多纹钱蝶鱼源海豚链球菌的分离鉴定及灭活疫苗的免疫效果

为探究养殖的多纹钱蝶鱼(Selenotoca multifasciata)病害频发的原因,建立有效的病害防控方法,对暴发于海南养殖场的多纹钱蝶鱼病害开展调查并进行灭活疫苗的研制及免疫保护效果评估。分离到2株病原菌LSSM和DFSM,经形态学和16S rDNA序列分析,将病原鉴定为海豚链球菌(Streptococcus iniae)。将这2株菌与实验室收集保藏的2株鱼源海豚链球菌(菌株GXTO和GXAS)进行了血清型鉴定和耐药性、致病性分析,制备了灭活疫苗并评价了疫苗的免疫保护效果。研究表明:4株海豚链球菌鉴定为血清Ⅰ型。所有菌株均对青霉素类、头孢类、四环素等23种抗生素高度敏感、对丁胺卡那耐药,其中海南株LSSM、DFSM对庆大霉素和卡那霉素抗生素耐药,广西株GXTO和GXAS对庆大霉素和卡那霉素敏感。DFSM、GXTO和LSSM对多纹钱蝶鱼的半数致死量(LD_(50))分别为7.20×10^(2)、2.72×10^(3)和3.40×10^(6) CFU/尾,GXAS未显示毒力。分别制备3株毒株(DFSM、GXTO和LSSM)的灭活疫苗,通过腹腔注射途径免疫多纹钱蝶鱼,各组免疫鱼在同源菌株攻毒后,获得的免疫保护率分别为84.6%~85.7%、69.2%~71.4%和33.3%~40.0%;此外,DFSM免疫鱼在异源毒株LSSM和GXTO攻毒后,获得的交叉免疫保护率分别为86.7%和100%。本研究确定了海豚链球菌是海南养殖的多纹钱蝶鱼病害频发的病原,使用DFSM株制备的海豚链球菌灭活疫苗对多纹钱蝶鱼有良好的免疫保护效果。

栽培时间对香樟半致死温度及抗寒性的影响

为探索引种栽培对香樟(Cinnamomum camphora(L.)Presl.)抗寒性变化的影响,保证香樟安全越冬,在低温胁迫时,观察香樟形态特征,并测定相对电导率的变化,利用逻辑斯蒂(Logistic)方程拟合相对电导率与温度之间的函数关系,计算出香樟半致死温度,根据半致死温度采取相应的抗寒栽培措施。结果表明:①从形态学观察发现,胁迫温度高于-10℃时,香樟未有冻害发生,叶片和枝条均为绿色;在-10℃时,香樟枝条和叶片冻害形态变化有明显差别,叶片萎蔫且由绿色变为褐色,皮层变为褐色,变褐色的程度从大到小依次为栽培时间1、5、10、15 a,横切面髓部、木质部完好;在-15℃时,所有香樟枝条都表现为严重冻害,栽培1、5、10、15 a的香樟冻害指数分别为78.94%、72.36%、68.65%、61.36%,随着栽培时间的增加,冻害指数不断降低;-20℃时,所有枝条发生不可逆冻害,冻害指数均为100%。②随着栽培时间的增加,相同胁迫温度的香樟相对电导率下降,呈近似“S”形曲线,栽培1、5、10、15 a的香樟半致死温度分别为-10.26、-11.04、-11.63、-12.39℃,栽培15 a香樟较1 a香樟半致死温度降低了2.13℃。因此,驯化栽培可以提高植物的抗寒性,根据半致死温度采取抗寒栽培措施,可减少香樟冻害的发生。

