磺酸化磁性氮化碳固相萃取-超高液相色谱-串联质谱筛检淡水鱼中孔雀石绿和隐色孔雀石绿

孔雀石绿(MG)及其代谢产物隐色孔雀石绿(LMG)在水产品中禁止检出,但违规使用行为屡禁不止,淡水鱼为抽检不合格率最高的水产品,因此,淡水鱼中MG和LMG的灵敏筛检对水产品食用安全非常重要。该工作研制了磺酸化磁性氮化碳(S-MGCN)材料,在考察其作为优良的磁性固相萃取(MSPE)吸附剂的基础上,以空白样品的加标回收率为指标,对S-MGCN用量、吸附时间、溶液pH、离子强度、洗脱溶液种类和体积等影响因素进行了优化,建立了基于S-MGCN的MSPE方法以提取淡水鱼中的MG及LMG,结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS),进行目标物的灵敏筛检。研究表明,S-MGCN对MG和LMG具有良好的吸附效率(94.2%以上),且净化样品基质效果好。该方法样品前处理简便,有机试剂的使用量少(5 mL),萃取时间短(2 min)。对两种目标物的检出限和定量限分别为0.075μg/kg和0.25μg/kg,灵敏度高于国标法(0.5μg/kg);在0.25~20.0μg/kg内线性关系良好(r>0.998),方法的回收率为88.8%~105.9%,日内和日间的相对标准偏差(RSD)均小于14%,准确度和精密度与国标法相当。最后,通过实际样品的检测验证了该方法的实际应用可行性。该文建立的基于S-MGCN的MSPE方法是一种高效环保的方法,为实际样品孔雀石绿和隐色孔雀石绿的灵敏筛检提供了新的方法学参考。

超高效液相色谱串联质谱法测定水体与底泥中孔雀石绿及隐色孔雀石绿残留

建立了水体和底泥沉积物中孔雀石绿(MG)及其代谢物隐色孔雀石绿(LMG)的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。水样直接利用MCX固相萃取柱富集和净化,底泥采用乙腈和二氯甲烷混合提取液超声提取。采用BEH C18(1.7μm,50 mm×2.1 mm)色谱柱对待测物进行分离,以0.1%甲酸/乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,电喷雾-多反应正离子监测模式检测,内标法定量。方法的线性范围为0.2～100μg/L,r2≥0.995。空白水体在1.0、10.0、100 ng/L 3个加标水平下的平均回收率为77%～90%,相对标准偏差(RSD)为7.2%～11.4%,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.2ng/L和0.4 ng/L。空白底泥样品在0.20、2.00、20.0μg/kg 3个加标水平下,平均回收率为82%～91%,RSD为6.3%～11.6%,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.02μg/kg和0.04μg/kg。该方法灵敏度高、选择性好,适用于实际水产养殖环境水体和底泥中MG和LMG的残留测定。

QuEChERS/UPLC-MS/MS法测定水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物

建立了水产品中孔雀石绿(MG)和结晶紫(CV)及其代谢物隐色孔雀石绿(LMG)和隐色结晶紫(LCV)残留的QuEChERS/UPLC-MS/MS分析方法。样品采用乙腈提取,改进的QuEChERS(EMR-Lipid)分散固相萃取净化,经Agilent Eclipse Plus C_(18)(1.8μm,3.0 mm×100 mm)色谱柱分离,电喷雾串联四极杆质谱多反应监测正离子方式测定。4种分析物在0.2~10.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.997。鱼肉中4种分析物在0.5,1.0,5.0μg/kg加标浓度水平下,回收率为77.1%~106.6%,相对标准偏差(RSD)为1.3%~4.3%。该方法简单、稳定、可靠,能有效去除样品中的蛋白质、脂肪等大分子杂质,可满足水产品中孔雀石绿、结晶紫以及隐色代谢物残留检测与确证的需要。

