情况有关(均P<0.05);由Log-rank检验可见,临床分期、肌层浸润深度、淋巴结转移情况以及miRNA Let-7表达水平与患者的预后生存相关(均P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线图可见miRNA Let-7低表达组的生存时间显著低于高表达组(P<0.05);多因素Cox风险分析结果显示,肿瘤的组织学级别、淋巴结转移以及miRNA Let-7表达水平是影响EA患者生存时间的独立危险因素。结论 miRNA Let-7的表达水平与Ⅰ型子宫内膜癌的恶性程度有关,并且是患者复发的独立危险因素,对于评估患者的预后复发具有较好的敏感度和特异度,有可能成为Ⅰ型子宫内膜癌鉴别诊断和复发的新标记物。

血清标志物联合miRNA-let-7对胶质母细胞瘤化疗效果及预后的评估价值

目的分析miRNA-let-7联合血清标志物对多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者化疗效果和预后的预测效果。方法收集25例GBM患者临床资料。纳入同期20名健康志愿者作为对照组。收集患者空腹血清样本,通过实时定量PCR分析血清样本中let-7b、let-7d以及let-7e水平。结果与对照组相比,GBM组患者外周血中let-7b(192.50±18.71 vs.98.13±11.68,t=6.42,P<0.0001)、let-7d(82.97±14.14 vs.44.62±6.83,t=2.41,P<0.05)以及let-7e(139.60±14.62 vs.75.86±9.72,t=5.45,P<0.001)水平显著降低。let-7b、let-7e水平在≥60岁、肿瘤大小≥5 cm、非额颞叶病变、ECOG为2、仅接受活检的GBM患者中显著降低(P<0.05)。此外,Let-7b、Let-7e水平在不同治疗反应的GBM患者中差异有统计学意义(P<0.05)。let-7b和let-7e高表达GBM患者的OS显著高于let-7b和let-7e低表达患者(P<0.05)。结论血液样品中的let-7b、let-7e表达可用于监测GBM、预测患者对治疗的反应和预后。

let-7 miRNA基因标志物在甲状腺癌中的表达分析

目的探讨let-7 miRNA基因标志物在甲状腺癌组织中的表达及诊断意义。方法选取临床确诊的26例甲状腺癌患者,提取患者的甲状腺癌组织和甲状腺癌旁组织,并采用Real-time PCR检测技术检测患者的甲状腺癌组织和甲状腺癌旁组织中let-7 miRNA基因标志物的含量,并进行比较。结果应用Real-time PCR检测技术发现,甲状腺癌组织中的平均let-7 miRNA表达为(0.71±0.19),显著低于甲状腺癌旁组织的(1.35±0.32),比较差异具有统计学意义(t=8.769,P<0.05)。结论 let-7 miRNA在甲状腺癌发生中具有重要意义,可成为甲状腺癌新的基因诊断标记物以及基因治疗靶点。

黄芪总黄酮对特发性肺纤维化miRNA-21、let-7 d及TGF-β/smad信号干预作用

目的：研究黄芪总黄酮对BLM诱导的肺纤维化模型miRNA-21、let-7 d表达水平和TGF-β1/smad信号干预作用。方法：C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪总黄酮组。模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注博莱霉素（10 mg/kg）,假手术组予等量生理盐水,造模后治疗组予黄芪总黄酮（43 mg/kg）灌胃,假手术组和模型组与等量生理盐水灌胃。第28天取材,进行HE、Masson染色分析肺组织形态及胶原蛋白表达水平,羟脯氨酸含量测定胶原蛋白含量,realtime-PCR分析miRNA-21、let-7 d表达变化,Western-Bloting检测TGF-β/smad信号及EMT相关蛋白表达。结果：BLM诱导肺纤维化miRNA-21明显上调,而let-7 d下调,在此过程中信号蛋白smad7表达增强mad3磷酸化水平减弱,EMT标记蛋白α-SMA表达增高而E-cadherin减少,黄芪总黄酮对上述改变具有逆转作用,但对let-7 d表达无影响。结论：黄芪总黄酮可通过抑制miRNA-21,增加smad7表达,使TGF-β1/smad激活能力下降,抑制肺纤维化EMT作用。