2个转基因品种玉米对草地贪夜蛾种群增长的影响

草地贪夜蛾[Spodoptera frugiperda(Smith)]于2018年年底开始侵入我国,对玉米等农作物的潜在危害巨大,而我国对转基因玉米研发与商业化正在有序推进。鉴此,以2组转基因品种玉米双抗12-5(含Cry1Ab+Cry2Aj+G10evoepsps)及其对照品种宏硕899,DBN9936(含Cry1Ab+epsps)及其对照品种Nonghua 816(含epsps)为材料,研究其对草地贪夜蛾存活率、发育速率、繁殖率等生命参数的影响。结果表明:取食转基因玉米品种双抗12-5和DBN9936的草地贪夜蛾幼虫累计致死率分别为19.07%和80.27%,而对照品种分别为5.46%和54.17%,其中转基因玉米品种DBN9936与对照品种Nonghua 816间差异显著。从1龄幼虫开始喂养转基因玉米DBN9936,2龄幼虫存活率仅为31.11%(对照为75.56%),而喂饲双抗12-5存活率达87.78%(对照为96.67%);若从4龄幼虫开始喂养,其5龄幼虫的存活率达93.33%(对照为100%),而双抗12-5为94.44%(对照为100%)。取食2转基因玉米品种的草地贪夜蛾幼虫-蛹发育历期明显长于对照组,种群趋势指数I由大到小依次为宏硕899(235.24)、双抗12-5(81.64)、Nonghua 816(80.47)和DBN9936(15.74)。

温度对织锦巴非蛤稚贝生存和生长的影响

采用实验生态学方法,观察了温度对织锦巴非蛤(Paphia textile)稚贝生存和生长的影响,以期为该贝中间培育场地的选择提供科学依据。结果表明:1)稚贝的48 h半致死低、高温分别为4.95、33.39℃;96 h的半致死低、高温分别为8.68、32.49℃;15 d半致死低、高温分别为12.09、31.02℃;2)在持续15 d的实验中,10℃时,稚贝在第10天全部死亡;32℃时,第15天的成活率仅为16.67%;3)以稚贝在15 d内50%个体稳定存活的高、低端温度作为生存临界温度,稚贝适宜生存温度范围为12.09~31.02℃;以成活率最高的一组或几组(组间差异不显著)为依据,稚贝最适生存温度范围为14~28℃;4)以平均日增长达到最佳组的30%所对应的高、低端温度为依据,稚贝适宜生长温度范围为16.62~31.14℃;以平均日增长最高的一组或几组(组间差异不显著)为依据,最适生长温度范围为24~28℃,最适生长温度在适宜生存温度范围内明显偏向高温端。综上,推测织锦巴非蛤稚贝适宜在南方海区潮下带水温不超过31℃的海底底播中培。

氨磺灵诱导人参果“圆果”多倍体初探

为探寻高效的人参果多倍体诱导条件,以“圆果”为供试品种,以0.02%的氨磺灵溶液为诱变剂,考察不同处理时间(3、6、9、12 h)对人参果组培苗死亡率和变异情况的影响,以变异植株的形态指标、叶片气孔状态和染色体倍性为指标确定最佳处理时间。结果表明:当氨磺灵浓度为0.02%时,随着处理时间的延长,人参果组培苗的死亡率逐渐增加,而变异率逐渐降低;以处理3 h的组培苗死亡率最低,为20%,变异率最高,为58.33%;经计算,0.02%的氨磺灵溶液对人参果“圆果”组培苗的半致死时间为19.40 h;在试验设置的处理时间(3~12 h)内,获得的变异植株呈现出植株矮小、茎段增粗、节间缩短、叶片大且增厚、颜色较深、根增粗、出现变形叶、气孔较二倍体大、单位面积上气孔数量变少等特征;经流式细胞仪分析初步判定变异植株为多倍体。综合结果表明,在0.02%氨磺灵溶液中浸泡3 h,诱导人参果“圆果”组培苗产生多倍体新种质的效果最好。

户太8号葡萄抗寒性初步研究

以户太8号葡萄一年生休眠枝条为材料,观测在模拟梯度低温胁迫后,恢复到室温状态,观察测定葡萄枝蔓的形态变化和生理指标变化,评判户太8号葡萄的抗寒性。结果表明,在低温胁迫下,随着温度的降低,户太8号葡萄枝蔓的电解质渗出率、组织褐变率和脯氨酸含量逐渐增大,丙二醛含量先升后降,得出户太8号葡萄枝条的半致死温度为-16.92℃。