超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留量

采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定鱼中孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫(LCV)残留。样品加入内标,经乙腈涡旋提取、离心、中性氧化铝柱去除脂肪后,氮吹近干,V(乙腈)∶V(5mmol/L醋酸铵)=50∶50的溶液定容,上机测定。MG、CV及其代谢物在4.0μg/L质量浓度范围内有良好的线性关系,MG、LMG、CV的检出限为0.01μg/kg,LCV的检出限为0.06μg/kg。在空白样品中分别添加0.25、2.0μg/kg混合标准溶液和2.0μg/kg内标溶液进行回收率实验,平均回收率在81.4%～97.8%之间,相对标准偏差RSD(n=6)在5.9%～11.2%之间。对109批次实际鱼样进行检测,4种物质均有不同程度的检出。该方法能够灵敏、准确、可靠的测定鱼中MG、LMG、CV、LCV残留,为鱼类水产品养殖、流通及使用环节的市场监管提供参考依据。

高效液相色谱-串联质谱联用(Finnigan TSQ Quantum)测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量

利用高效液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法快速、准确的同时测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量。鳗鱼样品经乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取,液相色谱分配到二氯甲烷层,MCX阳离子固相萃取小柱净化,浓缩定容。以甲醇和甲酸缓冲溶液为流动相,经C18柱分离后,并用串联质谱在电喷雾(ESI+)-选择反应监测离子(SRM)的模式下,氘代隐性孔雀石绿为内标,进行质谱定性和定量。该方法无需采用传统PbO2氧化柱,检测限(LOD)为0.2μg/Kg,定量下限为0.5μg/Kg,完全可以达到出口欧盟和日本残留限量要求。

增强型脂质快速净化法测定小龙虾中的孔雀石绿及隐色孔雀石绿

目的建立一种以增强型脂质快速净化(EMR-Lipid)进行前处理,以高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定龙虾虾肉及虾黄中孔雀石绿及隐色孔雀石绿的方法。方法样品经混匀后加入乙腈提取,提取液经EMR-Lipid净化浓缩后,以HPLC-MS/MS进行分析。结果在质量浓度0.1~2.0ng/mL范围内线性关系良好,相关系数r>0.999,回收率为86.6%~107.6%,相对标准偏差(RSD)2.0%~10.0%。结论建立的方法可适用于龙虾肉及黄中的孔雀石绿和隐色孔雀石绿测定。

简便快速检测脂质过氧化物

本文设计研究了一种新的脂质过氧化物定量检测的方法。利用无色孔雀绿在血红蛋白存在下迅速被脂质过氧化物氧化呈现蓝绿色,且可在波长630nm进行比色定量。研究发现OD_(630)与OD_(233)之间具有较大的相关性,从而使比色方法有可能代替紫外检测方法。该法线性范围较宽,可达12～800nmol/管。

免标记比色核酸适配体传感器同步快速检测孔雀石绿和无色孔雀石绿

研究以双特异性核酸适配体A3作为传感探针、纳米金(AuNPs)为指示剂、NaCl溶液为聚集诱导剂,构建了一种新型的免标记AuNPs比色生物传感器,可实现水产品中孔雀石绿(MG)和无色孔雀石绿(LMG)的同步、快速、可视化检测。该方法的检测原理是核酸适配体A3对MG和LMG有双特异性识别能力,可作为MG和LMG理想的识别受体。它可通过静电作用吸附到AuNPs表面,保护AuNPs并抑制高盐溶液诱导的聚集,AuNPs溶液颜色不变,即为红色;当加入靶标MG或LMG后,该核酸适配体能够与靶标特异性结合,并从AuNPs表面上解离,AuNPs失去保护作用而在高盐溶液诱导下发生聚集,溶液颜色由红变蓝。根据颜色变化,可通过肉眼定性或通过光谱仪定量分析MG和LMG的残留量。该方法首先将50μL的核酸适配体A3(终浓度150 nmol/L)与150μL的AuNPs(终浓度1.25 nmol/L)混合,室温孵育6 min。随后加入50μL待测液,室温孵育30 min。最后加入50μL NaCl(终浓度150 mmol/L),4 min后观察溶液颜色变化,并分别测定MG和LMG在520 nm和650 nm下的吸光度值。结果表明,在最佳反应条件下,该方法能够特异性检测MG和LMG,而对磺胺嘧啶(SDZ)和硝基呋喃妥因(NFT)无交叉反应;当MG、LMG的浓度为0~17.5μmol/L时,吸光度比值与靶标浓度呈现良好的线性关系,相关系数(R2)分别为0.9938和0.9715。MG和LMG的检出限分别为6.93 nmol/L和6.38 nmol/L,加标回收率分别为88.60%~93.30%和101.80%~107.00%,相对标准偏差(RSD)分别为2.27%~3.55%和2.62%~3.75%。该方法操作简单,快速和灵敏,可为水产品中MG和LMG的同步快速检测提供一种新方法。