MiRNA let-7a对人喉鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨miRNA let-7a调控高迁移率族蛋白2(HMGA2)对人喉鳞癌细胞株TU212增殖的影响。方法合成let-7a模拟体(let-7a mimics)并采用阳离子脂质体法瞬时转染入喉癌TU212细胞,裸鼠皮下注射TU212细胞,构建裸鼠移植瘤模型。RT-qPCR和Western blot法分别检测转染后TU212细胞及移植瘤内let-7a和HMGA2的表达。结果在过表达let-7a的喉癌TU212细胞中,HMGA2的转录和翻译水平下调,细胞增殖能力降低。体外成瘤实验证实,与let-7a NC组和空白对照组相比,转染let-7a mimics的喉癌细胞TU212成瘤组织的质量和体积均显著下降;let-7a过表达的TU212成瘤组织中HMGA2的mRNA和蛋白水平均明显下调。结论let-7a能显著抑制HMGA2的mRNA和蛋白表达,进而显著抑制喉癌细胞的增殖。

miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脊髓NF-200、GFAP表达的影响

目的:通过观察miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复的作用,探讨miRNA let-7b在损伤脊髓修复中的作用和机制。方法:60只成年SD大鼠分为对照组、BMSCs组、miRNA组,每组20只。采用改良Allen's法制备脊髓损伤模型。造模后1周,BMSCs组行BMSCs移植,miRNA组移植miRNA let-7b慢病毒载体感染的BMSCs,对照组注射生理盐水。移植后第3天至8周,按BBB标准量表对大鼠后肢运动功能进行评分,用免疫组化方法检测脊髓中神经丝蛋白-200(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:实验时间内,各组大鼠BBB评分和脊髓NF-200表达持续升高;不同时间点BBB评分和脊髓NF-200表达以miRNA组最高,BMSCs组次之,对照组最低(P<0.05)。移植后各组脊髓GFAP表达均呈持续性增高,各时间点GFAP阳性表达面积以对照组最大,BMSCs次之,miRNA组最小(P<0.05)。结论:miRNA let-7b可能通过促进BMSCs分化为神经元样细胞、抑制脊髓损伤后反应性胶质细胞的增生及胶质瘢痕形成等机制促进损伤后的神经功能恢复。

miRNA Let-7与乳腺癌预后的相关性分析

目的探讨Let-7家族各成员与乳腺癌患者预后相关性,寻找更有效的乳腺癌防治分子靶标。方法利用KaplanMeier plotter在线数据库分析Let-7家族各成员(Let-7a、7b、7c、7d、7e、7f、7g、7i、miR-98、miR-202)表达与乳腺癌患者总生存期(OS)及临床病理参数的相关性,并得出相应的危险比(HR)、95%置信区间(CI)和P值。结果 Let-7a、Let-7b、Let-7c、Let-7e、Let-7f、Let-7g、miR-98高表达或miR-202低表达的患者有较好的OS(P<0.05);病理特征分析显示,Let-7a、Let-7b、Let-7f、Let-7g、miR-98、miR-202的表达与疾病临床分期存在相关性(P<0.05)。Let-7a、Let-7b、Let-7c、Let-7e、Let-7f、Let-7g、miR-98和miR-202与淋巴结表达存在相关性(P<0.05);三阴乳腺癌患者OS则与Let-7b、Let-7c、Let-7g、miR-202表达显著相关(P<0.05)。结论 Let-7与乳腺癌患者OS显著相关,各成员在乳腺癌中的预后判断中具有不同的价值,其中Let-7b、Let-7g、miR-202在不同临床参数及三阴乳腺癌中都显示出与预后密切相关,更有望成为乳腺癌防治靶标。

