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结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达
被引量:
4
1
作者
陈全
骆旭东
+2 位作者
蒋英
江山
朱道银
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期332-334,340,共4页
目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL...
目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
lhp
基因
CFPIO
下载PDF
职称材料
结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因原核表达载体的构建和表达
被引量:
2
2
作者
陈全
朱道银
+2 位作者
骆旭东
蒋英
江山
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
2003年第3期284-287,333,共5页
目的 :构建结核分枝杆菌 (MTb) 1hp -esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达。方法 :用GeneSOEing法 ,将1hp基因和esat6基因体外重组 ,构建融合基因 ,克隆入pQE30质粒中进行表达。 结果 :构建的融合基因经测序证实完全正确 ,重组体...
目的 :构建结核分枝杆菌 (MTb) 1hp -esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达。方法 :用GeneSOEing法 ,将1hp基因和esat6基因体外重组 ,构建融合基因 ,克隆入pQE30质粒中进行表达。 结果 :构建的融合基因经测序证实完全正确 ,重组体转化表达菌DH5α后 ,经过IPTG诱导 ,表达出 2 6kDa左右的CFP10 -ESAT6融合蛋白。SDS -PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h表达量最高 ,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中 ,表达量占全菌蛋白质的 4 0 % ,Westernblotting证实其有良好的抗原性。表达蛋白经过Ni-NTA柱纯化后 ,获得了纯度为 98%的重组蛋白。结论 :成功构建MTblhp -esat6融合基因 ,成功构建原核表达载体pQE30 -CFP10 -ESAT6 ,并获得重组CFP10 -ESAT6融合蛋白 ,为MTb重组抗原的应用奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
1hp—esat6融合基因
重组CFP10一ESAT6
原核表达
下载PDF
职称材料
题名
结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达
被引量:
4
1
作者
陈全
骆旭东
蒋英
江山
朱道银
机构
重庆医科大学微生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期332-334,340,共4页
文摘
目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。 结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。
关键词
结核分枝杆菌
lhp
基因
CFPIO
Keywords
Mycobacterium tuberculosis (MTB)
lhp gene
recombinant CFP10
分类号
R537.6 [医药卫生—内科学]
R378.2 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因原核表达载体的构建和表达
被引量:
2
2
作者
陈全
朱道银
骆旭东
蒋英
江山
机构
重庆医科大学基础医学院微生物学教研室
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
2003年第3期284-287,333,共5页
文摘
目的 :构建结核分枝杆菌 (MTb) 1hp -esat6融合基因及其原核表达载体并进行表达。方法 :用GeneSOEing法 ,将1hp基因和esat6基因体外重组 ,构建融合基因 ,克隆入pQE30质粒中进行表达。 结果 :构建的融合基因经测序证实完全正确 ,重组体转化表达菌DH5α后 ,经过IPTG诱导 ,表达出 2 6kDa左右的CFP10 -ESAT6融合蛋白。SDS -PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h表达量最高 ,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中 ,表达量占全菌蛋白质的 4 0 % ,Westernblotting证实其有良好的抗原性。表达蛋白经过Ni-NTA柱纯化后 ,获得了纯度为 98%的重组蛋白。结论 :成功构建MTblhp -esat6融合基因 ,成功构建原核表达载体pQE30 -CFP10 -ESAT6 ,并获得重组CFP10 -ESAT6融合蛋白 ,为MTb重组抗原的应用奠定了基础。
关键词
结核分枝杆菌
1hp—esat6融合基因
重组CFP10一ESAT6
原核表达
Keywords
Mycobacterium tuberculosis(MTb)
lhp
-esat6 fusion
gene
Recombinant CFP10-ESAT6
Prokaryotic expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达
陈全
骆旭东
蒋英
江山
朱道银
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
4
下载PDF
职称材料
2
结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因原核表达载体的构建和表达
陈全
朱道银
骆旭东
蒋英
江山
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
2003
2
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职称材料
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