聚维酮碘对青海湖裸鲤(♀)×花斑裸鲤(♂)杂交幼鱼的急性毒性和耗氧率影响

研究了聚维酮碘对青海湖裸鲤(♀)×花斑裸鲤(♂)杂交幼鱼(体长7~8 cm,体质量15.34 g±0.23 g)的急性毒性,并测定了不同浓度聚维酮碘对青海湖裸鲤(♀)×花斑裸鲤(♂)杂交幼鱼耗氧率的影响。结果表明:(1)在(19±1)℃水温条件下,聚维酮碘对青海湖裸鲤(♀)×花斑裸鲤(♂)杂交幼鱼24、48、72和96 h的半致死浓度(LC_(50))分别为3.37、3.15、2.75和2.51μmol/L,安全浓度为0.84μmol/L;(2)在安全浓度(0.84μmol/L)和生产上使用浓度(0.22μmol/L)下,青海湖裸鲤(♀)×花斑裸鲤(♂)杂交幼鱼的耗氧率分别为0.340和0.293 mg(/g·h),窒息点分别为0.417和0.383 mg/L,均显著高于不用聚维酮碘时的耗氧率(0.243 mg(/g·h))和窒息点(0.363 mg/L)(P<0.05)。

绿僵菌相容性杀虫剂筛选及混用防治椰心叶甲

根据6种常用杀虫剂的常规使用浓度、亚致死浓度、次亚致死浓度对金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae M09菌株菌落生长的影响结果，筛选了与绿僵菌相容的杀虫剂，并选用适当剂量的杀虫剂与绿僵菌混用，防治椰心叶甲Brontispa longissima．结果表明，供试的6种杀虫剂对绿僵菌生长有不同程度的抑制作用，其中杀虫单的抑制作用最弱，亚致死剂量药剂5d后对菌落生长的抑制率为15％，10d后下降到5．90％，次亚致死剂量5d和10d对菌落生长的抑制率均低于5％，与绿僵菌有较好的相容性．低剂量杀虫单与绿僵菌混用防治椰心叶甲成虫具有协同作用，亚致死剂量和次亚致死剂量的杀虫单和绿僵菌混用，防治椰心叶甲的致死率分别达93．33％和81．11％，要明显高于单独使用绿僵菌（75．56％）和单独使用亚致死和次亚致死剂量杀虫单（10％～30％），具有较好的应用前景．

不同温湿度下白僵菌对红缘天牛幼虫致病力的研究

为了寻找白僵菌(Beauveria bassiana)对红缘天牛(Asias halodendri)的最佳作用条件,测定不同的温、湿度条件下,白僵菌作用于红缘天牛幼虫后,幼虫的死亡情况.结果表明:(1)31℃是白僵菌感染红缘天牛幼虫的最佳温度.该温度下,幼虫在5 d的校正死亡率高达77.78%,致死速率快,LT50仅为0.121 d,僵虫率为46.67%,显著高于其他各组,温度增高或降低,都会使致死速率和僵虫率降低;(2)相对湿度>90%时,白僵菌对红缘天牛幼虫的致死效果最好,此时的校正死亡率和僵虫率分别为100%和63.33%,致死速率也最快,LT50为1.017 d,相对湿度降低时,幼虫的校正死亡率和僵虫率显著降低.

高静压对蜡样芽孢杆菌的致死与损伤效应

本试验采用响应曲面法的Box-Behnken设计,研究了高静压处理对蜡样芽孢杆菌生命活动的影响。结果表明压力处理导致了蜡样芽孢杆菌的致死作用与损伤效应。利用Design Expert软件建立了致死率的响应模型,Y=62.8+27.2x1+7.3x2+3.2x3+1.0x21+2.6x22+1.0x23-2.0x1x2-1.0x1x3-0.7x2x3。方差分析表明模型达到极显著水平,模型的系数显著性检验提示压力、温度、时间以及压力与温度的交互作用对致死率有显著影响。试验还运用VITEK细菌鉴定方法快速检测了蜡样芽孢杆菌压致生理生化损伤,结果证明压力导致菌体对外界营养分子利用以及药物敏感性等方面的特性发生了改变。