介质阻挡放电电离质谱法快速筛查水产品中孔雀石绿及其代谢物

建立了采用介质阻挡放电电离质谱(DBDI-MS/MS)技术对水产品中孔雀石绿(MG)及其代谢物隐色孔雀石绿(LMG)进行快速筛查的方法。样品经提取净化后,在氦气流量为3 L/min、离子源温度为230℃的DBDI离子源条件下,正离子模式下采用多反应监测(MRM)进行质谱检测。在此条件下,MG和LMG在1~20μg/L范围内,相关系数r值分别为0.9951、0.9939,线性关系良好,MG和LMG的检出限均为1μg/kg,样品加标回收率为61.8%~78.4%。该方法样品前处理简便,无需液相色谱分离,耗时短,适用大批量水产品中孔雀石绿非法添加的快速筛查。

养殖用水中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的测定

建立了用高效液相色谱紫外、荧光检测器同时检测养殖用水中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的分析方法。孔雀石绿和结晶紫用紫外检测器588nm波长检测；隐色孔雀石绿和隐色结晶紫用荧光检测器检测，激发波长：265nm，发射波长：360nm。孔雀石绿和结晶紫的线性范围5．0～2500μg／L；隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的线性范围1．0～1000μg／L，四种物质的检出限均为0．5μg／L，回收率均在70％以上，RSD〈15％．此方法也可用于地下饮用水中孔雀石绿、结晶紫、隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的检测。

液相色谱串联质谱法测定水产及其加工品中孔雀石绿

建立了水产及其加工品中孔雀石绿及其代谢产物的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定方法。简化样品前处理步骤,省略液液萃取,减少固相萃取柱。样品采用经酸化乙腈提取,中性氧化铝粉分散固相萃取与阳离子交换柱净化,优化了阳离子交换柱淋洗液和洗脱液,经液相色谱分离,串联质谱多反应监测模式测定,内标法定量。方法的检出限0.2μg/kg,定量限0.5μg/kg,线性范围0.5~20.0 ng/m L,在0.5~2.0μg/kg加标水平下孔雀石绿和无色孔雀石绿平均回收率分别为94.2%和92.0%,相对标准偏差均小于5%。该方法适用于水产及其加工品中孔雀石绿残留的测定。

无色孔雀石绿人工抗原的制备及免疫原性鉴定

目的用免疫分析法检测水产品中无色孔雀石绿(LMG)的残留,研究LMG人工抗原及其多克隆抗体的制备和鉴定。方法通过混酸硝化还原法对LMG进行改造,获得氨基无色孔雀石绿(NH2-LMG),然后采用改良的碳二亚胺法制备LMG完全抗原。用该人工抗原免疫动物,获得多抗血清。采用酶联免疫法测定抗体效价。选择与LMG结构相似的5种药物进行交叉反应,计算交叉反应率。结果经紫外光谱及电泳法检测,LMG与载体蛋白偶联成功,偶联比为1∶17。利用该抗原免疫小鼠后获得了效价高于104的抗LMG抗体,交叉反应结果表明该抗体有较好的特异性。结论成功合成了LMG人工抗原,为进一步制备LMG单克隆抗体及研究LMG的新型、快速检测方法奠定了基础。