miRNA let-7a调控HMGA2表达抑制喉癌细胞增殖并促进其凋亡的作用机制

目的:探讨在喉癌细胞株Hep-2中上调miRNA let-7a的表达对高迁移率族蛋白(high mobility group A,HMGA2)的作用机制以及对喉癌细胞增殖的影响。方法:合成miRNA let-7a模拟体(let-7a mimics)并采用阳离子脂质体法转染入Hep-2内;分别用流式细胞术和MTT法检测let-7a高表达对细胞凋亡和增殖的影响;实时荧光PCR(Real-time q PCR)和Western blot检测上调let-7a后对HMGA2表达的影响。结果:本实验将let-7a mimics成功转染入Hep-2内,流式细胞术及MTT法检测显示Hep-2内let-7a的表达上调会抑制喉癌细胞的增殖,促进喉癌细胞的凋亡。RT-q PCR检测显示:let-7a mRNA在空白组和阴性对照组(NC组)的表达水平明显低于实验组(P<0.05);HMGA2 mRNA在空白组、NC组的表达水平明显高于实验组(P<0.01)。Western blot检测细胞中HMGA2蛋白的表达显示:实验组HMGA2蛋白的表达量明显低于空白组和NC组(P<0.01)。上述实验中空白组与NC组之间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:let-7a能够显著下调HMGA2基因和蛋白的表达,抑制喉癌细胞的增殖,促进其凋亡,为喉癌基因靶向治疗提供坚实的理论基础。

Let-7 miRNA家族与胃癌的研究进展

胃癌发病率较高,对人们的健康造成了严重威胁。其早期临床症状并不典型且诊断率低,患者出现明显临床症状时多数已发展为进展期或晚期,此时手术效果及预后不理想。早期胃癌的治疗主要以手术根治为主,而进展期胃癌还需要联合化疗等方式进行后续治疗,但由于化疗药物多耐药,导致预后不佳。miRNA广泛参与了细胞的一系列重要生理活动,包括细胞的增殖、凋亡、发育、分化和代谢等,与胃癌及各类肿瘤的发生发展和预后密不可分。Let-7 miRNA家族是第2个被发现的miRNA。研究发现其在胃癌及各类肿瘤中低表达,但其调控机制尚不清楚。因此,明确Let-7 miRNA家族与胃癌的关系对胃癌的诊断治疗及预后有着十分重要的作用。

MiRNA Let-7和Lin28在散发性听神经瘤中的表达及意义

目的研究微小RNA Let-7与Lin28在散发性听神经瘤中的表达及二者之间的关系,探讨其对肿瘤进展可能的影响。方法收集18例经过术后病理证实的散发性听神经瘤组织作为实验组,7例正常胃迷走神经为对照组。采用RT-PCR、免疫组织化学染色方法,检测Let-7d和Lin28A/B mRNA的表达,以及Lin28蛋白的表达。结果 RT-PCR检测显示,Let-7dmRNA表达量在听神经瘤组织显著高于对照神经组织(P<0.001),Lin28A/B mRNA表达量在听神经瘤组织显著低于对照组织(PLin 28A=0.004,PLin28B=0.001)。在听神经瘤组织中,Let-7d与Lin28A/B mRNA的表达存在负相关关系(r=-0.671,P=0.002;r=-0.662,P=0.003)。免疫组织化学检测显示在听神经瘤与正常神经组织中均未发现Lin28蛋白阳性染色。结论在听神经瘤的生长及恶性转化抑制机制中,以微小RNA为主导的Let-7d/Lin28双向负反馈调节可能起重要作用。