甘肃省几种昆虫病原线虫抗干燥能力测定

对甘肃省8种昆虫病原线虫进行了抗干燥力测定,结果表明:昆虫病原线虫种类不同其抗干燥能力也不同。在25℃、相对湿度50.5%的小空间控制器中分别处理5 h、7 h和9 h后,斯氏线虫仍具有较高的存活率,而异小杆类线虫几乎全部死亡。经9 h干燥处理后锯蜂线虫S.kraussei存活率最高(80.3%),其次为S.bicornutum(73.7%),加水复苏后2种线虫对大蜡螟的致死率均为100%,侵入率分别为16.9%和16.4%。

昆虫病原线虫抗干燥能力研究

对１５种２４个品系的昆虫病原线虫进行抗干燥能力研究，结果表明，昆虫病原线虫种类不同，其抗干燥能力也不同。在２５℃、相对湿度５０．５％的小空间控制器中处理９小时后，Ｓｔｅｉｎ┐ｅｒｎｅｍａｃａｒｐｏｃａｐｓａｅ仍具有较高的存活率，其余种类几乎全部死亡。同一种线虫的不同品系，其抗干燥能力也存在差异。在Ｓ．ｃａｒｐｏｃａｐｓａｅ的４个品系Ａ２４、Ｂｅｉｊｉｎｇ、ＣＢ┐１６和Ｍｅｘ中，ＣＢ┐１６具有较高的抗干燥能力，经干燥处理后其存活率最高，达８５．３％，加水复苏后的线虫对大蜡螟的致死率为１００％，侵入率高达１９．９％％。

枯草芽孢杆菌NCD-2γ射线辐射诱变研究

[目的]研究60Coγ射线对枯草芽孢杆菌NCD-2致死率和突变率的影响。[方法]采用100～2 000 Gy不同剂量γ射线辐射诱变,通过平板对峙法和牛津杯法筛选菌株。[结果]得到辐射剂量与致死率和突变率的关系曲线;致死率随着辐射剂量增大而升高,升高速度先快后慢,在1 000 Gy辐照剂量下致死率达到99.50%;突变率随着辐射剂量的增大先升高后降低,在400～700 Gy时产生的突变率高,均高于15%。辐射诱变的最佳条件为500 Gy,平均致死率为77.71%,突变率为26.51%。[结论]为枯草芽孢杆菌60Coγ射线辐射诱变提供了参考依据。

柞树皮对脂多糖和D-氨基半乳糖诱导败血症休克小鼠的保护作用

目的探讨柞树皮二氯甲烷提取物对脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导败血症休克小鼠的保护作用。方法 50只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组,模型对照组,阳性对照组,高剂量给药组和低剂量给药组。两个剂量给药组分别按300,100 mg/kg腹腔注射柞树皮二氯甲烷提取物;阳性对照组按30 mg/kg腹腔注射地塞米松;正常对照组和模型对照组以等体积生理盐水灌胃,30 min后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射20μg/kg LPS和700 mg/kg D-GalN,比较各组血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活性和一氧化氮(NO)的含量,以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,同时每天观察小鼠的死亡率至第2天。结果柞树皮二氯甲烷提取物两个剂量给药组明显提高小鼠的存活率,显著抑制小鼠血清AST和ALT含量的升高(P<0.01),降低血清NO含量(P<0.01),同时明显升高小鼠肝组织SOD活性(P<0.05)、降低MDA含量(P<0.05)。结论柞树皮二氯甲烷提取物通过降低NO含量、肝保护作用,从而提高败血症性休克小鼠的存活率。

化学诱变法选育D-核糖高产菌株工艺研究

研究了以硫酸二乙酯(DES)为诱变剂,诱变生产D-核糖的转酮醇酶缺陷型枯草芽孢杆菌HG02,考察了不同诱变剂用量对菌体致死率及其生产能力的影响。得出了以DES诱变该菌株的致死率曲线及最佳的诱变条件:诱变剂用量0.8%,诱变时间15min。该诱变条件下对大量的突变株进行筛选,得到D-核糖高产菌HG03,其D核糖产量较出发菌株提高81.69%。达到5.1g/100mL。

6株牛支原体分离株对鸡胚和小鼠的致病性研究

为通过复制不同牛支原体(Mycoplasma bovis)感染模型,筛选出毒力较强的M.bovis分离株,本研究采用等浓度的6株M.bovis分离株(W70、1738、677、Q1、Q3、JX02)感染7日龄健康鸡胚和6周龄～8周龄SPF级BALB/c小鼠,观察并比较各组受试动物死亡情况及病理剖检变化,取死亡鸡胚尿囊液或卵黄液,以及小鼠肺组织进行病原学分离培养和PCR鉴定。实验结果表明:各感染组BALB/c小鼠虽然出现一定程度的体重增长抑制,但小鼠并无任何临床呼吸道症状和病理剖检变化,并且病原学分离培养及PCR鉴定结果也均为阴性。在鸡胚感染试验中,6株M.bovis分离株对鸡胚表现出较好的感染性和致死性。感染组鸡胚致死率与对照组比较差异极显著(p<0.01),而6个分离株间鸡胚致死率也表现出显著差异(p<0.01)。其中,以W70株感染后鸡胚死亡率最高,达63.3%;677株感染后死亡率最低,仅为20%,鸡胚死亡情况大多发生在感染后一周内,而后期仅有零星死亡。综合上述实验结果,初步筛选出W70株、1738株、Q1株、Q3株为毒力相对较强的分离株;与此同时,BALB/c小鼠的建模还需进一步研究。

超声波对酿酒酵母诱变作用的初探

通过利用现有超声波仪器对酿酒酵母进行诱变作用试验,初步探讨了超声波对酿酒酵母致突变的因果效应.试验结果表明,在相同的时间内,超声波频率越高对试验菌株的致死率越高;同一频率,超声波辐射时间增加也可使试验菌株的致死率增高,同时经过诱变处理后的菌株其生理生化特性也有变化.

白芷对败血症性休克小鼠的保护作用

目的研究白芷对脂多糖和D-氨基半乳糖诱导败血症性休克小鼠的保护作用。方法50只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组,模型对照组,阳性对照组,给药组。给药组分别按300,100 mg/kg腹腔注射白芷提取物,阳性对照组按30mg/kg腹腔注射地塞米松;正常对照组和模型对照组腹腔注射等体积生理盐水,30 m in后,除正常对照组外,其余各组均腹腔注射脂多糖(36 mg/kg)和D-氨基半乳糖(800 mg/kg)的混合溶液,比较各组门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,同时每d观察小鼠的死亡率至第3天。结果100 mg/kg剂量给药组存活率达到50%,300 mg/kg剂量给药组存活率达到70%,两个剂量给药组降低脂多糖和D-氨基半乳糖诱导败血症性休克小鼠血清AST和ALT含量的升高(P<0.01),同时显著降低TNF-α含量(P<0.001)。结论白芷提取物是通过减少TNF-α的分泌,对肝损伤起保护作用,最终降低脂多糖和D-氨基半乳糖诱导败血症性休克小鼠死亡率。

紫外线诱变酵母1254的致死率及高产富铬酵母菌选育研究

利用紫外线对热带假丝酵母1254进行诱变,结果表明:该菌株最高正突变率(49%)时的致死率为86%,紫外线处理时间为40s。筛选出5株高耐铬能力的酵母菌株,其中Y-1、Y-5的生物量和铬含量分别提高了49%、59%和59%、48%。

爆炸荷载作用下建筑结构倒塌的致命率

比较研究了爆炸荷载和地震荷载引起的建筑结构倒塌失效模式,收集了与建筑结构瞬间发生脆性倒塌失效相类似的事件,采用事件树建立了爆炸荷载作用下建筑结构倒塌引起的内部人员的致命率模型,并对数据库进行分类统计分析,给出了不同建筑结构类型的致命率统计特性和概率分布模型,通过对砖石、砖混和钢筋混凝土结构失效事件的组合统计分析,得到了当前城市主要建筑物在爆炸荷载作用下致命率的评估模型.基于现有数据样本量的观测统计,分析了不同楼层对致命率的影响.结果表明,随着楼层数的增加,建筑结构倒塌的致命率统计均值也相应增加.