鸭miRNA let-7-5p的分子生物学特征及功能预测

let-7通过影响靶基因的表达水平而参与细胞的生长、分化、凋亡等。为了研究let-7-5p在鸭上的序列特征、表达模式及其对鸭骨骼肌发育的可能作用,本文应用本课题组前期mi RNA测序数据,通过生物信息分析技术和分子生物学技术,研究了鸭let-7-5p序列特征、表达模式、其靶基因及靶基因的功能注释。结果如下:1鸭let-7-5p成熟序列是TGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT;2鸭let-7-5p在北京鸭孵化第11天(E11)至E27胸肌内的表达量逐渐增加。组织间表达模式显示,在鸭E27心脏内的表达量最高(3.33),在肝脏、皮脂、肌胃、小肠和腹脂的相对表达量较低;3鸭let-7-5p靶基因的GO条目中许多条目与骨骼肌发育密切相关。研究结果能为进一步研究let-7-5p对鸭骨胳肌发育的作用奠定基础。

食管鳞癌中microRNA let-7a-3甲基化与IGF-Ⅱ的相关性

目的探讨食管鳞癌组织中microRNA let-7a-3甲基化状态与血浆中类胰岛素样生长因子2(Insulin like growth factor 2,IGF-Ⅱ)表达的相关性。方法采用甲基化特异性PCR法(Methylation specific PCR,qMSP)检测83例食管癌及相对应的癌旁正常组织中let-7a-3甲基化状态,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中IGF-Ⅱ的表达水平。结果83例食管鳞癌患者癌组织中的microRNA let-7a-3甲基化程度显著高于癌旁正常组织(P<0.001)。83例食管鳞癌患者血浆中IGF-Ⅱ的表达水平与let-7a-3基因的甲基化程度总体上呈正相关,具有统计学意义(r=0.600,P<0.001)。结论microRNA let-7a-3可能通过对下游分子的甲基化调控参与食管鳞癌的发生发展,这对了解食管鳞癌形成的机制具有重要意义,可为食管鳞癌的诊断和预后提供依据。

加味七方胃痛颗粒通过MicroRNA let-7c促进胃癌细胞凋亡机制研究

目的探讨加味七方胃痛颗粒抗胃癌机制。方法细胞随机分为6组,分别加入对应的血清及慢病毒进行干预,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭,以及miR-let-7c、MTDH、ERK、NF-кB、CyclinD1的水平。结果相较于空白组,CCK8实验中,含药血清组与miR-let-7c mimics组可抑制细胞增殖,miR-let-7c inhibitor组可促进细胞增殖;流式细胞术实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可促进细胞凋亡;细胞划痕实验中含药血清组与miR-let-7c mimics组抑制细胞迁移,miR-let-7c inhibitor组促进细胞迁移;Transwell侵袭实验中,含药血清组与miR-let-7c mimics组抑制细胞侵袭,miR-let-7c inhibitor组促进细胞侵袭;RT-PCR实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可降低MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平,增加miR-let-7c水平;miR-let-7c inhibitor组可增加MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的表达水平,降低miR-let-7c水平;Western Blot实验中,含药血清组和miR-let-7c mimics组可降低MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平,miR-let-7c inhibitor组可增加MTDH、ERK、CyclinD1、NF-κB的水平。结论加味七方胃痛颗粒可促进胃癌细胞凋亡,机制可能是通过上调miRNA-let-7c靶向下调MTDH水平,从而抑制ERK/NF-кB通路的表达实现的。

稳定表达猪miRNA let-7c细胞株的建立及其对CSFV的调控作用

【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片段,连接到表达载体pGenesil-1.1-dBm2上,构建重组质粒pGene-pre-let-7c,采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),经G418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验,检测CSFV的复制情况。用MTT比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因,并构建了pGene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染SUVEC细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调CSFV在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调CSFV的RNA复制水平。

miRNA Let-7对神经母细胞瘤细胞的抑制作用及其机制

为研究miRNA Let-7神经母细胞瘤(NB)的抑制作用,本研究采用小RNA干扰技术(siRNA)降低miRNA Let-7的表达,PCR法检测miRNA Let-7表达,Western blotting检测相关凋亡蛋白的表达,采用吸光度值反映细胞的增殖情况,Transwell方法检测细胞转移。结果显示,与未转染组和si-NC(携带空质粒的干扰RNA)转染组细胞相比,siRNA-Let-7转染组细胞的数量增多,Cleaved casp-3、Bax mRNA及其蛋白显著增高,而Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低。结果表明,miRNA Let-7能够通过抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力和促进细胞的凋亡,进而对神经母细胞瘤有重要抑制作用。

miRNA let-7对疾病调控机制的研究进展

微小RNA(mi RNA)是一种高度保守的单链小分子RNA,具有调控组织细胞的生长发育、分化以及凋亡的作用。let-7 miRNA家族是目前研究最为广泛的mi RNA家族。let-7能够在人体外周血以及体液中稳定存在,其表达以及平衡状态的维持受到调控因子的相关作用来实现。这些调控通路的异常将导致let-7家族的表达异常,就从而导致肿瘤,高血压,癫痫,心血管等疾病的发生。因此,监测let-7表达水平可预防、治疗与其相关的疾病。本文主要综述了mi RNA let-7对这些疾病的调控机制的研究进展。

宫颈鳞癌患者血浆miRNA let-7a-3p表达及其临床意义

子宫颈鳞癌在妇科恶性肿瘤最常见,病死率也高,每年全球新发病例超45万之多,是严重威胁女性健康的恶性疾病之一,近年研究发现宫颈癌发病逐渐趋于年轻化[1],其也是我国重点防治癌症之一。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的发展过程,因此尽早诊断,及时采取相应治疗措施,是降低宫颈癌死亡率以及改善患者生活质量的关键。人乳头状瘤病毒(HPV)感染,尤其是高危型HPV的感染是导致宫颈癌发生的主要危险因素。

U6和let-7a作为定量检测miRNAs的内参在大鼠软骨中稳定性的比较

目的比较U6和let-7a两种内参在RT-qPCR方法检测大鼠股骨头软骨样本microRNAs(miRNAs)的稳定性。方法取软骨生成过程的新生(D0)、断乳(D21)、性成熟(D42)3个时间节点的雌性近交系DA大鼠股骨头软骨,提取总RNA,用RT-qPCR方法分别在U6和let-7a两种内参体系下,检测miR-1、-25、-26a、-140、-146a、-150、-181a、-195、-223、-337等的表达,并与课题组前期获得的二代测序绝对定量结果进行比较,综合评价两种内参的稳定性。结果在D42样本中U6(P=0.045)、let-7a(P=0.021 5)的相对值出现了显著性差异;在两种内参体系中miR-26a、-140、-223、-337的表达趋势相同,miR-1、-146a差异无统计学意义,miR-25、-150、-181a、-195都出现了显著性差异(P<0.05)。综合二代测序绝对定量结果比较,let-7a稳定性优于U6。结论 let-7a稳定性优于U6,更适合做软骨miRNA定量的内参。

miRNA let-7a和miRNA let-7f早期诊断肝癌的临床价值

目的探讨原发性肝癌患者miRNA let-7a、miRNA let-7f的表达。方法收集龙岗中心医院院及合作医院2014年6月至2016年3月接受肝癌切除手术的40例原发性肝癌患者。采用RT-PCR方法检测miRNA let-7a、miRNA let-7f在血清、肝癌/癌旁组织中的表达水平。选择同期该院体检的40例健康者作为健康对照者。比较肝癌患者和健康对照者血清miRNA let-7a、let-7f的表达差异。结果肝癌癌变组织miRNA let-7a[(0.18±0.04)×103]、miRNA let-7f[(0.19±0.01)×103]分别较癌旁组织[(1.52±0.11)×103、(0.67±0.10)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01);肝癌患者血清miRNA let-7a[(0.22±0.06)×103]、miRNA let-7f[(0.15±0.04)×103]较健康对照者[(1.13±0.21)×103、(0.62±0.12)×103]低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miRNA let-7a、miRNA let-7f在肝癌患者病变组织及血清中异常偏低表达,可作为早期诊断肝癌的重要标志物,为临床诊断提供参考。